脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

张春香 冀明明 孙敏玲 李建英

(张家口市第一医院 1内科ICU,河北 张家口 075000;2急诊ICU;3康复科)

高血压性脑出血是高血压最严重的并发症之一,好发于50～70岁。临床表现多为小动脉管壁发生玻璃样或纤维样变性和局灶性出血、缺血和坏死,严重时发生血肿扩大、脑水肿加重、颅内压增高、出现呼吸障碍、脉搏减慢、中枢性衰竭〔1～3〕。研究表明,高血压性脑出血临床可采用标准化的降压方案治疗,如α-肾上腺素能拮抗剂,钙通道阻滞剂,α和β受体阻滞剂和利尿剂等〔4,5〕,但是疗效均有限,患者可能出现显著后遗症,新型联合用药是临床治疗高血压性脑出血的重要研究方向。长春西汀注射液联合脑蛋白水解物治疗是脑保护的重要临床治疗药物,研究证实可以在急性脑梗死及动脉硬化脑梗死中发挥重要作用,改善患者神经功能缺损评分与日常生活能力评分,但长春西汀注射液联合脑蛋白水解物是否能够对高血压性脑出血患者发挥脑保护作用尚不清晰〔6,7〕。Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路在氧化应激、炎症机制中发挥重要作用,已被证实该通路的激活可导致多种疾病进展〔8〕,如通过抑制TLR4/MyD88通路可以保护大脑免受缺血/再灌注损伤〔9〕,成纤维细胞生长因子(FGF)10可通过TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻实验性创伤性脑损伤〔10〕,但TLR4/MyD88/NF-κB是否在高血压性脑出血中也受到调控尚不清楚。本研究探讨脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。

1 材料与方法

1.1样本来源 选取2019年3月至2022年3月张家口市第一医院高血压性脑出血患者102例,随机分为对照组(复方丹参液治疗)和实验组(脑蛋白水解物联合长春西汀治疗)各51例,对照组男27例,女24例;年龄46～78〔平均(63.41±5.36)〕岁;病程2～24〔平均(7.43±1.15)〕h;脑出血部位:基底节区35例,脑叶11例,丘脑5例;脑出血量为14～57〔平均(36.68±4.49)〕ml。实验组男26例,女25例;年龄45～76〔平均(62.32±6.39)〕岁;病程2～24〔平均(7.35±1.28)〕h;脑出血部位:基底节区34例,脑叶10例,丘脑7例;脑出血量为22～60〔平均(37.45±6.22)〕ml。两组性别及年龄等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准:(1)年龄40～80岁;(2)基底节区及脑叶等幕上出血;(3)首次发病,病程小于24 h;(4)具有手术适应证。排除标准:(1)外伤性脑出血、脑肿瘤和脑血管畸形患者;(2)脑疝形成、濒死期和重要脏器衰竭者;(3)凝血功能障碍患者;(4)具有全身感染性或免疫系统疾病者;(5)具有其他神经系统疾病者。参与者均签署知情同意书并通过医院伦理委员会审核。

1.2试剂和设备 超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(19160)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(G6137)、丙二醛(MDA)检测试剂盒(MAK085)、人内皮素(ET)-1、酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(RAB1039)、人血管内皮生长因子(VEGF)-A ELISA试剂盒(RAB0507),神经生长因子(NGF)试剂盒(RAB0380)、人TLR-4 ELISA试剂盒(RAB1088)均购于美国Sigma公司;人MyD88 ELISA试剂盒(PRS2127)、人NF-κB-p65 ELISA试剂盒(JL19458-48T)均购于上海江莱生物有限公司;人MyD88 ELISA试剂盒(E-EL-H1967c)均购于武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司,GDSFJM全自动多功能酶标仪购于广东三丰精密仪器有限公司。

1.3临床相关指标 采用头颅CT测定颅内血肿体积,侧脑室置入颅内压监护仪测定颅内压。对照组治疗方式:250 ml的10%葡糖糖液中含20 ml复方丹参液,1次/d,静脉滴注,连续2 w。实验组治疗方式:长春西汀(长春海悦药业有限公司,国药准字H20040484,10 mg)、脑蛋白水解物药液(丽珠集团丽珠制药厂,国药准字H10970191,2 ml),125 ml生理盐水中含20 mg长春西汀和120 mg脑蛋白水解物药液,1次/d,静脉滴注,连续2 w。

1.4神经功能评价 两组神经功评价方法:采用3种评价方式综合评价神经功能,分别为美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)、格拉斯哥昏迷量表(GCS)和Barthel指数评分联合评分。NIHSS:意识、语言和运动等项目,评分范围0～42分,评分高表示神经受损严重。GCS:睁眼、语言和肢体运动等项目,评分范围0～15分,评分高表示意识障碍轻。Barthel指数:认知交流和日常生活能力,评分范围0～100分,评分高表示日常生活能力强。

