复方消经痛胶囊对痛经模型大鼠血清及子宫组织中 MDA、NO、SOD、GSH-PX的影响

李兰芳 解丽君 李国风 郝娜 张勤增 卢树杰 李星 李亚军

复方消经痛胶囊对痛经模型大鼠血清及子宫组织中 MDA、NO、SOD、GSH-PX的影响

李兰芳 解丽君 李国风 郝娜 张勤增 卢树杰 李星 李亚军

目的 探讨复方消经痛胶囊对缩宫素所致大鼠痛经模型的保护作用。方法 SD大鼠 60只,随机分为空白组、模型组、复方消经痛胶囊高、中、低(2.0、1.0、0.5 g/kg)和阳性药对照组(田七痛经胶囊,2.0 g/kg)。除正常对照组外,其余各组大鼠连续皮下注射己烯雌酚 10 d,从注射己烯雌酚的第 4天开始,各组灌胃给药,模型组灌胃等体积的蒸馏水,连续 7 d。末次给药 40min,每只大鼠腹腔注射缩宫素0.2 U,1h后,麻醉大鼠,取血 3ml,分离血清,迅速剥取子宫制备匀浆,分别测定血清和子宫匀浆中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。结果

复方消经痛胶囊能明显提高血清和子宫组织匀浆中 SOD、GSH-PX的活性,降低MDA含量;并能提高血清和子宫匀浆中 NO的含量。结论 复方消经痛胶囊通过增加大鼠血清和子宫组织中 SOD、GSH-PX的活性;提高NO含量,降低MDA含量,调节体内生物信息失衡,进而缓解痛经,对大鼠原发性痛经有保护作用。

复方消经痛胶囊;催产素;NO;SOD;MDA;GSH-PX;大鼠;痛经

复方消经痛胶囊由黄芪、白芍、人参、熟地、川芎等中药组成。主要用于治疗原发性和部分原因引起的继发性痛经。前期研究表明,该胶囊对催产素诱发的大鼠和小鼠痛经模型具有很好的镇痛作用[1];可明显抑制大鼠正常离体子宫的收缩频率、幅度、活动力;能降低由于缩宫素引起的大鼠离体子宫收缩增强作用;能降低在体家兔子宫的收缩频率、幅度、活动力;同时能对抗缩宫素引起的家兔在体子宫收缩增强作用[2]。为了探讨了该药治疗原发性痛经的作用机制,进行了如下实验研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雌性 SD大鼠 60只,体重 150～180g,由河北医科大学动物中心提供,许可证号：SCXK(冀)2003-1-003,合格证编号：706017。

1.2 药品 复方消经痛胶囊,由河北省医学科学院药物研究室研制(批号：200207102)。内容物为棕黑色粉末,每克相当于原生药 5.74 g。田七痛经胶囊,广州敬修堂(药业)股份有限公司生产(批号：01220619)。缩宫素针剂,上海子能制药有限公司生产(批号：010708)。己烯雌酚,天津金耀氨基酸有限公司生产。

1.3 试剂 一氧化氮试剂盒(批号：20070203),由南京建成生物工程研究所提供。谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒(批号：20070612);考马亮斯兰蛋白测定试剂盒(批号：20070613);SOD试剂盒(批号：20070321);MDA试剂盒(批号：20070611),均由南京建成生物工程研究所第一分所提供。

1.4 仪器 722分光光度计,上海第二分析仪器厂生产;METTLER AE240型电子天平,梅特勒仪器上海有限公司;TDL-5-A型台式离心机,上海安亭科学仪器厂;CS-6R型低温离心机,美国贝克曼公司;电动匀浆器,Silont crusher M,德国Heidelph公司。

