《畜产品质量安全检测色谱分析方法验证规范》解析

【摘要】结合实验室评审准则和相关国家标准、行业标准，以及农业农村部对畜产品质量安全检测实验室的具体要求，制定辽宁省地方标准《畜产品质量安全检测色谱分析方法验证规范》。该标准解决了畜产品药物残留检测新标准、新方法在实验室方法认证和扩参数中的实际问题，方便了新标准、新方法在检测实验室的落地实施，填补了国内畜产品检测领域缺少相关验证指南的空白。

【关键词】畜产品质量安全；兽药残留；检测；色谱分析；地方标准

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.02.009

Exploration of Verification specification for method of chromatographic analysis for quality and safety detection of livestock products

GUO Guoxian

（Liaoning Inspection， Examination & Certification Centre〔Liaoning Inspection forAgro- product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Shenyang 110036， China）

Abstract： Based on the laboratory evaluation criteria， relevant national， industry standards， and the specific requirements of the Ministry of Agriculture and Rural Affairs for the quality and safety testing of animal products， the Liaoning local standard Verification specification for method of chromatographic analysis for quality andsafety detection of livestock products is formulated. This standard addresses the practical issues of laboratory method verification and parameter expansion for new standards and methods in the detection of veterinary drug residues in animal products， greatly facilitating the implementation of new standards and methods in testing laboratories and filling the gap in the lack of relevant validation guidelines in the field of animal product testing in China.

Keywords： quality and safety of livestock products； veterinary drug residues； detection； chromatographic analysis； local standards

畜产品质量安全问题一直是社会关注的重点。2022年9月2日经第十三届全国人民代表大会常务委员会第三十六次会议表决通过的修订版《中华人民共和国农产品质量安全法》，将畜产品质量安全以及畜产品生产安全问题提升到一个新的高度。为保证畜产品质量安全及生产安全，提供全面、及时、客观有效、合法合规的检测数据成为相关检测服务机构面临的挑战。在此背景下，辽宁省地方标准DB21/T 3851—2023《畜产品质量安全检测色谱分析方法验证规范》于2023年10月30日发布，在2023年11月30日实施。

1标准制定的背景

近年来，我国畜牧养殖等相关配套产业朝着规模化、集约化方向快速发展，同时这也引发了药物滥用、不按休药期规定停药、人用药给兽用等一系列问题。畜禽产品中药物残留超标的问题已成为影响畜产品行业发展和畜产品质量安全的重要问题[1]。畜禽产品中出现的药物残留，一方面严重影响当前畜禽行业的稳定发展，间接提高了整个畜禽养殖行业的饲喂成本以及治疗成本；另一方面，畜产品中的药物残留问题会影响相关食品的质量安全，危害人民群众的身体健康，进而危害畜禽养殖行业的健康发展[2]。另外，未经无害化处理的过量药物还可能通过畜禽废弃物、排泄物对养殖环境造成污染[3]。

2标准制定的必要性

为进一步维护畜产品质量安全工作，适应畜产品行业发展，畜产品药物残留检测领域的相关配套检测标准正在迅速发展，越来越多的兽药甚至人用药物的残留检测标准发布实施。食典通网站统计显示，2019年至2021年新增畜產品色谱分析相关的国家标准、行业标准、地方标准超过2000项。这些检测标准所使用的方法主要由酶联免疫吸附法、液相色谱法、液质联用法、气相色谱法、气质联用法这五种分析方法组成，其中酶联免疫吸附法多作为辅助的筛选方法，而液相色谱法、液质联用法、气相色谱法以及气质联用法一般作为畜禽产品药物残留检测的确证方法，被广泛应用于畜产品质量安全领域。

