GC法同时测定疗筋涂膜剂中冰片和薄荷脑的含量

李得堂， 唐洪梅*， 蔡庆群， 张丽娟， 何嘉仑

(1.广州中医药大学第一附属医院，广东 广州510405;2.广州中医药大学附属中山市中医院，广东 中山528400;3.广州中医药大学，广东广州510405)

疗筋涂膜剂由大黄、两面针、冰片、薄荷脑等中药组成，具有活血祛瘀、消肿止痛的功效。主要用于外伤性疾病和风湿性疾病。处方中冰片(合成龙脑)是一味常用药，具有清热、消肿、止痛等功效，薄荷脑可用于皮肤或黏膜产生清凉感以减轻不适及疼痛。且冰片、薄荷脑一定量可以增加涂膜剂中有效成分的透皮吸收［1］。冰片(合成龙脑)主要成分是互为异构体的龙脑和异龙脑，其化学结构无特征紫外吸收，薄荷脑为薄荷素油中得到的一种饱和的环状醇，因此气相色谱法是测定这类化合物较好方法。本实验建立GC法同时测定疗筋涂膜剂中冰片，薄荷脑的含量，方法简便，杂质无干扰，分离效果好，结果准确，可作为该制剂挥发性成分质量控制的方法之一。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Angilent 6890N GC色谱仪;FID检测器，载气为高纯氮气(99.999%)Angilent Chemstation工作站(美国Angilent公司)，超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，恒温干燥箱(北京市朝阳区来广营医疗器械厂)，DK-S24型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设备有限公司)，电子分析天平(SARTORIUS AG GOTTINGEN Germany BP211D)。

1.2 试药 疗筋涂膜剂(制剂室自制);水杨酸甲酯对照品供含量测定用(批号:110707-200609，中国药品生物制品检定所);薄荷脑对照品供含量测定用(批号:110728-200506，中国药品生物制品检定所);冰片对照品供含量测定用(批号:110743-200504，中国药品生物制品检定所);其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:HP-5(0.53 mm×30 m×1 μm)石英毛细管色谱柱，柱温:50℃(1 min)以10℃/min速率升到80℃(5 min)，再以10℃/min升到130℃(3 min)，载气:氮气1.0 mL/min;燃气:氢气30 mL/min为;助燃气:空气300 mL/min;尾吹气:氮气25 mL/min，进样口温度:230℃，FID检测器温度:250℃。进样量:1 μL，分流进样，分流比10∶1，理论板数按龙脑峰计算应不低于1 900;冰片、薄荷脑和水杨酸甲酯与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。

2.2 内标溶液的制备 精密称取水杨酸甲酯1 000 mg，置50 mL的量瓶中，用乙酸乙酯定容。精密吸取1 mL置于5 mL量瓶中，用乙酸乙酯定容备用。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷减压干燥的冰片对照品58.915 mg、薄荷脑对照品25.495 mg，置于10 mL量瓶中，用乙酸乙酯定容，作为冰片、薄荷脑的混合对照品贮备液，再分别精密量取上述对照品贮备液各1 mL置于10 mL量瓶中，精密加入1 mL内标溶液，用乙酸乙酯定容。

2.4 供试品溶液的制备 取本品约0.6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯10 mL，精密称定重量，超声10 min，放冷，再精密称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，静置10 min，滤过。精密量取续滤液2 mL，置5 mL量瓶中，精密加入1 mL内标溶液，用乙酸乙酯定容。

2.5 方法的专属性考察 按处方比例制成缺冰片、薄荷脑阴性对照，照供试品制备方法制备缺冰片、薄荷脑阴性样品溶液，精密吸取溶液1 μL，照2.1项下色谱条件测定，结果见图1。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱上在此保留时间无干扰。

图1 对照品(A)、缺冰片阴性(B)、缺薄荷脑阴性(C)、缺冰片和薄荷脑阴性(D)、样品(E)GC色谱图

2.6 线性关系考察 精密吸取混合对照品贮备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分别置于 5 mL 量瓶中，各精密加入内标溶液1 mL，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1 μL，注入气相色谱仪测定，由对照品浓度(X)与对照品峰面积/内标峰面积之比值(Y)进行回归，得回归方程，冰片:Y=0.333 4X－0.019 9，r=0.999 8;薄荷脑:Y=0.342 5X－0.004 9，r=0.999 7。结果表明冰片和薄荷脑依次在1.178 3～5.891 5 mg/mL，0.509 9～2.549 5 mg/mL浓度范围内线性关系良好，注:冰片峰面积以龙脑和异龙脑峰面积之和计算。

