不同醋制方法对香附挥发性成分的影响*

谷彩花，陈 卫，牛丽梅，柴丹宁，张 莉，信龙飞，张艳玲**

(1.信阳农林学院 农学院，河南 信阳 464000；2.信阳农林学院 制药工程学院，河南 信阳 464000)

香附为莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根茎，别名莎草、香附子、香附米、莎草根、爪哇草等[1]。最早在《名医别录》中记载并列为中品，继而在《新修本草》中开始被称为香附，后来被列入《本草纲目》草部芳草类，名为莎草香附。其性平，味辛、微苦、微甘，具有疏肝解郁，理气宽中，调经止痛之功效，可用于多种妇科疾病[2]，被誉为“妇科之要药”。香附通过加入不同辅料炮制能够起到不同的药理作用，并且炮制品的功效区别较大[3]，全国18个省市地方药材饮片标准中记载香附有醋制、酒制、四制、姜制、盐炙等多种炮制方法，因香附经醋制后可引药入肝，增强其疏肝解郁之功效[4]，故以醋制法最多，《中华人民共和国药典》2020年版(以下简称《中国药典》)也仅收载醋制香附一种。经对比分析发现，虽名为“醋制”，但各地采用的醋制法亦有不同，如醋炙、醋蒸、醋煮等。目前，有关醋制香附的研究集中在以某一化学成分为指标进行炮制工艺研究方面[5-8]，缺乏对其化学成分变化的具体分析，如醋制时，不同的醋制方法及闷润时间对香附挥发油提取率及化学成分的影响。本研究设置了不同的闷润时间，对比醋炙品和醋蒸品与生品中的化学成分变化，以期为香附的综合开发利用和临床应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

米醋(江苏恒顺醋业股份有限公司，20210123H)、香附(购于河南禹州药材市场，产地河南)，经信阳农林学院农学院张艳玲副教授鉴定为莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根茎。

气相色谱质谱联用仪(Thermo公司，美国，型号：ISQ 7000)；电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司，型号：FA2004)；多功能粉碎机(永康市红太阳机电有限公司，型号：800A)；低温冷却液循环泵(巩义市予华仪器有限责任公司，型号：DLSB-5L/30)；挥发油提取器(盐城新明特玻璃仪器有限公司，相对密度小于1型)。无水乙醚(郑州派尼化学试剂厂，批号：20211226)。

1.2 方法

1.2.1 香附炮制品的制备

取香附样品，去除杂质，切片，作为生品(样品a)。取香附饮片适量，加入20%的米醋拌匀，分别闷制 8 h、16 h、24 h，置 80 ℃ 炒制容器内进行翻炒，取出，放凉，粉碎，过40目筛，作为香附醋炙品(样品b～d)。取香附饮片适量，加入20%的米醋拌匀，分别闷制 8 h、16 h、24 h，加入与米醋等量蒸馏水，蒸制 4 h，闷 2 h，取出，阴干，粉碎，过40目筛，作为醋蒸品(样品e～g)。

1.2.2 香附挥发油的提取及提取率的测定

分别称取不同炮制方法制备的香附粉各 50 g，在圆底烧瓶内加入 1250 mL 蒸馏水，按照2020年版《中国药典》(四部)通则中2204挥发油测定法 (甲法) 测定炮制香附中挥发油的含量。将温度设置为 150 ℃，缓缓加热至沸腾。从沸腾后开始计时，提取 5 h。提取结束后，进行冷却 1 h。冷却结束，开启测定器下端的活塞，缓缓将水放出，读取挥发油体积并计算提取率(挥发油提取率=挥发油体积/香附粉重×100%)。放入冰箱 4 ℃ 进行冷藏保存备用[9-10]。

1.2.3 香附挥发油成分的分析

用移液枪取 10 μL 的香附挥发油置于 10 mL 容量瓶中，加入无水乙醚稀释1000倍，摇均，备用。

GC条件：色谱柱为HP-5ms毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；进样口温度：280 ℃；载气为高纯氦气，恒流，流速为 1.0 mL/min；程序升温，初始柱温为 60 ℃，保持 2 min，以 10 ℃/min 升温速率升至 230 ℃，保持 1 min；进样量为 1.0 μL，不分流。MS条件：离子源温度：280 ℃；连接线温度：250 ℃；电子源：EI；电离能量：70 eV；采集离子范围：33～350 m/z。