1.5 实验方法 将体重 150～180 g雌性 SD大鼠 60只随机分为 6组,即对照组、模型组、田七痛经胶囊组(2.0g/kg)、复方消经痛胶囊高、中、低剂量组(2.0 g/kg、1.0 g/kg、0.5g/kg),每组10只。除对照组外,其余各组大鼠连续皮下注射己烯雌酚10天(第 1天、第 10天 2天皮下给予 0.8mg/只,第 2天到第 9天给予 0.4mg/只)。在注射己烯雌酚的第 4天开始给药,各组均灌胃给药,1次/d,连续 7 d。模型组和对照组给于等体积的蒸馏水。实验过程中,所有大鼠自由饮水摄食,实验开始和结束各称量体重 1次。最后 1次灌胃 40min后,每只大鼠腹腔注射缩宫素 0.2U,1 h后,大鼠腹腔注射20%乌拉坦(3.0ml/kg)麻醉后,腹主动脉取血 3m l,制备血清,测定血清中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶的活性。迅速剥离子宫,用电子天平精密称取0.5 g左右,加 0.9%氯化钠溶液制备成 10%子宫组织匀浆,离心后按试剂盒说明书要求分别测定NO和 MDA含量以及SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。

2 结果

2.1 对大鼠血清及子宫组织中SOD活性的影响 与对照组比较,模型组血清和子宫组织匀浆中的 SOD活性降低(P＜0.01),与模型组比较,复方消经痛胶囊高、中、低剂量组均使血清中 SOD的活性显著升高(P＜0.05),同时使子宫匀浆中SOD的活性明显升高(P＜0.05),田七痛经胶囊能使血清中SOD的活性明显升高(P＜0.05),也能升高子宫匀浆中 SOD的活性,但差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 1。

表1 对大鼠血清及子宫匀浆中 SOD活性的影响n=10,±s

表1 对大鼠血清及子宫匀浆中 SOD活性的影响n=10,±s

注：与模型组比较,＊P＜0.05;与对照组比较,#P＜0.01

组别 剂量(g/kg)血清SOD(U/ml)子宫匀浆 SOD(U/mgprot)对照组 - 100±59 74±19模型组 - 157±65# 44±24#田七痛经胶囊组 2.0 111±64＊ 62±30高剂量组 0.5 128±56＊ 73±29＊中剂量组 1.0 124±54＊ 72±24＊低级量组 2.0 133±70＊ 73±30＊

2.2 对大鼠血清及子宫组织中 GSH-PX酶活性的影响 与对照组比较,模型组血清和子宫组织中 GSH-PX酶活性降低(P＜0.05或 ＜0.01),与模型组比较,复方消经痛胶囊高、中、低剂量均使大鼠血清中 GSH-PX酶活性显著升高(P＜0.05),同时使子宫组织中GSH-PX酶活性显著升高(P＜0.01或＜0.05)。田七痛经胶囊亦能使大鼠血清和子宫匀浆中 GSH-PX酶活性显著升高(P＜0.05或 ＜0.01)。见表 2。

表2 对大鼠血清及子宫匀浆中 GSH-PX活性的影响n=10,±s

表2 对大鼠血清及子宫匀浆中 GSH-PX活性的影响n=10,±s

注：与对照组比较,＊P＜0.01,#P＜0.05;与模型组比较,△P＜0.05,☆P＜0.01

组别 剂量(g/kg)血清GSH-PX(酶活力单位)子宫匀浆 GSH-PX(酶活力单位)对照组 - 874±164 70±16模型组 - 364±120# 55±18＊田七痛经胶囊组 2.0 794±221△ 103±42☆高剂量组 0.5 716±302△ 81±21☆中剂量组 1.0 582±110△ 73±10△低级量组 2.0 597±144△ 65±14△

2.3 对痛经大鼠血清及子宫组织中 MDA含量的影响 与正常组比较,模型组血清和子宫组织中MDA含量显著增高(P＜0.05或 ＜0.01),与模型组比较,复方消经痛胶囊高、中、低剂量均使大鼠血清 MDA的含量显著降低(P＜0.05),同时使子宫组织中 MDA的含量显著降低(P＜0.05或 ＜0.01)。田七痛经胶囊亦能使大鼠血清和子宫匀浆中 MDA的含量显著升高(P＜0.05或 ＜0.01)。见表 3。

