ｈＭＳＨ２、ｐ５３及ＰＴＥＮ在宫颈癌组织中的表达及意义

苏　红　李　梅　王秀莹　吕　申

[摘要]目的：探讨宫颈癌组织中hMSH2、p53及PTEN蛋白表达的关系及意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测54例宫颈癌中的hMSH2、p53及PTEN蛋白表达。结果：①宫颈癌组织中，hMSH2、p53蛋白阳性表达率分别为62.96%、66.67%，PTEN蛋白缺失表达率55.56%。②在hMSH2阳性表达的宫颈癌患者中，p53蛋白阳性表达率为76.47%、PTEN蛋白缺失表达率为52.94%。hMSH2与p53表达呈正相关（P＜0.05）。 结论：宫颈癌组织中，p53基因突变与错配修复基因的功能缺陷有关。

[关键词] 宫颈癌；hMSH2；P53；PTEN；免疫组织化学

[中图分类号] R737.3 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721（2009）05（a）-014-02

Expressions of hMSH2、p53 and PTEN in cervical cancers and its significance

SU Hong1，LI Mei2, WANG Xiuying3, LV Shen2*

(1.Department of Gynaecology and Obstetrics, the Second Affiliated Hospital, Dalian Medical University, Dalian116027, China； 2. Central Laboratory, the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian116027, China；3. Department of Gynaecology and Obstetrics, Dalian Maternity Hospital，Dalian116021, China)

[Abstract] Objective: To disscuss the relationship ofhMSH2、p53 and PTEN protein expression in cervical cancers and its significance. Methods: Immunohistochemistry was used to examine the proteins expression of hMSH2，p53 and PTEN in 54 cases of cervical cancers. Results: ①In cervical cancer, the positive expression rates of hMSH2 and p53 protein were 62.96% and 66.67%. The lack expression rate of PTEN is 55.56%. ②In the cervical cancer cases of hMSH2 positive expression, the positive expression rate ofp53 and the lack expression rate of PTEN were 76.47% and 52.94%. hMSH2 and p53 protein expression was positively correlated (P<0.05). Conclusion: Interaction between mismatch repair gene defect and p53 gene mutation may be related to the carcinogenesis of cervical cancer.

[Key words] Cervical cancer；hMSH2；p53；PTEN；Immunohistochemistry

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤中居第二位，其发病机制目前尚不清楚。目前认为，肿瘤是细胞多种基因突变累积的结果。这些基因突变主要发生在原癌基因、抑癌基因和DNA错配修复基因， hMSH2是第一个被发现的人类错配修复基因。p53已经证实是与人类肿瘤相关性最高的基因[1]。PTEN基因(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten，PTEN)是一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。本研究通过免疫组织化学法检测54例宫颈癌的hMSH2、p53及PTEN蛋白表达，探讨宫颈癌中hMSH2表达与p53、PTEN的关系及意义。

1资料与方法

1.1一般资料

选取大连妇产医院2000～2002年收治的54例宫颈癌手术病例。患者年龄为22～78岁，中位年龄39.5岁。所有标本均经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，制成3～4 μm切片，HE 染色，由两位有经验的病理医师进行病理学诊断。

1.2试剂与方法

采用免疫组织化学SP法染色，切片常规脱蜡水化，微波加热抗原修复，鼠抗人单克隆抗体hMSH2（1∶250稀释，美国Zymed Laboratories公司，克隆系：FE11）、鼠抗人p53单克隆抗体（DAKO公司，1∶50）、鼠抗人PTEN单克隆抗体（北京中山生物技术有限公司，1∶75）40℃孵育过夜，操作按SP试剂盒（北京中山生物技术有限公司）说明书进行。以PBS代替一抗作为阴性对照。选取已知阳性的切片作为阳性对照。

1.3结果判定

hMSH2以细胞核或细胞浆内出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。对hMSH2判定：阳性细胞数与实质细胞总数之比≥10%，判为阳性表达，否则为阴性表达。PTEN和p53计数5个高倍视野或500个细胞，按胞核或胞浆内染色强度打分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。再将阳性细胞所占的百分比打分:0分为阴性，1分 0%＜阳性细胞≤10%，2分 10%＜阳性细胞≤50%，3分 50%＜阳性细胞≤75%，4分 75%＜阳性细胞≤100%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积＞3分者为免疫反应(＋)。结果均由两位有经验的病理医师采用双盲法判定。

1.4 统计学方法

采用χ2 检验，应用SPSS13.0软件对结果进行统计学分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 hMSH2、p53及PTEN蛋白表达

在宫颈癌组织中，hMSH2、p53蛋白表达阳性率为62.96%、66.67%，PTEN蛋白表达阳性率44.44%，表达缺失率55.56%，见图1、2。

2.2hMSH2与p53、PTEN蛋白在宫颈癌中的表达关系

在hMSH2阳性表达的宫颈癌病例中，p53蛋白阳性表达率为76.47%、PTEN蛋白缺失表达率为52.94%。hMSH2阳性表达中，p53及PTEN表达均较高，但PTEN与hMSH2无显著性关系。hMSH2与p53表达呈正相关（P＜0.05），见表1。

3讨论

肿瘤发生机制目前还不清楚，但DNA损伤和基因结构的异常以及由此造成的癌基因和抑癌基因表达或功能上的改变是细胞恶性转化的必要前提。错配修复基因通过其蛋白产物识别复制错配的碱基，并启动错配修复反应，对DNA复制的忠实性和基因的稳定性起着重要作用[2]。hMSH2的种系突变为错配修复基因中最易检测到的突变，突变主要为单碱基的改变和由于碱基的缺失和插入引起移码突变，导致下游提前出现终止密码，而使蛋白截断或功能缺失。hMSH2的突变主要为于其后面的外显子上。有报道，膀胱癌、涎腺癌中hMSH2蛋白表达均增高[3-4]，本研究hMSH2蛋白在宫颈癌组织中的表达也增高，为62.96%。

在许多人类肿瘤中，p53基因突变被认为是恶性肿瘤发生与发展的主要原因[5-6]。野生型p53是一种抑癌基因，对细胞的生长起负调节作用，p53 蛋白活性受磷酸化状态控制，它的磷酸化与细胞周期有关[7]。p53基因突变后，不仅失去抑制肿瘤增殖作用，而且使该基因功能异常[8]。PTEN基因定位于10q23.3。PTEN基因通过抑制细胞有丝分裂、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成、抑制肿瘤细胞侵袭和转移等各个方面发挥抑癌基因的作用[9]。PTEN蛋白定位于细胞浆中，经免疫组化法研究的PTEN蛋白在子宫颈癌中的表达，主要表现为PTEN蛋白表达缺失。PTEN表达缺失的原因有体细胞基因突变，即PTEN基因突变导致磷酸酶活性丧失，使细胞发生恶性转化。有学者发现，前列腺癌、胃癌、子宫内膜癌和宫颈癌等肿瘤常有PTEN表达下调[10-12]，本研究结果为PTEN蛋白表达阳性率44.44%，与有关研究结果接近。

本研究虽然PTEN蛋白表达缺失率在hMSH2阳性表达中高，但PTEN与hMSH2蛋白表达无显著性相关。hMSH2、p53蛋白表达均增高，宫颈癌中突变型p53与hMSH2呈正相关（P<0.05）。即p53突变越多，错配修复基因hMSH2蛋白表达越高。说明p53基因突变与错配修复基因的功能缺陷有关。hMSH2和p53蛋白表达相互影响与宫颈癌的发生可能有关。

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（收稿日期：2009-04-13）