骆驼布鲁氏菌活疫苗A19株免疫试验

高 静,周 峰 ,彭 程*,胥元鹏,王子坚,聂龙祁,张建春,热孜婉,南金鱼,陈学生,王新强

(1.甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃兰州 730046;2.阿克塞县畜牧兽医技术服务中心,甘肃阿克塞 736400;3.酒泉市畜牧兽医总站,甘肃酒泉 735000)

甘肃省阿克塞县为骆驼养殖区,因放牧中与布鲁氏菌病牛、羊及其污染物接触导致部分骆驼感染布病。疫苗免疫是控制布鲁氏菌在骆驼之间传播的有效方法[1]。研究表明,用流产布鲁氏菌株S19(150)和羊布鲁氏菌Ⅰ型接种单峰骆驼,幼龄(3个月)单峰骆驼接受全剂量疫苗,成年单峰驼(10岁)减少剂量。接种疫苗2到4周后,2组都产生了滴度在1∶25到1∶200之间的布鲁氏菌抗体[2]。用于奶牛防控最有效的疫苗就是S19[3]。S19疫苗对人有致病力[4],不适用于怀孕动物和种公畜,免疫后抗体可持续10～11个月,干扰正常血清学检测[5]。我国目前使用的A19疫苗就是从俄罗斯引入的S19[6],并且是早期使用的S19[7]。为了有效预防骆驼布病流行与发生,论文选用布鲁氏菌活疫苗(A19株)开展骆驼的免疫试验,试验的剂量参照牛的免疫剂量用于骆驼免疫试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 阿克塞县红柳湾镇大坝图村2个养殖场1～3岁骆驼40头,3～12月龄骆驼20头,无布鲁氏菌感染史,免疫前间隔2周连续采血,经虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测阴性。

1.1.2 主要试剂 布鲁氏菌A19疫苗(批号2020009)、疫苗稀释液(批号2020047),天康生物股份有限公司产品;虎红平板凝集试验抗原(批号010012011)、试管凝集试验抗原(批号010042003)、阳性血清(批号010061901)、阴性血清(批号010051904),青岛立见诊断技术发展中心产品。

1.1.3 主要仪器 恒温培养箱,德国3M公司产品;生物安全柜,Heal force公司产品;高速离心机,德国Hevaeus公司产品。

1.2 方法

1.2.1 疫苗使用

(1)用法与用量:皮下注射。标准剂量每头份含活菌数至少6.0×1010CFU(标准剂量)、减低剂量为1.0×109CFU(标准剂量的1/60)。

(2)标准剂量稀释:稀释标准剂量时吸取疫苗稀释液对干粉疫苗进行对等稀释,每毫升含一个标准剂量,盖好瓶盖。使用疫苗时,要使其充分混匀。

(3)减低剂量稀释:0.2 mL标准剂量疫苗加入11.8 mL稀释液即配成减低剂量(标准剂量的1/60)。

1.2.2 试验分组

(1)选取3月龄至3岁以内健康骆驼12峰,分4组(表1)做疫苗免疫安全试验,按照标准剂量和减低剂量分四组进行颈部内侧皮下注射免疫,详细观察并做好免疫前后有关信息的记录,包括精神状态、饮食欲、体温、呼吸、脉搏等变化情况,以及免疫后是否出现过敏反应及其他异常情况等。

表1 布鲁氏菌A19株活疫苗免疫安全试验分组

(2)根据不同年龄和疫苗免疫剂量分4个试验组(表2),开展A19疫苗免疫试验,在骆驼颈部内侧皮下注射免疫后23 d开始分多次进行免疫抗体效价测定。

表2 布鲁氏菌活疫苗A19株免疫试验分组

1.2.3 免疫抗体效价检测 在免疫前、免疫后的23 d(1～3岁组)/38 d(3～12月龄组)、90、180、270和360 d,颈静脉采集3 mL血液样品,分离血清,以备检测。检测方法为虎红平板凝集试验(RBPT) (GB/T 18646-2018)用于血清样品初筛;试管凝集试验(SAT)(GB/T 18646-2018)用于阳性样本复核[8]。

2 结果

2.1 安全性试验

A19疫苗免疫后观察并记录骆驼发热、呼吸、食欲等状况,未出现过敏反应及其他异常情况。

2.2 抗体检测

2.2.1 1～3岁骆驼标准剂量 按照标准剂量注射免疫A19疫苗的1～3岁试验组,免疫后23 d,阳性率100%,凝集率100%(凝集∶抗体滴度≥1∶50,以下同);免疫后90 d,阳性率64.3%,凝集率78.6%;免疫后180 d,阳性率9.1%,凝集率36.4%;免疫后270 d,阳性率9.1%,凝集率18.2%;免疫后360 d,阳性率为0,凝集率10%(表3)。

表3 1～3岁骆驼标准剂量免疫抗体消长情况

2.2.2 1～3岁骆驼减低剂量 按照减低剂量注射免疫A19疫苗的1～3岁骆驼群,免疫后23 d,阳性率94.12%,凝集率94.10%;免疫后90 d,阳性率7.7%,凝集率15.4%;免疫后180 d,免疫抗体阳性率和凝集率均为0(表4)。

表4 1～3岁骆驼减低剂量免疫抗体消长情况

2.2.3 3～12月骆驼标准剂量 按照标准剂量注射免疫A19疫苗的3～12月龄骆驼群,免疫后38 d,阳性率50%,凝集率100%;免疫后90 d,阳性率为0,凝集率为33.3%;免疫后180 d,免疫抗体阳性率和凝集率均为0(表5)。

表5 3～12月龄骆驼标准剂量抗体消长情况

2.2.4 3～12月龄骆驼减低剂量 按照减低剂量注射免疫A19疫苗的3～12月龄骆驼群,免疫后38 d,阳性率16.7%,凝集率达100%;免疫后90 d,阳性率为0,凝集率16.7%;免疫后180 d,免疫抗体阳性率和凝集率均为0(表6)。

表6 3～12月龄骆驼减低剂量免疫抗体消长情况

3 讨论

因布鲁氏菌活疫苗(A19株)不能用于孕畜,本试验选择2月龄到3岁之间骆驼进行免疫试验(阿克塞双峰驼4岁开始配种),重点研究骆驼免疫布鲁氏菌活疫苗A19株后安全性和抗体消长规律,从而选择出适宜的免疫方案,为骆驼布病免疫防疫提供技术支撑,为实现骆驼健康养殖和骆驼产业良好发展保驾护航。骆驼感染布鲁氏菌在埃及、苏丹等国家也有流行病学研究,但临床反应和抗体滴度效价明显低于牛布鲁氏菌病临床反应[9]。本次疫苗免疫骆驼短期内能产生很高的抗体滴度(1∶3 200),且免疫后转阳率较高,证明骆驼对布鲁氏菌活疫苗(A19株)相当敏感。本试验表明,1～3岁组骆驼用标准剂量(6×1010CFU /头)皮下注射布鲁氏菌活疫苗(A19株)免疫效果最好。此外,免疫效果受动物年龄影响较大,对1岁以内的幼龄骆驼免疫,转阳率很低。