2.7 精密度试验 取同一批供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样5次，进行测定，分别计算冰片和薄荷脑的含量，结果RSD分别为1.17%和1.84%。

2.8 稳定性试验 取同一批供试品溶液，按上述色谱条件，间隔一定时间(0、2、4、8、12、24 h)进样测定，分别计算冰片和薄荷脑的含量，结果RSD分别为1.52%和2.48%。

2.9 重复性试验 取同一批号样品5份，按照含量测定项下方法制备5份供试品溶液，按2.1项下色谱条件，进行测定，分别计算冰片和薄荷脑的含量，结果RSD分别为1.96%和2.49%。

2.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品约0.30 g，分别精密加入一定量的冰片和薄荷脑对照品，按上述样品制备方法制备加样回收供试品溶液，平行操作6份，按照上述2.1项下色谱条件测定并计算其回收率，结果见表1、2。

表1 冰片加样回收率试验结果(n=6)

表2 薄荷脑加样回收率试验结果(n=6)

2.11 样品的测定 取3批疗筋涂膜剂按2.4项下筛选的方法制备供试品溶液，按上述2.1项下色谱条件测定，通过回归方程计算，结果见表3。

表3 样品测定结果(n=3)

3 讨论

因冰片，薄荷脑具有挥发性，在常温下不稳定，生产过程中容易损失，因此含量测定中选用冰片，薄荷脑为指标，故选用GC法对其进行含量测定。中国药典已收载了冰片的含量测定方法，用此色谱条件测定冰片含量，冰片中龙脑峰和薄荷脑峰分离度达不到要求，本试验比较了不同柱温:140℃恒温(中国药典2005版冰片含量测定方法)［2］、初始温度110℃以7℃/min升温至200℃、初始温度80℃以10℃/min升温至130℃、初始温度80℃以10℃/min升温至120℃，再以2℃/min升温到130℃、初始温度80℃(2 min)以10℃/min升温至130℃(1 min)，再以2℃/min升温到140℃(1 min)、初始温度80℃(5 min)以10℃/min升温至130℃(5 min)、初始温度50℃(1 min)以10℃/min升温至80℃(5 min)，再以10℃/min升温到130℃(3 min)，分离效果以最后一个程序升温方法最好，故选择柱温为初始温度50℃(1 min)以10℃/min升温至80℃(5 min)，再以10℃/min升温到130℃(3 min)。

内标物筛选试验结果，以水杨酸甲酯为内标物较为理想，且阴性对照无干扰。

本制剂制法中冰片、薄荷脑为直接加入，本试验供试品制备中的提取方法选择为超声提取［3-4］，文献报道超声15 min测定含量最高，经过反复实验，比较超声提取时间 5、10、15、20、30 min，发现超声提取5 min含量不再有增加的趋势，为确保各个厂家产品冰片、薄荷脑均有良好溶出，故选择超声10 min。

冰片(合成龙脑)含有龙脑和异龙脑，2005年版中国药典中冰片(合成龙脑)的含量以龙脑计，而其他文献［5-7］也参照药典方法，将冰片(合成龙脑)的含量以龙脑计，笔者认为以此方法无法完全反映冰片质量，应以冰片计更为合理。有文献报道［8］比较以龙脑和异龙脑的总量计与以冰片计的含量测定结果差异，发现具有一致性(CV=0.3%)，故本试验方法选用冰片为对照品，含量以冰片计。

［1］李得堂，唐洪梅，丘振文，等.促渗剂对疗筋涂膜剂中芍药苷经皮渗透的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2009，15(3):62-65.

［2］中国药典［S］.一部.2005:98.

［3］管玉云，程 正.气相色谱法测定妇炎灵胶囊中樟脑和冰片的含量［J］.中国医院药学杂志，2007，27(1):74-75.

［4］陆海涛，刘小红.气相色谱法测定马应龙麝香痔疮膏中龙脑的含量［J］.中国医院药学杂志，2005，25(4):335-336.

［5］王爱民，黄 勇，王永林，等.大口径毛细管柱气相色谱法测定菊黄上清含片中龙脑的含量［J］.中国中药杂志，2006，31(2):159-160.

［6］范 斌，柏 冬，刘 泓，等.气相色谱法测定艾奇康胶囊中龙脑的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2009，15(6):15-17.

［7］薛东升，荆树中，宋庆宏.气相色谱法测定双清注射液中冰片的含量［J］.中成药，2008，30(5):780-782.

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