面对兽药残留检测标准的不断更新，实验室必须采用一套系统性的方法来确保及时更新检测流程。CNAS-CL01：2018《检测和校准实验室能力认可准则》规定：“实验室在引入方法前，应验证能够正确地运用该方法，以确保实现所需的方法性能。”而RB/T 214—2017《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》规定：“为验证实验室各项条件对标准方法的适用性，实验室在使用标准方法前，应对其进行验证。”目前在食品检测领域，方法认证指南类的标准共计83个，但尚无畜产品兽药残留检测领域的方法验证指南。因此，出台实验室方法验证规范可以进一步规范畜产品质量安全实验室建设，使新标准、新方法能够更好地应用于检验检测实验室。这不仅是实验室的现实需要，也是检验检测行业认证体系的必然要求。

3标准制定内容解析

3.1标准建立的依据

本标准根据GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》、GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》中的有关规定，为畜产品检测实验室方法验证提供技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检测规则等指导要求。

3.2标准中技术指标的确立

目前，我国尚未有关于畜产品检测实验室新方法验证确认试验的相关指导准则。我们依据RB/T 063—2021《检验检测机构管理和技术能力评价方法的验证和确认要求》[4]以及GB/T 32467—2015《化学分析方法验证确认和内部质量控制术语及定义》[5]，结合畜产品检验实验室工作内容及特点确立方法验证所含的技术指标，即方法验证所需的标准曲线及其相关工作范围、方法正确度、方法精密度、方法的检出限和定量限的参数要求及具体计算方法。

主要内容的制定依据如下：1）依据RB/T 063—2021《检验检测机构管理和技术能力评价方法的验证和确认要求》的3.3条款中方法验证的定义、3.4条款中方法确认的定义、5.3条款中标准方法验证的实施、6.3条款中非标准方法确认的实施，确认本标准的主要内容应包括但不限于人员及其职责、设备设施、环境条件、代表性基质样品等；2）结合分析化学教材《现代色谱法及其在药物分析中的应用》[6]的“1.3色谱法的实验结果评价”，以及多个畜产品实验室新方法验证报告内容，确定具体技术指标应涵盖标准曲线及工作范围、正确度、精密度、检出限和定量限等内容；3）依据GB/T 32467—2015《化学分析方法验证确认和内部质量控制术语及定义》中“2检测过程术语及定义”“3方法验证能力术语及定义”“4回收率术语及定义”“5线性和校准术语及定义”的相关要求，给出新方法验证的标准曲线及其相关工作范围、方法正确度、方法精密度、方法的检出限和定量限的具体定义。

3.3标准中参数及性能要求的确立

依据所确定的技术指标，即标准曲线及其相关工作范围、方法正确度、方法精密度、方法的检出限和定量限，结合NY/T 1896—2010《兽药残留实验室质量控制规范》[7]中的校正曲线，确认标准曲线及工作范围的性能要求为：校准曲线的浓度范围应尽可能覆盖一个数量级，应涵盖包括空白点在内的至少6个浓度点，其中浓度点应至少包含方法的检测限或者定量限，抑或测定低限的浓度、日常检测所涉及的平均浓度、在工作范围内所涉及的最高点浓度。每个浓度点应至少要重复测定2次，并计算其平均值。作为兽药残留疑似物的筛选方法，其对应曲线的线性回归方程相关系数应不低于0.98，对于兽药残留疑似物的确证方法，相关系数应不低于0.99。曲线的线性范围必须包含被测组分浓度等相关性能要求。

依据GB/T 6379.1—2004《测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义》[8]，GB/T 6379.6—2004《测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第6部分：准确度值的实际应用》[9]，NY/T 1896—2010《兽药残留实验室质量控制规范》中E.2.5和E.2.6对准确度、精密度的具体表述，以及结合分析化学教材《现代色谱法及其在药物分析中的应用》的“1.3色谱法的实验结果评价”确定标准中方法正确度、方法精密度的相关性能要求，对不同浓度范围内正确度及精密度的加标回收实验内容确定了详细的实验参数，即所验证的方法中涉及的每种基质和每种目标化合物均应做回收率试验，相同基质、相同目标化合物的样品均应进行每种组分的3个水平标准添加实验。具体如下：对于禁用物质，回收率试验应该在方法定量限（如无定量限，则用检出限或者测定低限）、2倍定量限（如无定量限，则用检出限或者测定低限）和10倍定量限（如无定量限，则用检出限或者测定低限）这3个浓度点进行阳性添加的水平试验；对于已制定最大残留限量的目标组分，回收率试验应该在方法定量限（如无定量限，则用检出限或者测定低限）、最大残留限量点、大于最大残留限量的合适浓度点这3个浓度点进行阳性添加水平试验；未制定最大残留限量的目标组分，回收率试验应该在方法定量限（如无定量限，则用检出限或者测定低限）、常见的类似种类兽药的限量指标、大于限量指标的合适浓度点进行3个浓度阳性添加水平试验。以上水平实验应每个水平至少进行3批次实验，每批次至少包含6个样品同时测定，依据所得结果的回收率来验证方法的正确度，并通过回收率数值计算得出每批次的回收率平均值、标准偏差、相对标准偏差，从而验证方法的精密度。

