金标法快速检测ＨＢｓＡｇ漏检分析

胡晓静

[摘要] 目的:早期发现健康人群乙型肝炎感染状况,对疑似病例进行乙型肝炎病毒抗体检测,为能够更好更快地检测HBsAg作出诊断。方法:金标法检测后ELISA 法初、复检检测确认的阳性血液标本,并确定金标法漏检病例。结果:对36例初、复检HBsAg都为阳性。金标试纸条检测出阳性34份,漏检率为5.56%。而ELISA 法检测出阳性36份,阳性率为100%。结论:从HBsAg金标法试纸的灵敏度看,HBsAg试纸只能作为初筛试剂,初检和复检试剂采用ELISA 法,以防止HBsAg 漏检的发生,保证检测结果的真实性,避免输血与HBsAg携带者传播疾病的发生。

[关键词] 金标法;快速检测HBsAg;漏检分析;乙型肝炎病毒

[中图分类号]R446.6 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)08(b)-069-02

目前检测HBsAg一般采用ELISA法,其实验条件要求较为严格, 操作程序较为复杂,费时较长。快速HBsAg 全血金标试条(简称金标法)具有较高的灵敏度和较好的特异性,且用血量少,操作简便快速,结果便于观察,是一种较理想的检测HBsAg 初筛试剂,现发现金标法对36例患者进行HBsAg初筛,发现存在一定的漏检。为了解漏检原因,对ELISA 法确诊的36份血液, 金标法进行检测,ELISA 法复检,根据检测结果,并检测HBsAg结果进行比较,观察反应时间及准确性,但金标法与ELISA 检测结果存在不相符现象,现报道如下:

1材料与方法

1.1研究对象

对36例初、复检都为阳性,而一种金标法试纸检测均为阴性的标本进行分析。

1.2试剂

HBsAg 金标试纸条,ELISA 试剂,均为厦门新创公司出品;HBsAg系列定值血清,购自卫生部临床检验中心。灵敏度分别为1 ng/ml和0.12 ng/ml。复检ELISA试剂为北京万泰药业有限公司生产, 灵敏度为0.12 ng/ml。

1.3方法

HBsAg 金标法,取指尖末梢血60 μl 滴于试纸条箭头下方的垫片上,观察结果严格按说明书进行操作。ELISA 法严格按说明书进行操作。经两次ELISA 法初、复检检测后确认的阳性血液标本,最后确系“金标法漏检”确认漏检的原因,进行分析。

2结果

对36例初、复检HBsAg均为阳性病例。ELISA 法检测出阳性36份,阳性率为100%。金标试纸条检测出阳性34 份, 阳性率为94.44 %。再次用ELISA 法检测均为阳性。如以ELISA法双结果为准,金标法初筛HBsAg总漏检率共2例,漏检率为5.56%。同时金标法检测样本阳性反应时间,与温度的影响等多方面因素影响,有1例患者被检测出阳性。金标法HBsAg总漏检率1例,漏检率为2.78%,外界因素导致漏检率同样为1例。

3讨论

我国是乙肝病毒的高流行区,约10% 的人群为HBsAg 携带者, 广西则达到15% 左右。金免疫层析试验的原理是在玻璃纤维素膜上预包被金标抗HBsAg 抗体(Au2sAb1) ,硝酸纤维素膜上预包被金标抗HBsAg 抗体(sAb2) 和羊抗鼠IgG。检测时,样品血清中HBsAg 可与胶体金2抗体结合形成复合物,由于层析作用复合物沿纸条向前移动。如为阳性标本,则与检测线预包被的抗体结合形成“Au2sAb12HBsAg2sAb2”夹心物而凝聚显色。全血金标试纸在试纸条上加过滤膜以阻止血细胞的渗透。金标法检测HBsAg,反应时间较短且只需30 μl末梢血,不必做静脉血分离血清,减少血液离心提取血清的过程。金标试纸法与ELISA 法比较, 具有较高的符合率, 较好的特异性,无假阳性现象,且操作简便快速, 结果易于观察, 同时不受仪器设备及血样限制,便于携带,出现假阴性率为2.78%,同时其他原因导致金标法存漏检率为2.78%,现分析原因可能是:①试剂的灵敏度。全血金标试剂的灵敏度为1 ng/ml ,而ELISA 试剂的灵敏度可达0.5 ng/ml ,这可能是造成ELISA 法检测为弱阳性的标本而金标法检测为阴性的原因。②操作人员未能按照试剂说明书要求的时间报告结果,人为缩短了检测时间,从而造成检测线不明显的弱阳性遗漏而误判。③实验人员操作不规范,如加样过多或过少,未及时将没用完的试纸条密封保存而导致潮解。④少数标本可能存在乙型肝炎病毒(HBV) 变异或亚型而不易检出。⑤高温、干燥、风吹均能影响实验结果。现报告其他原因导致金标法存漏检率与金标法存漏检率相同。因此, HBsAg 快检的假阴性也可能由人为因素及环境因素造成[4],如判断结果时间不够、反应不充分、气温低(克服方法是冬天注意保温或延长反应时间) ;加血量不足或过多;过滤膜破损, 血液渗出过滤膜使检测线模糊,导致判断失误;判断不仔细,对那些隐约可见的阳性线误判为阴性; 缺乏经验把强阳性结果(只有1条阳性线, 无阴性线) 判为阴性等。因此,工作人员应规范操作步骤,避免人为因素造成的假阴性结果,以减少初筛时的漏检,减少血液浪费, 减少经济损失。从目前HBsAg金标法试纸的灵敏度看,HBsAg 试纸只能作为初筛试剂,初检和复检试剂采用ELISA 法,以防止HBsAg 漏检的发生,保证检测结果的真实性,避免输血与减少HBsAg携带者传播疾病的发生。

[参考文献]

[1]孟宪军,史志旭.徐州市无偿献血初检复检结果分析[J].中国输血杂志,1996, 9 (4):212.

[2]周继文.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原[J].中华检验医学杂志,1998,21(1):30.

[3]徐进春.快速金标法检测HBsAg漏检原因的分析[J].中国输血杂志,2001,14 (3):166.

[4]柏亮,郑拉让.宝鸡市2次以上无偿献血金标法HBsAg初筛结果[J].临床输血与检验,2006, 8(1):50.

[5]吴海裘,潘明宽.斑点金免疫法检测HBsAg[J].临床检验杂志,1996,14 (3):1371.

(收稿日期:2008-12-12)