荷梗的化学成分研究

周传顺 饶高雄

【摘 要】

目的：研究荷梗的化学成分。方法：采用HP-20树脂、硅胶、RP-C18和Sephadex LH-20柱等色谱方法分离与纯化，并运用核磁共振（1H-NMR和13C-NMR）波谱学方法及结合化学方法对所分离的化合物进行结构鉴定。结果：从荷梗中分离鉴定出10个化合物，分别为次大风子素（hydnocarpin，1）、木犀草素（luteolin，2）、山楂酸（maslinic acid，3）、白桦脂酸（betulinic acid，4）、反式-N-对羟基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine，5）、5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，6）、单棕榈酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate，7）、棕榈酸（palmitic acid，8）、β-谷甾醇（β-sitosterol，9）、胡萝卜苷（daucosterol，10）。10个化合物均是荷梗中首次分离得到，化合物1和6是莲中首次分离得到。

【关键词】

荷梗；化学成分；提取分离

【中图分类号】R284.2   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2024）07-0028-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.07.zgmzmjyyzz202407007

Chemical constituents of Petiolus Nelumbinis

ZHOU Chuanshun1，2 RAO Gaoxiong3*

1. Yi Yang Medical College， Yiyang 413000， China；

2. Key Laboratory of Anhua Huangjing Processing Technology and Product Development， Yiyang 413000， China；

3. Engineering Research Centers of Health Products by Homology of Medicine and Food of

Yunnan Province，Yunnan University of Chinese Medicine， Kunming 650500， China

Abstract：

Objective To study the chemical constituents of Petiolus Nelumbinis.Method Thesample was isolated and purified by diaion HP 20，Silica gel，RP-C18 and Sephadex LH-20 chromatography；The chemical structure was identified on the basis of nuclear magnetic resonance （1H-NMR and 13C-NMR） spectroscopy data and chemical methods.Result Ten compounds were isolated and identifiedfromPetiolus Nelumbinis： hydnocarpin（1），luteolin（2），maslinic acid（3），betu-linicacid（4），N-trans-coumaroyltyramine（5），5-hydroxymethylfurfural（6），2，3-dihydroxypropyl pal-mitate（7），palmitic acid（8），β-sitosterol（9），daucosterol（10）.Compounds 1 to 10 were isolated from Petiolus Nelumbinis for the first time，and compounds 1 and 6 were isolated from Nelumbo nucifera Gaertn. for the first time.

Keywords：

Petiolus Nelumbinis;Chemical Constituents;Extraction and Separation

荷梗為睡莲科（Nymphaeaceae）植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的叶柄或花柄［1］。荷梗味苦、性平，归脾、胃经。具有解暑清热、理气化湿的功效；主治暑湿胸闷不舒、泄泻、痢疾、淋病、带下。在经典处方“清署益气汤”“加味茵陈汤”和“复方犀角地黄汤”中均有荷梗的使用［2-4］。目前研究［5-7］表明荷梗中含有黄酮类和生物碱类化学成分；同时荷梗的药理研究较少，只涉及到单体化合物的细胞毒活性作用研究。另外，荷梗在各省中药材标准中只有性状鉴别，没有指标性成分对其进行定性和定量，与其物质基础未得到充分认识有关。在临床应用中，莲各个部位都可入药，而目前的相关研究多集中于其果实和叶子部位。为了进一步开发荷梗的药用价值，阐明其药效物质基础，完善其质量标准提供理论依据，本实验运用各种色谱方法对荷梗进行提取分离，并对得到的单体化合物进行结构解析。从荷梗中分离鉴定出10个化合物，分别为次大风子素（hydnocarpin，1），木犀草素（luteolin，2），山楂酸（maslinic acid，3），白桦脂酸（betulinic acid，4），反式-N-对羟基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine，5），5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，6），单棕榈酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate，7），棕榈酸（palmitic acid，8），β-谷甾醇（β-sitosterol，9），胡萝卜苷（daucosterol，10）。10个化合物均是荷梗中首次分离得到，化合物1和6是莲中首次分离得到。

1 材料

Bruker Avance III 400 MHz核磁共振波谱仪（德国Bruker公司），硅胶、薄层色谱硅胶板（青岛海洋化工厂，烟台大学生物科学与工程研究所），Sephadex LH-20（Pharmacia公司），RP-C18（日本富士硅化工），HP-20型树脂（日本三菱化工），分离纯化用试剂均由工业纯重蒸处理后使用。