1.5ELISA检测患者外周血指标 患者静脉采血5 ml,4 ℃ 3 000 r/ min,离心10 min,收集上清液,分装到EP管中,严格按照试剂盒说明,采用ELISA检测血清中SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR-4、MyD88、NF-κB水平,于吸光度450 nm下进行各样本吸光度检测,每个样本3个复孔。

1.6统计学处理 采用SPSS23.0软件进行χ2检验、t检验。

2 结 果

2.1两组临床指标比较 如表1所示,治疗前,两组颅内血肿体积、颅内压均无显著性差异(P>0.05)。治疗后,两组颅内血肿体积、颅内压明显低于治疗前,且实验组颅内血肿体积、颅内压明显低于对照组(P<0.05)。

表1 两组治疗前后临床指标比较

2.2两组治疗前后神经功能评分比较 如表2所示,治疗前,两组神经功能评分无明显差异(P>0.05)。治疗后,两组神经功能评分较治疗前均有统计学差异,且实验组NIHSS评分显著低于对照组,GCS评分和Barthel指数评分显著高于对照组(P<0.05)。

表2 两组治疗前后神经功能评分比较分)

2.3两组治疗前后血清氧化应激指标比较 如表3所示,治疗前,两组血清氧化应激指标无明显差异(P>0.05)。治疗后,两组血清氧化应激指标较治疗前均有统计学差异,且实验组血清SOD和GSH-Px水平明显高于对照组,血清MDA水平明显低于对照组(P<0.05)。

表3 两组治疗前后血清氧化应激指标比较

2.4两组治疗前后血清内皮功能比较 如表4所示,治疗前,两组血清内皮功能指标ET-1、VEGF和NGF水平无明显差异(P>0.05)。治疗后,两组以上指标较治疗前均有统计学差异,且实验组血清ET-1水平明显低于对照组,血清VEGF和NGF水平明显高于对照组(P<0.01)。

表4 两组治疗前后血清内皮功能比较

2.5两组治疗前后TLR4/MyD88/NF-κB信号分子水平 如表5所示,治疗前,两组血清TLR4、MyD88、NF-κB水平无明显差异(P>0.05)。治疗后,两组以上指标较治疗前均有统计学差异,且实验组血清TLR4、MyD88、NF-κB水平明显低于对照组(P<0.01)。

表5 两组治疗前后NF-κB信号通路分子水平比较

3 讨 论

急性高血压性脑出血多由于血压剧烈升高导致血管破裂,病情与患者出血速度、出血部位及出血量相关,如患者得不到及时治疗常导致不同区域脑损伤,如脑岛、皮质、杏仁核、前额叶区或脑干等区域〔11～13〕。我国发病率为(12～15)万例/年,发病30 d内死亡率达到35%～52%,仅有约20%患者在6个月后恢复正常自理生活能力,因此临床研究积极寻找特效药物及联合用药方案,了解联合用药的生物学意义及其在高血压性脑出血中的作用对早期治疗及患者预后脑组织保护具有重要意义〔14,15〕。脑蛋白水解物是大脑特有的肽能神经营养药物,能以多种方式作用于中枢神经,调节和改善神经元代谢,促进突触形成,诱导神经元分化,保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素损害。长春西汀为夹竹桃科植物小长春花中提取物,临床用来上改善脑梗死后遗症、脑出血后遗症、脑动脉硬化症等诱发的各种症状,临床上将脑蛋白水解物和长春西汀联合使用,发现具有治疗血管性痴呆和椎-基底动脉供血不足的作用〔16,17〕,但是其在重症高血压性脑出血中的作用研究较少。本研究结果提示,脑蛋白水解物联合长春西汀能促进术后颅内血肿清除,降低颅内压,加快神经功能恢复,脑蛋白水解物联合长春西汀可以显著降低患者氧化应激损伤,促进神经生长,从而发挥高血压性脑出血患者的脑保护作用。

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路是参与非特异性免疫的重要信号通路,是细胞内炎症和氧化应激信号转导的重要信号通路〔18〕。研究表明,TLR4和AT1R介导自发性高血压大鼠血脑屏障破坏、神经炎症和自主神经功能障碍〔19〕,也有研究证实,远程缺血预处理和后远程缺血预处理通过抑制老年大鼠TLR4/MyD88信号通路减轻缺血性脑损伤〔20〕,本研究结果提示,该通路机制可能与降低炎症反应,减少脑组织炎性损伤有关,通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的信号转导发挥脑保护作用。

综上,脑蛋白水解联合长春西汀治疗后可以显著发挥高血压性脑出血患者的脑保护作用,其机制可能与提高组织抗氧化能力和降低炎性损伤有关,并且可能通过抑制TLR4/MyD88信号转导发挥调控作用。