梯度离心法与标准上游法在宫腔内人工授精(IUI)中应用比较*

刘灿华 张 斓 陈 铭 王 琪

(吉安市中心人民医院检验科,江西 吉安 343000)

宫腔内人工授精(intrauterine insemination, IUI)是将精液在体外进行处理，使精子优化、获能，然后用导管将精子悬液注入宫腔内以获得妊娠助孕的目的。是目前临床上常用的辅助生殖技术之一，适用于宫颈因素所致的不孕，不明原因性不孕或轻、中度子宫内膜异位症，免疫性不孕和男方精液异常，如少、弱精症、精液液化不良、抗精子抗体阳性等。精液体外处理的方法有很多种，目前尚未找到公认的最佳方法。本研究对2006年1月至2009年12月在我院生殖医学门诊进行IUI患者的临床资料进行回顾性对比、分析，根据不孕患者精液情况找到最适精液处理方法，提高IUI的临床妊娠率。

1材料与方法

1.1临床资料 选取在本院06年1月至09年12月72例夫精宫腔内人工受精(IUI) 患者，共156个周期为研究对象，年龄25～42岁，平均(28.5±4.5)岁，原发性不孕42例，继发性不孕30例，不孕时间2～10年。不孕原因：男性因素(少、弱精，心理因素，射精功能异常，液化异常，免疫性因素)50例，女性因素(轻、中度子宫内膜异位症，宫颈黏液分泌异常，免疫性因素)20例，不明原因性不孕2例。根据患者精液质量情况，接受IUI时选择的精液处理方法分成两组。其中90个周期采用梯度离心法处理精液为一组， 66个周期采用标准上游法处理精液为另一组。

1.2设备与试剂 WLJY-9000伟力彩色精子分析仪、超净工作台(苏州净化)、水平离心机、二氧化碳培养箱、10%SSS、Isolate精子分离液等。

1.3处理方法

1.3.1精液的采集 禁欲3～5天，在IUI日手淫法留取整份精液在无毒性一次性取精杯中，放入37℃恒温培养箱中等精液完全液化后处理。

1.3.2精液的处理

标准上游法：取试管数支，每管加入2.0 ml精子培养液。再分别将0.5ml液化精液慢慢加入试管底部，使其形成两个界面。加盖，45°倾斜，置于37℃、5%CO2孵箱中30～60分钟。收集各管上清液，离心200 g×5分钟，弃上清液，加2 ml培养液，打允后离心200 g×5分钟。留沉淀物，加0.5ml培养液制成精子悬液，调整精子浓度10×10～30×106/ml备用。

Isolate密度梯度离心法：向锥底离心试管内分别加入Lower phase和Upper phase各1 ml、精液2 ml，300 g×20分钟，弃上清液，留沉淀物，加2 ml洗精液，打匀后，离心200 g×5分钟，重复洗涤2次后，弃上清液。留沉淀物，加0.5 ml培养液制成精子悬液备用。

1.4受精方法 受精时取膀胱截石位，用生理盐水擦洗外阴、阴道及宫颈，抬高臀部，用Tom,s管将处理好的精子悬液0.5 ml缓慢注入宫腔内，导管应插入宫颈内5～6 cm，避免损伤和出血，患者原位仰卧休息30分钟。分别在排卵前后各受精一次。

1.5黄体支持与妊娠 所有接受IUI妇女术后均接受黄体支持。术后14天抽血做HCG检测，阳性为生化妊娠，IUI后5周B超检查发现孕囊和原始心管搏动，确诊为临床妊娠。

1.6统计学方法

采用χ2检验和t检验

2结 果

两组精液处理方法在处理前、后精子密度、活率、活力比较见表1，两组妊娠率比较见表2。

表1 处理前、后精子密度与活率及活力(a+b)比较 周期

表2 两种方法处理后妊娠率比较

注:经χ2检验,P>0.05,与标准上游法比较,经t检验,P<0.05

3 讨 论

精液体外处理的目的就是要提高精子的密度和活力，适当控制精子总数，减少和去除精浆内的前列腺素、炎症细胞、抗精子抗体等不良成分，促进精子获能，改善精子受精能力[3]。

随着辅助生殖技术的迅速发展，精液体外处理的方法也越来越多，每一种方法都有它的优缺点。标准上游法是利用精子具有主动游过液体界面进入不同培养液的能力，而达到自行与死精、凝集精子、畸形精子和细胞杂质分离的目的。获得的精子活力、活率较高，达90%以上。但却存在精子回收率较低的缺点,仅适用于精子活动力、密度均正常的患者。而Isolate密度梯度离心法则是利用不同成熟阶段的精子和各种细胞成分各自的密度差异，使之在不同浓度的溶液中，在离心力作用下停留在不同密度的界面上，达到较好的分离目的，处理后精子数回收较高[1]，处理的时间短，但由于离心时间长，可能对精子造成物理损伤如：顶体的松动或不完整等，处理后死精子相对标准上游法多，回收的精子活动率较标准上游发低，可能引起精子受精功能下降等。

人工授精妊娠成功的关键之一在于把握好受精时间，同时根据不孕患者精液情况，采用不同的处理方法优化精液[2]，标准上游法和Isolate密度梯度离心法是本实验室常用的两种方法，虽然两种精液处理方法的临床妊娠率是相似的，在今后的工作中，要根据不孕患者精液情况，采用相应的处理方法，以提高临床妊娠率，更好地为患者服务。

[1] 邓晓惠. 生殖医学技术及其彩色图谱[M].济南;山东科学技术出版社,2004.45.

[2] 曹金凤.赵志明.左一鹏.宫腔内人工授精278例[J].中国优生与遗传杂志,2004,12(2);63-64.

[3] 江峰，王益鑫，盛新福，等. 精液体外处理方法的选择[J].中国男科学杂志，2000，14(2):134.