2 结果与讨论

2.1 香附挥发油得率的比较

由表1可知，样品a(生品)挥发油提取率最高为1.18%，样品b～d(醋炙品)和e～g(醋蒸品)香附挥发油提取率均低于样品a(生品)，这可能与挥发性成分本身的性质有关，香附在加醋闷润的过程中可以使细胞壁软化，此时药材内部的挥发性成分随之溶出，再进行加热翻炒和蒸制更加速了成分的流失，导致挥发油得率较生品低。在加醋闷制时间相同的条件下，醋炙品挥发油的得率均高于醋蒸品，可能与药材炮制过程中的受热时间有关，炙法通常炮制15～20 min 即可完成，而蒸法却需耗时4小时，其炮制时间远远大于炙法，挥发性成分损失较多引起。数据显示，样品f挥发油提取率最低为1.03%，可能由于该条件下香附中杂质溶出多而影响了挥发油的提取率。

表1 挥发油提取率比较

2.2 香附挥发油的化学成分分析

分别取“1.2”项下方法获得的香附挥发油样品，按“1.2.3”项下测定方法，分别取 1 μL进行测定，得总离子流图(图1～图7)。将质谱所得的信息采用 NIST 14数据库进行相似性检索，对图谱进行分析确定各个化学成分。采用峰面积归一化法得出各化学成分在挥发油组成成分中的相对含量，结果见表2。分析可知，醋制香附挥发油中所含的共有化学成分主要为α-香附酮、香附烯酮和抗氧化剂BHT，现代研究[11]证实，香附具有抗痛经及镇痛药理作用的物质基础正是α-香附酮和香附烯酮，因此醋制香附7个样品中均含有这两种成分，而抗氧化剂BHT相对含量较高但尚未见报道，化学成分6，9-愈创木二烯、(-)-α-古芸烯、α-愈创木烯、Cypera-2，4-diene和β-岩兰草烯含量相对较高，但并非所有样品共有，可能是由于香附经过醋炙制和醋蒸制受到外界温度、湿度、炮制时间等因素影响使其内部化学结构发生改变或成分挥发引起。

图1 样品a的总离子流图

图2 样品b的总离子流图

图3 样品c的总离子流图

图4 样品d的总离子流图

图5 样品e的总离子流图

图6 样品f的总离子流图

图7 样品g的总离子流图

表2 醋制香附挥发油的GC-MS分析结果

2.3 不同炮制方法挥发油提取率与气相色谱综合分析

由表3可知，67.07(醋蒸品 24 h)>66.74(醋蒸品 8 h)>65.60(醋炙品 16 h)>65.04(醋炙品 8 h)>63.55(醋炙品 24 h)>62.42(生品)>61.81(醋蒸品 16 h)，所以采用不同的炮制方法均可影响到香附挥发油得率及化学成分的相对含量。

表3 综合评价表

3 结论

香附多为野生，被李时珍称为“女科之主帅”，是临床上用于治疗妇科疾病的常用中药，现在多为醋制品[12]。本研究对比醋炙品和醋蒸品的挥发油得率和化学成分的相对含量进行综合分析发现，不同醋制品表现出一定的差异。醋蒸制 8 h、16 h、24 h 后再进行炒制或蒸制所得的炮制品挥发油得率均低于生品，与文献报道一致[13]，其原因是在闷润、炒制或蒸制过程中，受温度、时间、湿度等外界条件的影响导致部分挥发性成分散失。但生品及醋制品中化学成分相对含量最高的均为香附烯酮而非α-香附酮，与文献中的研究结果不一致[14]，考虑可能是由于闷润时间、药材产地不同所致。由于临床需求不同，在使用过程中建议综合考虑挥发油得率和化学成分相对含量，本研究结果显示醋蒸品 24 h 综合得分最高，醋蒸品 16 h 综合得分最低，可根据实际需求进行选择闷制时间和炮制方法。药材的炮制对药性有很大的影响，主要在四气五味和升降浮沉以及归经这几个方面，其目的主要在于改变药材的药效和疗效。本试验挥发油的提取方法已应用于实际生产，通过本课题的试验，作了进一步的探究，可以为生产实践提供一些更科学的指导意义，但本试验仅从不同炮制方法对香附挥发油成分这一角度进行比较与分析，缺乏抑菌活性及药理作用方面的研究。