依据NY/T 1896—2010《兽药残留实验室质量控制规范》中“D.1.1限用药物的灵敏度”和“D.1.2禁用药物的灵敏度”，分析化学教材《现代色谱法及其在药物分析中的应用》中“1.3.2.3灵敏度检测限和定量限的相关要求”，给出检出限和定量限的相关要求及检出限及定量限的限定范围，即应结合验证方法的特点及实验室仪器设备水平制定检出限和定量限。如使用空白标准偏差倍数法进行检出限和定量限的验证，该方法在实验室内的检测限应满足信噪比大于3∶1，方法定量限应满足信噪比大于10∶1的要求。

4標准实施的意义

依据各项准则以及国家标准要求，结合畜产品质量安全检测的实际需求建立本地方标准，有利于畜产品质量安全实验室的规范化建设，为新方法、新标准在畜产品检验检测实验室的落地使用提供了具体实施细则及细化考量指标。标准通过规范各项验证指标，进一步明确了方法验证的流程以及验证内容，保障了验证工作顺利实施，有效规避因方法验证不符合国家规定而带来的检测风险，为实验室节省了大量的人力成本及时间成本，有利于在兽药残留标准日新月异的今天，畜产品质量安全实验室更好地适应现阶段检测要求，更好地完成检验检测任务，做好畜产品质量安全的“守门员”。本标准的实施，有利于进一步提高广大畜产品检测实验室的技术能力建设以及管理体系建设，为畜产品质量安全检测行业的发展提供更有力的保障。

5结束语

辽宁省地方标准《畜产品质量安全检测色谱分析方法验证规范》的制定，明确了主要验证指标由标准曲线及工作范围、方法正确度、方法精密度、方法的检出限和定量限四部分组成，通过查阅相关准则、教材、标准及文献，确立了各项指标的具体内容以及计算方法，从而形成一套完整的方法验证体系性指南。辽宁省农产品及兽药饲料产品检验检测院以此体系为基础顺利通过了8个标准共计41个参数的实验室扩项认证工作，并顺利通过了国家的CMA及CNAS和农业农村部的CATL认证，这充分证明了该标准的规范性和可行性。

【参考文献】

[1]曾凡.畜产品中兽药残留检测方法研究[J].农家参谋，2021（6）：80-81.

[2]马君梅.畜产品中兽药残留检测方法研究进展[J].乡村科技，2020，11（28）：46-47.

[3]邓书，孟宇航.畜产品中兽药残留检测方法研究[J].中国动物保健，2021，23（8）：1，4.

[4]检验检测机构管理和技术能力评价方法的验证和确认要求：RB/T 063—2021[S].

[5]化学分析方法验证确认和内部质量控制术语及定义：GB/ T 32467—2015[S].

[6]孙毓庆.现代色谱法及其在药物分析中的应用[M].北京：科学出版社，2005.

[7]兽药残留实验室质量控制规范：NY/T 1896—2010[S].

[8]测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义：GB/T 6379.1—2004[S].

[9]测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第6部分：准确度值的实际应用：GB/T 6379.6—2004[S].

【作者简介】

郭国贤，男，1985年出生，高级兽医师，硕士，研究方向为兽药残留检测。

（编辑：侯睿琪）