荧光定量聚合酶链式反应联合显色培养法在孕晚期孕妇B群链球菌筛查中的价值

【摘要】目的 分析荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）联合显色培养法在孕晚期孕妇B群链球菌筛查中的价值，为临床提供参考。方法 选取2022年10月至2024年3月阳光融和医院孕35～37周行B群链球菌筛查的1 000例孕妇进行回顾性分析，分别采用B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法对孕妇肛拭子或阴拭子B群链球菌进行检测。以肉汤增菌培养法为金标准，比较B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法检测B群链球菌的一致性；评估B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法对B群链球菌的检测效能；以B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法任一检测方法阳性作为联合检测阳性，评估联合检测与肉汤增菌培养法对B群链球菌的检测一致性及检测效能。结果 1 000例标本经金标准检出阳性94例，阴性906例，阳性检出率为9.40%。B群链球菌显色培养法检出阳性89例，阴性911例，阳性检出率为8.90%，与金标准检测一致性中等（Kappa值=0.681，Plt;0.05）；qRT-PCR法检出阳性98例，阴性902例，阳性检出率为9.80%，与金标准一致性较好（Kappa值=0.839，Plt;0.05）；联合检测阳性148例，阴性为852例，阳性检出率为14.80%，与金标准检测一致性较好（Kappa值=0.881，Plt;0.05）。与B群链球菌显色培养法相比，qRT-PCR法检测灵敏度、准确率均较高，漏诊率较低，联合检测灵敏度较高，特异度、漏诊率均较低（均Plt;0.05）；与qRT-PCR法相比，联合检测灵敏度较高，特异度、漏诊率均较低（均Plt;0.05），准确率比较，差异无统计学意义（Pgt;0.05）。结论 B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法联合检测可提高检测敏感度，提升B群链球菌阳性检出能力，可为临床诊断提供参考。

【关键词】荧光定量聚合酶链式反应；显色培养法；肉汤增菌培养法；B群链球菌

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2096-2665.2025.01.0004.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2025.01.002

B群链球菌是一种革兰氏阳性菌，约25%的成年健康女性为B群链球菌携带者，可通过垂直传播感染新生儿，是新生儿发生败血症的重要原因之一，死亡率较高，且治疗后也有较大概率发生神经后遗症[1-2]。因此，围产期B群链球菌筛查并预防性给药至关重要。肉汤增菌培养法作为围产期B群链球菌检测的金标准，其敏感度和特异度均较高。但肉汤增菌培养法的结果容易受送检时间、保存条件、环境因素等的影响，且培养需要较长时间，从而限制了该法在快速诊断中的应用。B群链球菌显色培养法是通过B群链球菌代谢产物特征性显色进行筛查的方法，但其对不产溶血素的菌落无显色反应，有漏诊风险，检测效能有待进一步提高[3-4]。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）测定B群链球菌具有较高的敏感度与特异度，且所需时间短[5]。本研究对1 000例孕晚期孕妇使用两种方法联合测定，评估其对B群链球菌的检出情况，进而判断联合检测的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2022年10月至2024年3月阳光融和医院孕35～37周行B群链球菌筛查的1 000例孕妇进行回顾性分析。孕妇年龄21～45岁，平均年龄（32.36±3.27）岁；孕周35～37周，平均孕周（35.92±0.18）周。排除同一患者的重复样本、多胎病例。本研究经阳光融和医院医学伦理委员会批准。

1.2 患者标本采集及检测方式

1.2.1 标本采集 孕35～37周的围产期孕妇经产科医师采集阴拭子（872例）或肛拭子（128例）标本，每例标本平均分为3份，一份用于显色肉汤增菌培养法，一份用于B群链球菌显色培养检测，另一份用于B群链球菌qRT-PCR检测，保存后送检。

1.2.2 肉汤增菌培养法 取一份阴拭子或肛拭子标本，接种于B群链球菌增菌肉汤培养液中，于5% CO2培养箱内培养（24 h），再转种于哥伦比亚培养基，待细菌生长后，使用全自动微生物质谱检测系统[安图实验仪器（郑州）有限公司，豫械注准20182400196，型号：Autof ms1000]，对生长的细菌进行鉴定。如待鉴定菌群中有B群溶血链球菌则报告阳性。

