酶抑制率法检测蔬菜中农药残留

陈立灿 念树芬

摘 要：采用酶抑制率法对7个大类、31个品种1 025批次蔬菜样品进行快速检测，以了解蔬菜农药残留现状。结果显示，1 025批次样品农药残留均未实际超标，但有49个批次疑似超标，占总检测批次的4.8%，其中油菜疑似超标率最高，为16.7%。酶抑制率法具有操作简便、成本低廉、灵敏度高和检测速度快等特点，适用于基层蔬菜农药残留快速检测。

关键词：酶抑制率法；蔬菜；农药残留；检测

Enzyme Inhibition Rate Method for Detecting Pesticide Residues in Vegetables

CHEN Lican， NIAN Shufen*

（Luoping County Agricultural Environmental Protection Monitoring Station， Luoping 655800， China）

Abstract： The enzyme inhibition rate method was used to rapidly detect 1 025 batches of vegetable samples in 7 categories and 31 varieties to understand the current status of pesticide residues in vegetables. The results showed that none of the 1 025 batches of samples actually exceeded the standard for pesticide residues， but 49 batches were suspected of exceeding the standard， accounting for 4.8% of the total tested batches. Among them， rapeseed plant had the highest suspected over-standard rate at 16.7%. The enzyme inhibition rate method has the characteristics of simple operation， low cost， high sensitivity and fast detection speed， and is suitable for rapid detection of pesticide residues in grass-roots vegetables.

Keywords： enzyme inhibition rate method; vegetable; pesticide residues; detection

农药残留会对公众健康构成严重威胁，因此快速准确地检测蔬菜中的农药残留量至关重要。传统的检测方法如气相色谱法[1]、高效液相色谱法[2-3]成本高、耗时长。为了满足市场需求，快速检测技术得以发展，其中最具代表性的是酶抑制率法。酶抑制率法是一种生物化学检测方法，可用于检测蔬菜中的农药残留。酶抑制率法是利用乙酰胆碱酯酶分解乙酰胆碱，产物与显色剂反应生成黄色物质，通过分光光度计测量波长412 nm处的吸光度，计算农药对乙酰胆碱酯酶的抑制率，判断蔬菜中农药残留是否超标。本次实验应用酶抑制率法对蔬菜中的农药残留进行测定，并分析结果。

1 材料与方法

1.1 试验材料

2023年，罗平县农产品质量安全检验检测站完成1 025批次蔬菜的快速定性检测，样品来自长底布依族乡、罗雄街道、腊山街道、九龙街道、板桥镇和马街镇的种植基地和合作社。蔬菜样品涵盖7个大类31个品种，包括叶菜类（12个品种）、茄果类（3个品种）、瓜类（5个品种）、甘蓝类（3个品种）、葱蒜类（2个品种）、根茎类（5个品种）和豆类（1个品种）。其中，叶菜类285批次（占27.8%）、茄果类198批次（占19.3%）、瓜类131批次（占12.8%）、甘蓝类127批次（占12.4%）、葱蒜类124批次（占12.1%）、根茎类107批次（占10.4%）、豆类53批次（占5.2%）。

1.2 仪器与试剂

实验所需仪器有HHX-SJ系列农药残留检测仪（厦门海荭兴仪器有限公司）、SK8200H超声波清冼仪（上海科导超声仪器有限公司）、HC-3018高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）、XW-2型微型振荡器、电子石英定时器（姜堰区普康医疗器械厂）和可调式移液器。

实验所需试剂为有机磷与氨基甲酸酯类农药残留检测试剂（厦门海荭兴仪器有限公司）。试剂由农药残留检测缓冲液、显色剂、底物和酶试剂组成，有效期为12个月，需要2～8 ℃冷藏保存。

1.3 试验方法

1.3.1 试剂配制

缓冲液的配制：将农药残留检测缓冲液小袋中的白色颗粒状试剂全部倒入清洁的烧杯中，使用500.0 mL娃哈哈饮用纯净水分5次溶解试剂，将其引入500 mL的容量瓶中并确保达到刻度线，摇匀。室温下保存以供后续使用。

底物的配制：向标明农药残留检测底物的小塑料瓶中加入5.2 mL娃哈哈饮用纯净水，确保底物完全溶解。需要冷藏保存，并避免冷冻结冰。

显色剂的配制：显色剂已经预先配制好，只需保存在冰箱的冷藏室（0～5 ℃），避免冷冻结冰。

酶试剂的配制：向标注为农药残留检测酶试剂的小塑料瓶中加入5.0 mL娃哈哈饮用纯净水，确保酶试剂完全溶解，溶解后的酶试剂应在2～4 ℃环境下冷藏保存，以保持其稳定性和活性。

1.3.2 样液制备及注意事项

获取各种蔬菜后，先擦去表面泥土，然后根据蔬菜种类选择取样方式：叶菜剪成1.0 cm宽，块根菜取1.0 cm表皮。称取2.0 g蔬菜样品放入25 mL塑料螺口平底离心管中，加10.0 mL缓冲液，拧紧盖子后摇动，确保缓冲液充分洗脱农药。放入超声波清冼仪中超声提取5 min，若浸提液清澈，直接转移至离心管；若混浊，需离心至清澈。若色素干扰严重，需脱色：将浸提液转至10 mL塑料离心管中，加活性炭，振荡5 min，静置5～10 min，离心去除活性炭后，用于后续实验。

注意事项：制备样液时，确保器具清洁，避免污染；蔬菜样品需完全浸泡在缓冲液中；离心时确保离心管平衡；根据实际情况调整活性炭用量；特定蔬菜（如葱、蒜、萝卜、韭菜等）采取整株浸提；详细记录每一步操作和结果。

