苯丁酸钠体外对YTMLC-90细胞生长的影响

朱 莹,张灿珍,朱 岩,魏永越

1)郑州市中心医院肿瘤科郑州 450007 2)云南省肿瘤医院干疗科昆明 650118 3)江苏省人民医院病理科南京 210029 4)南京医科大学公共卫生学院流行病学与统计学系 南京210029

△女,1980年4月生,硕士,医师,研究方向:肿瘤内科,E-mail:zhuying2@126.com

肺癌是当今世界上对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤[1]。在我国,80%的肺癌为非小细胞肺癌,2/3的患者确诊时即为ⅢB～Ⅳ期,此时,首选的治疗为全身化疗[2],但化疗的毒副反应发生率高,很多患者难以耐受。苯丁酸钠(sodium phenylbutyrate,PB)作为一种广谱的诱导分化新药,在体外对多种恶性肿瘤均有抑制生长和诱导分化的作用,且相对无毒。作者初步观察了 PB对体外人个旧肺鳞癌YTMLC-90细胞生长的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 人个旧肺鳞状细胞癌YTMLC-90细胞购自云南省肿瘤研究所。PB与四甲基偶氮唑蓝(MTT)分别购自美国Alexis公司与Amresco公司。1.2 细胞培养 取YTMLC-90细胞,接种于含体积分数 10%新生小牛血清、100 kU/L青霉素及 100 mg/L链霉素的RPMI 1640培养基(美国Gibco公司),置于体积分数5%CO2、饱和湿度及37℃的培养箱中常规培养,每 2～3 d传代 1次。

1.3 YTM LC-90细胞增殖检测 采用MTT法。将YTMLC-90细胞悬液调整密度为6×104mL-1,分别接种于 96孔板,每孔 200μL,待细胞完全贴壁后分组。对照组:仅培养细胞,不加药;实验组:加浓度分别为250、500、1 000、2 000与4 000 mg/L的PB培养细胞,分别作用 48、72和 96 h后终止药物作用。每孔加入5 g/L的MTT 20μL,继续培养4 h弃上清液,每孔加 150μL二甲基亚砜,振荡混匀 10 min,酶标仪测定波长为570 nm处的吸光度(A)值,抑制率=(1-实验组A值/对照组A值)×100%。每组设 4个平行孔,重复 3次。

1.4 YTM LC-90细胞的细胞周期和凋亡率检测取YTMLC-90细胞分为3组:对照组、500和1 000 mg/LPB组,分别作用48和72 h。每个浓度取3瓶,实验重复 2次。用 2.5 g/L的胰酶消化细胞, RPMI 1640培养基制备细胞悬液;800 r/min离心5 min,弃上清液;0.01mol/L的PBS洗涤,置EP管800 r/min离心5 min,2次;弃上清液,余50～100 μL PBS制成细胞悬液,加入鸡血红细胞(内参)5 μL,破膜剂200μL,摇匀后放置10～20 min;加500 μL碘化丙啶(PI)染液2 mL,避光染色15～20 min;用流式细胞仪检测,检测结果用软件包Wincycle进行分析。

1.5 统计学处理 采用SPSS 11.5行统计学分析。各组间细胞增殖抑制率、细胞周期和凋亡率的比较采用方差分析,两两比较采用SNK-q检验,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 各组YTMLC-90细胞增殖抑制率比较 见表1。

表1 各组YTM LC-90细胞增殖抑制率比较(n=3) %

2.2 各组YTM LC-90细胞周期分布和凋亡率比较见表2。

表2 各组YTM LC-90细胞周期分布和凋亡率比较 %

3 讨论

PB是一种广谱的诱导分化新药,其在体内外对白血病[3]、胶质细胞瘤[4]、宫颈癌[5]、前列腺癌[6]及鼻咽癌[7]等有抑制生长及诱导分化的作用。在不产生限制性临床毒性的前提下,在人体内的血清质量浓度可接近400 mg/L。该实验发现PB在250 mg/L及以上质量浓度对YTMLC-90细胞增殖均有明显的抑制作用,且随 PB浓度的升高,抑制作用有增强的趋势。可能是因为 PB改变了细胞周期的分布,使多数肿瘤细胞停滞于G0/G1期,阻止细胞向S期转化,减少了DNA合成和有丝分裂。

除了能够诱导肿瘤细胞分化、抑制增殖外,体外实验还发现 PB能诱导肿瘤细胞凋亡,并被认为是PB的另一治疗机制[8]。该研究结果显示,PB可诱导YTMLC-90细胞凋亡,表明诱导凋亡是PB抑制肺癌细胞的机制之一。

总之,PB可在体外抑制YTMLC-90细胞增殖和诱导其凋亡,提示 PB对肺癌有潜在的治疗作用。

[1]张天泽,徐光炜.肿瘤学[M].2版.天津:天津科技出版社,2005:1 171

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