表3 对大鼠血清及子宫匀浆中 MDA含量的影响n=10,±s

表3 对大鼠血清及子宫匀浆中 MDA含量的影响n=10,±s

注：与对照组比较,＊P＜0.01;与模型组比较,#P＜0.05,△P＜0.01

组别 剂量(/g/kg)血清MDA(nmol/m l)子宫匀浆MDA(nmol/mgprot)对照组 - 3.8±1.6 9.6±5.4模型组 - 7.8±1.0＊ 18.5±10.6＊田七痛经胶囊组 2.0 5.9±1.5△ 10.6±2.8#高剂量组 2.0 5.9±2.0△ 7.9±2.1#中剂量组 1.0 5.8±1.3△ 7.7±1.4#低剂量组 0.5 5.6±1.7△ 9.7±5.0#

2.4 对痛经大鼠血清及子宫组织中 NO含量的影响 与对照组比较,模型组血清和子宫组织中 NO含量显著降低(P＜0.05),与模型组比较,复方消经痛胶囊高、中、低剂量组血清中NO的含量显著升高(P＜0.01),高、中剂量组子宫组织中NO的含量明显升高。田七痛经胶囊亦能使大鼠子宫匀浆中NO含量显著升高(P＜0.05)。见表 4。

表4 对大鼠血清及子宫匀浆中 NO含量的影响n=10,±s

表4 对大鼠血清及子宫匀浆中 NO含量的影响n=10,±s

注：与对照组比较,＊P＜0.05;与模型组比较,#P＜0.05,△P＜0.01

组别 剂量(g/kg)血清NO(μmol/L)子宫匀浆 NO(μmol/gprot)对照组 - 53±20 5.0±3.1模型组 - 33±12＊ 2.5±2.5#田七痛经胶囊组 2.0 53±10 3.2±1.2#高剂量组 2.0 132±28△ 5.0±1.2△中剂量组 1.0 76±23△ 5.0±3.8#低剂量组 0.5 62±14△ 3.2±2.8

3 讨论

在本实验中观察到,由缩宫素造成的痛经模型大鼠血清和子宫匀浆中抗氧化酶的活性下降,MDA的含量升高。同时血清和子宫匀浆中 NO的含量均下降。对于这种影响的解释已有众多的报道[3-5]。月经期间,子宫平滑肌阵发性的收缩导致肌间血管受压而出现子宫肌层及内膜的暂时缺血,从而形成较多的活性氧(OFR)。正常情况下,细胞内有自由基清除剂,使氧自由基转化为过氧化氢,后者通过GSH-PX酶的作用还原为水分子。痛经时各种抗氧化酶活性相应降低,由此激起自由基的连锁、增生反应,形成一系列的脂质自由基及其降解产物,从而进一步引起细胞膜的流动性降低,通透性增高,线粒体肿胀,溶酶体破坏及溶酶体酶的释放,更进一步加重了子宫内膜的损伤,使痛经发生并加剧。本实验结果表明复方消经痛胶囊可以明显增强血清中 SOD和GSH-PX酶活性,减少自由基及其降解产物—MDA的含量,消除了机体内的过氧化氢及脂质过氧化物,阻断活性氧自由基对机体的进一步损伤,调节子宫内膜缺血时细胞内的氧化应激状态,保护生物膜,包括细胞膜、细胞器膜上多烯脂肪酸、细胞骨架及其他蛋白质免受自由基攻击。从而达到治疗或缓解痛经的作用。