1.2.3 B群链球菌显色培养法 取一份阴拭子或肛拭子标本，经氯化钠注射液悬浮（50 µL），接种于B群链球菌显色培养板中，避光孵育24 h。如果培养基颜色变为浅粉色至红色，则判定为B群溶血链球菌阳性。

1.2.4 qRT-PCR法 使用qRT-PCR对标本中B群链球菌进行检测，检测试剂盒采购西安天隆科技有限公司，检测步骤及结果判读严格按照说明书进行。

1.3 观察指标 ⑴比较两种筛查方法检测结果及一致性。经B群链球菌显色培养法、qRT-PCR检测阳性菌株分别作为各自检测方法阳性，通过与金标准对比，分析评估两种方式检测敏感度与特异度。⑵分析两者联合检测结果及与金标准检测一致性。通过与金标准对比分析联合检测敏感度与特异度。⑶分析B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法及联合检测效能。灵敏度=[真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）]×100%；特异度=[真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）]×100%；准确率=[（真阳性例数+真阴性例数）/总例数]×100%；漏诊率=[假阴性例数/（真阳性例数+假阴性例数）]×100%。

1.4 统计学分析 采用SPSS 25.0统计学软件对数据进行分析。计数资料以例或百分率（%）表示，采用χ2检验；一致性分析采用Kappa检验，Kappa值为0.76～1.00说明一致性较好；Kappa值≥0.41但lt;0.76说明一致性中等；Kappa值lt;0.41说明一致性较差。以Plt;0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种筛查方法检测结果及一致性分析 1 000例标本经金标准检出阳性94例，阴性906例，阳性检出率为9.40%。B群链球菌显色培养法检出阳性89例，阴性911例，阳性检出率为8.90%，与金标准检测一致性中等（Kappa值=0.681，Plt;0.05）；qRT-PCR法检出阳性98例，阴性902例，阳性检出率为9.80%，与金标准检测一致性较好（Kappa值=0.839，Plt;0.05），见表1。

2.2 B群链球菌显色培养法及qRT-PCR法联合检测与金标准检测一致性 联合检测检出阳性148例，阴性852例，阳性检出率为14.80%，与金标准检测一致性较好（Kappa值=0.881，Plt;0.05），见表2。

2.3 B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法及联合检测效能分析 与B群链球菌显色培养法相比，qRT-PCR法检测灵敏度、准确率均较高，漏诊率较低，联合检测灵敏度较高，特异度、漏诊率均较低，差异均有统计学意义（均Plt;0.05）；与qRT-PCR法相比，联合检测灵敏度较高，特异度、漏诊率均较低，差异均有统计学意义（均Plt;0.05）；准确率比较，差异无统计学意义（χ2值=0.486，Pgt;0.05）。见表3。

3 讨论

B群链球菌属于条件致病菌，可引发新生儿肺炎、败血症等，治疗后也可能发生神经系统后遗症，严重影响患儿生长发育[6-7]。因此，对孕妇进行B群链球菌筛查并进行预防性用药，对降低分娩过程中B群链球菌感染风险，预防母婴产后感染有重要临床意义。

B群链球菌检测金标准为肉汤培养基培养。B群链球菌显色培养法是以黄色素产生法为基础的酶反应显色，为B群链球菌提供营养成分与生长因子，并抗杂菌生长。B群链球菌可在此培养基中生成红色菌落，而其他细菌与酵母菌在该培养基中不生长，或不产生菌落[8]。本研究结果显示，金标准检测1 000例阴拭子或肛拭子标本中阳性94例，阴性906例，阳性率为9.40%。而B群链球菌显色培养法检测出阳性89例，阴性911例，阳性检出率为8.90%，与金标准检测一致性为中等，灵敏度为69.14%，特异度为97.35%，检测灵敏度相对较低。分析原因为，B群链球菌显色培养法对不产溶血素的菌落无显色反应，对于不产溶血素的菌落无法检出[9]。宋建梅等[10]研究显示，B群链球菌显色培养基检测孕产妇B群链球菌感染阳性率为23.80%，高于本研究结果，可能与纳入的患者差异有关。