1.3.3 对照测试

样品测定前，将缓冲液、底物、显色剂、酶试剂从冰箱中取出，恢复至室温备用。仪器开机稳定运行30 min后，进行对照测试。使用精确度高的移液器，在微孔板的第1列孔条内分别加入20.0 μL酶溶液。随后，使用另一只移液器，向每个孔中准确加入250.0 μL的缓冲液。将微孔板放入仪器中，启动振板功能10 s充分混匀溶液。静置反应10 min，静置期间使用电子石英定时器精准计时。待静置反应完成后，迅速加入10.0 μL显色剂和10.0 μL底物。底物是酶反应的关键成分，与显色剂一同参与反应，产生明显的颜色变化。底物加入后，应立即将微孔板放回仪器中，并按下“对照”键进行测试。仪器自动将第1列作为对照液、其他列作为样品液进行测试，并自动保存当前的对照值数据。若测量后续样品时，实验环境及条件未发生显著变化，则可直接调用先前保存的对照值，无须重复进行对照测量。只有当1 min内对照吸光度变化值ΔA＞0.1，3 min内对照吸光度变化值ΔA＞0.3，酶试剂才能继续使用。

1.3.4 样品测定

使用精确度高的移液器，在微孔板的孔条内加入20.0 μL酶溶液。使用另一只移液器，在每个孔中加入250.0 μL的样品溶液。然后放入仪器中，启动振板功能振动10 s混匀。静置反应10 min，静置期间使用电子石英定时器精确计时，确保酶与样品溶液有足够的时间充分反应。用移液器向每个孔中加入10.0 μL的显色剂，随后迅速加入10.0 μL的底物。底物加入后，立刻将微孔板放入仪器中，并按下“样品”键，开始进行测量。测量结束后，仪器会显示各项测量结果，包括抑制率及吸光度变化值。

1.3.5 结果判定

抑制率是判定检测结果的重要指标，为评估样品中农药残留情况提供了关键依据。根据《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》（GB/T 5009.199—2003）的规定[4]，抑制率≤40%的样品判定为合格，表示农药残留量未超标；抑制率在40%～50%的样品被视为疑似农药残留超标，表示蔬菜中可能存在低毒农药，对于此类样品，需要至少复检一次，以确保检测结果准确无误；抑制率≥50%的样品直接判定为农药超标，表明蔬菜中存在高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药，对于此类样品，需要进行多次检测（至少2次以上），以确保检测结果的准确性。

2 结果与分析

2.1 不同蔬菜品种的农药残留检测情况

由表1可知，所检测的蔬菜样品均达到合格标准，并未出现农药残留严重超标的情况。在叶菜类蔬菜中，油菜的疑似超标率相对较高，达到16.7%，其次是芫荽、小米菜、茴香、菠菜和板蓝根等蔬菜；葱蒜类蔬菜中，葱的疑似超标率最高，为7.0%；豆类蔬菜中，四季豆的疑似超标率为5.7%；瓜类蔬菜中，南瓜的疑似超标率稍高，为5.5%；茄果类蔬菜中，辣椒的疑似超标率最高，为5.3%；甘蓝类蔬菜中，结球甘蓝的疑似超标率最高，为4.7%；根茎类蔬菜中，白萝卜的疑似超标率最高，为2.6%。虽然部分蔬菜存在疑似超标的情况，但总体而言，本次检测的蔬菜样品质量仍然保持在安全可控的范围内。

2.2 不同蔬菜类别的农药残留检测情况

由表2可知，检测的各类蔬菜农药残留情况相对较好，没有出现实际超标的现象。在总计1 025个检测批次中，仅有49个批次疑似存在农药残留超标，占总数的4.8%。

3 结论

酶抑制率法具有快速、低成本和操作简便的优势[5-6]。本文采用酶抑制率法对1 025批次蔬菜样品农药残留进行快速检测，结果显示，蔬菜样品农药残留均未实际超标，但有49批次样品疑似超标，占总检测批次的4.8%，其中油菜疑似超标率最高，为16.7%。虽然本次检测未发现实际超标现象，但疑似超标的情况仍然不容忽视。为进一步提升酶抑制率法检测结果的精准度和可信度，需严格遵循实验操作步骤，确保试剂配制和样液制备的精确性。同时，实施对照测试和样品重复检测也是提高检测可靠性的重要手段。酶抑制率法不仅缩短了检测时间，降低了经济成本，还有效克服了传统检测方的某些弊端，可为保障食品安全提供有力的技术

支撑[7]。

参考文献

[1]黄小芳，付志明，彭晓鲲.应用气相色谱法测定蔬菜中17种有机磷类农药残留量的研究[J].食品界，2022（11）：105-107.

[2]吴定芳，王磊，何茫茫，等.高效液相色谱法测定蔬菜中19种氨基甲酸酯类农药的残留量[J].理化检验（化学分册），2020，56（2）：142-147.

[3]李婷婷，李玲，朱璐.高效液相色谱法测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留分析[J].现代食品，2021（15）：139-140.

[4]中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测：GB/T 5009.199—2003[S].北京：中国标准出版社，2003.

[5]王斌，曹丽芬，周钦方，等.酶抑制率农药残留快检方法存在的问题及研究进展[J].农业工程，2022，12（8）：72-77.

[6]郭姣艳，孙艳波，马向东，等.濮阳市蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留调查分析[J].中国卫生检验杂志，2022，32（4）：487-490.

[7]王斌，曹丽芬，周钦方，等.酶抑制率农药残留快检方法存在的问题及研究进展[J].农业工程，2022，12（8）：72-77.