实验药材购于云南省文山市，经云南中医药大学中药学院陈绍田研究员鉴定为植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的叶柄部。

2 提取与分离

荷梗鲜品225 kg切成细短样阴干，再经粉碎后得样品36 kg；样品使用95%EtOH加热回流提取2次，每次2 h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得浸膏。浸膏用95%EtOH溶解，过滤，回收溶剂后浸膏再以水溶解，得水溶部分Fr.A和水不溶部分Fr.B；Fr.A经 HP-20 柱分离（水-95%EtOH梯度），得组分Fr.A1～A2，Fr.A2 经硅胶柱层析（氯仿-甲醇梯度）洗脱后得到化合物 6（11.1 g）。Fr.B经甲醇溶解后经MCI柱分离，以甲醇梯度洗脱，薄层层析显示该步骤未有分离效果，故合并以硅胶柱层析（氯仿-甲醇梯度）洗脱，得组分Fr.B1～B2，同时得化合物 9（830 mg），10（265 mg）。Fr.B1经Sephadex LH-20 柱色谱（甲醇）和Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇=1∶1）得到化合物1（17.7 mg），3（143 mg），4（3.2 mg），7（52 mg），8（20 mg）。Fr.B2经经硅胶柱层析（氯仿-甲醇梯度）和Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇=1∶1）后得到化合物 2（18 mg），5（18 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色无定形粉末，溶于甲醇。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.21（1H，d，J=2.0Hz，H-6），6.52（1H，d，J=2.0Hz，H-8），7.67（1H，d，J=2.2Hz，H-2′），7.09（1H，d，J=8.6Hz，H-5′），7.61（1H，dd，J=8.6，2.2Hz，H-6′），7.04（1H，d，J=1.8Hz，H-2″），6.82（1H，d，J=8.0Hz，H-5″），6.88（1H，m，H-6″），5.02（1H，d，J=7.8Hz，H-7″），4.28（1H，m，H-8″），3.59（1H，d，J=12.9Hz，H-9″a），3.38（1H，s，H-9″b），12.92（1H，s，5-OH），10.89（1H，s，7-OH），3.78（1H，s，3″-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：163.4（C-2），104.4（C-3），182.2（C-4），161.9（C-5），99.4（C-6），164.7（C-7），94.6（C-8），157.9（C-9），104.3（C-10），124.2（C-1′），115.3（C-2′），144.1（C-3′），147.6（C-4′），115.8（C-5′），118.0（C-6′），127.4（C-1″），112.3（C-2″），148.1（C-3″），147.7（C-4″），115.8（C-5″），121.1（C-6″），76.8（C-7″），78.5（C-8″），60.6（C-9″），56.2（OCH3）。以上數据与文献［8］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为次大风子素（Hydnocarpin）。

化合物2：黄色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.67（1H，s，H-3），6.19（1H，s，H-6），6.45（1H，s，H-8），7.40（1H，s，H-2′），6.89（1H，d，J=8.0Hz，H-5′），7.43（1H，s，H-6′），12.99（1H，s，5-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：164.4（C-2），103.3（C-3），182.1（C-4），161.9（C-5），99.3（C-6），164.6（C-7），94.3（C-8），157.7（C-9），104.2（C-10），122.0（C-1′），113.8（C-2′），146.2（C-3′），150.1（C-4′），116.5（C-5′），119.4（C-6′）。以上数据与文献［9］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为木犀草素（Luteolin）。

化合物3：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ：2.24（1H，dd，J=12.4，4.1Hz，H-1），4.09（1H，td，J=11.0，4.2Hz，H-2），3.39（1H，d，J=9.4Hz，H-3），5.44（1H，m，H-12），3.27（1H，dd，J=13.7，3.8Hz，H-18），1.25（3H，s，H-23），0.99（3H，m，H-24），0.98（3H，m，H-25），1.06（3H，s，H-26），1.24（3H，s，H-27），0.96（3H，s，H-29），0.94（3H，s，H-30）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ：47.5（C-1），68.4（C-2），83.6（C-3），39.6（C-4），55.7（C-5），18.6（C-6），33.0（C-7），39.6（C-8），47.9（C-9），38.3（C-10），23.5（C-11），122.2（C-12），144.6（C-13），42.0（C-14），28.0（C-15），23.7（C-16），46.5（C-17），41.8（C-18），46.2（C-19），30.7（C-20），34.0（C-21），33.0（C-22），29.1（C-23），17.4（C-24），16.6（C-25），17.2（C-26），25.9（C-27），180.0（C-28），33.0（C-29），23.5（C-30）。以上数据与文献［10］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为山楂酸（Maslinic acid）。