NO是一种具有多种生物功能的气体分子,参与痛经的发生过程[6]。NO可通过作用于子宫中左旋精氨酸-NO-环磷鸟苷(CGMP)系统,调节子宫收缩性。NO参与外周及中枢水平的痛觉调制[7],在外周作用于不同的靶细胞,通过NO-CGMP途径表现为致痛和镇痛双重作用,这种双重作用决定于局部NO的生成量,NO生成减少时可促进伤害性信息传递产生疼痛,生成量增多时,则起抑制作用而镇痛。本研究结果表明,痛经模型大鼠子宫匀浆和外周血液中 NO含量降低,提示痛经模型大鼠内源性 NO合成和释放减少,使 NO介导的生物信息传递异常,血管活性物质调节失调,导致内皮功能失常,引起疼痛[7]。复方消经痛胶囊使大鼠血液和子宫组织中 NO含量升高,调节了内皮细胞功能,同时扩张子宫血管平滑肌,扩张血管、改善微循环的作用,有助于恢复缺血组织的血液供应,减轻疼痛症状。这可能是复方消经痛胶囊治疗痛经的机制之一。

1 李国风,李兰芳,郝娜,等.复方消经痛胶囊镇痛抗炎作用研究.时针国医国药,2007,18：13-14.

2 李兰芳,张建新,郝娜,等.复方消经痛胶囊对动物子宫活动的影响.中国中药杂志,2007,32：843-846.

3 裴培田,姚凝.舒经玫瑰胶囊对小鼠原发性痛经血清中谷胱甘肽过氧化物酶及一氧化氮的影响.中国药物与临床,2005,5：24-25.

4 徐小娟,金沈锐.不同比例芍药甘草汤对痛经大鼠子宫组织内皮素和一氧化氮的影响.中国中医药信息杂志,2004,11：973-974.

5 裴培田,王昕,赵一梅,等.舒经玫瑰胶囊对小鼠原发性痛经 MDA、Ca2+的影响.中国中医药信息杂志,2003,10：31-32

6 彭芝配,腾久祥,党海珍,等.九气拈痛胶囊对催产素所致痛经大鼠镇痛作用机制的研究.湖南中医学院学报,2005,25：7-10

7 田令华,王晓民,韩济生.一氧化氮与痛觉调制.生理科学进展,1996,27：161-164.

Effects of compound Xiaojingtong capsuleon M DA,NO,SOD,GSH-PX in b lood serum and uterus tissue of rats with dysmenorrhea induced by oxytocin

LILanfang,XIE Lijun,LIGuofeng,etal.Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China

Ob jective To investigate the protective effectof com pound Xiaojingtong capsule(CXJTC)on oxytocin-induced dysmenorrhea in rats.M ethods Sixty rats were random ly divided into control group,dysmenorrhea model group,high-dose(2.0g/kg),m idd le-dose(1.0g/kg)and low-dose(0.5g/kg)CXJTC groups,and Tianqi Tongjing capsule(TQTJC)group(2.0g/kg).Diethylstilbestrol was continuously administrated by subcutaneous injection,once a day for 10 days in rats ofallgroups except for the rats in control group.CXJTCwas adm inistrated by intragastric mode for 7 days in rats of all CXJTC groups and distillated water was instead for the rats inmodel group.The administration of oxytocin(0.2U)was carried on in every rat at 40 m in after lastadministration.The ratswere anesthetized atonehourafter administration of oxytocin.The blood was taken and the uterus was dissected and homogenated formeasurement of concentration of NO and MDA,and the activities of SOD and GSH-PX in serum and homogenate of uterus were detected.Results As compared with those inmodel group,the activities of SOD and GSH-PX were obviously increased,and the concentration of NO was increased too,however,the concentration of MDAwas decreased in serum and homogenate of uterus in CXJTC group.Conclusion CXJTC has a protective effecton rats with dysmenorrhea induced by oxytocin,and the effects may be caused by increasing the concentration of NO,and the activities of SOD and GSH-PX,and by decreasing the concentration ofMDA.

compound Xiaojingtong capsule;oxytocin;NO;SOD;MDA;GSH-PX;rats;dysmenorrhea

R 984

A

1002-7386(2010)05-0530-03

项目来源：河北省科学技术研究与发展攻关计划项目(编号：04276101D-50)

050021 石家庄市,河北省医学科学院(李兰芳、解丽君、李国风、郝娜、张勤增);河北省中药注射剂工程技术研究中心(卢树杰);河北医科大学药学院实习生(李星、李亚军)

2010-01-13)