qRT-PCR利用基因探针技术，能够特异性地检测B群链球菌的DNA序列，该方法检测所需时间较短、敏感度较高[11]。本研究qRT-PCR法检出阳性98例，阴性902例，阳性检出率为9.80%。陶娅琳等[12]研究显示，qRT-PCR法对围产期孕妇B群链球菌检出阳性率为7.17%，与本研究结果相近。qRT-PCR法检测真阳性为82例，有16例误诊，存在12例漏诊，漏诊的原因可能为病毒菌落数过低，不易被检出。在B群链球菌的检测中，漏诊的危险性要高于误诊，因此，提升B群链球菌的检测敏感度是研究重点[13]。本研究结果显示，联合检测的阳性检出率较高，与金标准的一致性较高，检测灵敏度升高，但检测特异度低于B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法。因此，临床应根据实际需要选择合适的检测方式，满足检测需要。

综上所述，B群链球菌显色培养法、qRT-PCR法联合检测可提高检测灵敏度，可为临床提供参考。

参考文献

HUANG J， ZHENG L， SU Y， et al. Effects of group B streptococcus infection on vaginal micro-ecology and pregnancy outcomes of pregnant women in late pregnancy[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol， 2021， 267： 274-279.

钱耀先，陈俊，王燕，等.孕妇B群链球菌携带情况及对新生儿结局的影响[J].检验医学与临床， 2019， 16（14）： 1969-1971， 1975.

CARRERAS-ABAD C， TO K N， RAMKHELAWON L， et al. Detection of group B streptococcus colonisation in pregnant women： Comparison of two different culture methods and study of antimicrobial resistance patterns[J]. J Infect， 2021， 82（5）： 186-230.

DESAI D， GOH K G K， SULLIVAN M J， et al. Hemolytic activity and biofilm-formation among clinical isolates of group B streptococcus causing acute urinary tract infection and asymptomatic bacteriuria[J]. Int J Med Microbiol， 2021， 311（6）： 151520.

杨坤祥，王芬芳，钟泽艳.应用实时荧光定量PCR技术探讨B群链球菌与胎膜早破的关系[J].国际检验医学杂志， 2016， 37（10）： 1387-1388.

李晶，徐莉莉，张志群. B群链球菌感染新生儿的生存状况研究[J].中国妇幼健康研究， 2020， 31（11）： 1461-1465.

宋玉荣，詹磊，孙莉.妊娠晚期B群链球菌定植情况，抗菌药物敏感性及妊娠结局分析[J].中国医药导报， 2021， 18（15）： 113-116.

王晓娜，丛桂敏，曹作伟. B群链球菌显色培养基性能评价[J].当代医学， 2021， 27（14）： 10-12.

李相新，郑芬，张玲华，等.女性生殖道B群链球菌显色培养法筛查与耐药性分析研究[J].中华医院感染学杂志， 2015， 25（19）： 4379-4380， 4387.

宋建梅，李晓阳，隗功泽，等. B群链球菌显色培养基在孕产妇感染中的检测效果分析及对母婴健康的影响研究[J].标记免疫分析与临床， 2021， 28（3）： 406-409.

江凌晓，黎春，姜长宏，等.应用实时荧光PCR技术快速检测B群链球菌[J].广东医学， 2011， 32（5）： 575-576.

陶娅琳，毛德超，王宁，等. 3种方法检测围产期孕妇阴道分泌物B群链球菌的效果分析[J].实用检验医师杂志， 2020， 12（2）： 106-109.

张红军，刘华，韩彩虹.围产期孕妇B群链球菌感染情况及对妊娠结局的影响研究[J].中国计划生育和妇产科， 2015， 7（4）： 50-52.