化合物4：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.13（1H，m，H-3），0.75（3H，s，H-23），0.86（3H，s，H-24），0.95（3H，s，H-25），0.97（3H，s，H-26），1.01（3H，s，H-27），4.71（1H，s，H-29a），4.59（1H，s，H-29b），1.70（3H，s，H-30）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：40.3（C-1），28.2（C-2），79.8（C-3），40.1（C-4），57.1（C-5），19.6（C-6），35.8（C-7），42.1（C-8），52.2（C-9），38.5（C-10），22.3（C-11），27.1（C-12），39.8（C-13），43.8（C-14），31.9（C-15），33.5（C-16），57.7（C-17），48.7（C-18），50.6（C-19），152.2（C-20），31.0（C-21），38.3（C-22），28.8（C-23），16.9（C-24），16.8（C-25），16.3（C-26），15.3（C-27），180.7（C-28），110.3（C-29），19.7（C-30）。以上数据与文献［11］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为白桦脂酸（Betulinic acid）。

化合物5：白色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.38（2H，d，J=8.0Hz，H-2，6），6.78（2H，d，J=8.0Hz，H-3，5），7.31（1H，d，J=15.7Hz，H-7），6.39（1H，d，J=15.7Hz，H-8），7.01（2H，d，J=8.0Hz，H-2′，6′），6.69（2H，d，J=8.0Hz，H-3′，5′），2.64（2H，t，J=7.4Hz，H-7′），3.33（2H，m，H-8′），8.01（1H，t，J=5.4Hz，NH）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：126.4（C-1），129.6（C-2），116.2（C-3），159.2（C-4），116.2（C-5），129.6（C-6），139.0（C-7），119.2（C-8），165.8（C-9），130.0（C-1′），129.9（C-2′），115.6（C-3′），156.1（C-4′），115.6（C-5′），129.9（C-6′），34.9（C-7′），41.1（C-8′）。以上数据与文献［12］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为反式-N-对羟基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine）。

化合物6：红棕色油状物，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：9.49（1H，s，H-1），6.52（1H，s，H-3），7.26（1H，s，H-4），4.67（2H，s，H-6）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：178.1（C-1），152.0（C-2），124.0（C-3），110.1（C-4），161.4（C-5），57.0（C-6）。以上数据与文献［13］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural）。

化合物7：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：4.21（1H，m，H-1a），3.71（1H，m，H-1b），3.94（1H，m，H-2），4.14（1H，m，H-3a），3.62（1H，m，H-3b），2.35（2H，t，J=7.5Hz，H-2′），1.62（2H，m，H-3′），1.26（24H，m，H-4′～15′），0.88（3H，t，J=6.6Hz，H-16′）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：65.2（C-1），70.3（C-2），63.4（C-3），174.4（C-1′），34.2（C-2′），31.9（C-3′），29.7～29.1（C-4′～13′），24.9（C-14′），22.7（C-15′），14.1（C-16′）。以上数据与文献［14］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为单棕榈酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate）。

化合物8：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：2.35（2H，t，J=7.4Hz，H-2），1.63（2H，m，H-3），1.30（24H，m，H-4～15），0.88（3H，t，J=6.5Hz，H-16）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：179.7（C-1），34.0（C-2），24.7（C-3），29.7～29.1（C-4～13），31.9（C-14），22.7（C-15），14.1（C-16）。以上数据与文献［15］报道对照基本一致，故鉴定该化合物为棕榈酸（Palmitic acid）。

化合物9：白色针晶（氯仿），使用10%硫酸乙醇显色呈紫红色，与β-谷甾醇标准品共薄层对照时Rf 值相同，故鉴定化合物9为β-谷甾醇。

化合物10：白色粉末（丙酮），使用10%硫酸乙醇顯色呈紫红色，与胡萝卜苷标准品共薄层对照时Rf 值相同，故鉴定化合物10为胡萝卜苷。

4 讨论

本实验从荷梗中分离鉴定出10个化合物，其中次大风子素（hydnocarpin，1）、木犀草素（luteolin，2）属于黄酮类成分；山楂酸（maslinic acid，3）、白桦脂酸（betulinic acid，4）属于五环三萜类成分；β-谷甾醇（β-sitosterol，9）、胡萝卜苷（daucosterol，10）为甾体类成分；其他化合物反式-N-对羟基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine，5）、5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，6）、单棕榈酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate，7）、棕榈酸（palmitic acid，8）分别属于香豆素类、呋喃衍生物、脂肪酸酯和脂肪酸成分。现代药理表明木犀草素、白桦脂酸和β-谷甾醇具有抑菌作用［16-19］；山楂酸具有抑制寄生虫的作用［20］。这些药理作用为荷梗治疗泄泻、痢疾、淋病提供了一定理论依据。另外，本文的研究丰富了荷梗的成分类型，为其后续药效评价、质量标准完善和开发利用提供了部分理论基础。

参考文献

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草（第三册）［M］．上海：上海科学技术出版社，2005：408-409．

［2］王士雄．温热经纬［M］．沈阳：辽宁科学技术出版社，1994：50．

［3］费伯雄．医醇剩义［M］．上海：上海科学技术出版社，1959：41，44．

［4］严世芸，郑平东，何立人．张伯臾医案［M］．上海：上海科学技术出版社，2008：147-148．

［5］段绪红，何培，马宗敏，等．荷梗中的黄酮类化合物及其细胞毒活性［J］．中国中药杂志，2014，39（22）：4360-4364．

［6］段绪红，裴林，蒋建勤．荷梗中的细胞毒活性生物碱［J］．中国中药杂志，2013，38（23）：4104-4108．

［7］许文成，蒋建勤．荷梗的化学成分研究［J］．药学与临床研究，2011，19（3）：235-237．

［8］尚小雅，张承忠，李冲，等．藏药五脉绿绒蒿中黄酮类成分的分离与鉴定［J］．中药材，2002，25（4）：250-252．

［9］陈林，王琦，吴蓓，等．百尾参化学成分的分离与鉴定（Ⅱ）［J］．中草药，2018，49（20）：4803-4807．

［10］樊东辉，李志峰，赵兰君，等．小花清风藤茎叶的化学成分研究［J］．中药材，2018（6）：1372-1375．

［11］刘世军，廖志新，唐志书，等．直立悬钩子的化学成分研究［J］．中药材，2016，39（5）：1045-1048．

［12］郑新恒，陈芳，梁秋萍，等．云南枸杞根中酰胺类化学成分及其抗炎活性研究［J］．天然产物研究与开发，2018，30（4）：603-609．

［13］郭顺星，陈晓梅，杨峻山．石斛小菇化学成分的研究［J］．中国药学杂志，2000，35（6）：372-374．

［14］刘量，张婉菁，殷启蒙，等．斑叶兰化学成分研究［J］．中药材，2015，38（12）：2547-2549．

［15］陈艳琰，唐于平，段金廒，等．莲须化学成分的研究［J］．中国药学杂志，2010，45（20）： 1535-1538．

［16］GUO Y，LIU Y， ZHANG Z，et al．The Antibacterial Activity and Mechanism of Action of Luteolin Against Trueperella pyogenes［J］．Infection and Drug Resistance，2020（13）：1697-1711．

［17］QIAN W，FU Y，LIU M．et al．Mechanisms of action of luteolin against single and dual-species of escherichia coli and enterobacter cloacae and its antibiofiIm activities ［J］．Applied Biochemistry and Biotechnology，2021，193（827965）：1-18．

［18］SCHUHLY W，HEILMANN J，CALIS I，et al．New triterpenoids with antibacterial activity from Zizyphus joazeiro．［J］．Planta medica：Natural products and medicinal plant research，1999，65（8）：740-3．

［19］DING K，TAN Y Y，DING Y，et al．β Silosterol improvesexperimental colitis in mice with a larget against pathogenielacleria［J］．J Cell Biochem，2019，120（4）：5687-5694．

［20］MARTIN-NAVARRO C M， LOPEZ-ARENCIBIA A，SIFAOUI I，et al．Amoebicidal Activity of Caffeine and Maslinic Acid by the Induction of Programmed Cell Death in Acanthamoeba［J］．Antimicrob Agents Chemother，2017，61（6）：02660-16．

（收稿日期：2023-07-07 編辑：刘 斌）

基金项目：

湖南省教育厅科学研究项目（21C1499）。

作者简介：

周传顺（1992—），男，汉族，硕士，助教，研究方向为天然药物开发与利用工作。E-mail：735386048@qq.com

通信作者：

饶高雄（1965—），男，汉族，硕士，教授，研究方向为天然药物化学的研究工作。E-mail：raowufam@vip.sohu.com