羊布鲁氏菌病的诊断与检测

文│桑明山（山东省寿光市畜牧业发展中心）

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患传染病，被我国列为二类传染病。牛、羊为主要传染源，羊布鲁氏菌病发病症状最为明显且最易感染人，该病原菌感染羊群后主要表现为母畜流产、不育、繁殖障碍等症状，该病传染性强、传播速度快，一经出现很难控制，对养殖业造成巨大的经济损失，严重危害畜牧业的发展和公共卫生安全。笔者通过分析羊布鲁氏菌病的流行病学特点，针对羊布鲁氏菌病的鉴别与诊断进行了详细总结，以期为羊布鲁氏菌病的防治提供参考。

一、病原特征

1.形态特征。布鲁氏菌（Brucella）属于布鲁氏菌属，是一种革兰氏阴性菌，无芽孢、鞭毛和荚膜，体积0.5～0.7×0.6～1.5微米，在初次分离时显微镜下呈球状，后期传代培养逐渐呈短杆状。布鲁氏菌的细胞壁由肽聚糖和细胞外膜组成，细胞外膜由蛋白质、磷脂层和脂多糖构成（LPS），其中LPS是布鲁氏菌的主要毒力因子。

2.生物学划分。1985年根据布鲁氏菌对宿主的亲嗜性的不同，WHO和FAO将其分为6个种19个生物型，随着布鲁氏菌为适应不同宿主而发生的遗传变异，2009年OIE将其重新分为9个种21个生物型：马耳他型（羊种，1～3生物型）、流产布鲁氏菌（牛种，1～9生物型）、猪种（1～3生物型）、犬种（1生物型）、沙林鼠种（1生物型）、绵羊附睾种（1生物型）等，临床上以羊、牛、猪最为常见，其中羊种致病力最强。

3.培养特性。布鲁氏菌是一种需氧菌，多株菌共同生长时还需要5%左右的CO2，嗜酸性生长，最适pH为6.4，最适生长温度为36～37℃，该菌生长时需要较高的营养，在普通培养基上不生长，但在适合的环境下生长缓慢，初次分离的菌需要5～30天完成一次培养，多次传代后需要10～72小时完成生长。液体培养基上生长时，培养初期菌落较小，呈光滑的圆形，培养基为无色透明，后期形成菌环，培养基逐渐浑浊呈黄色；在固体培养基上生长时，培养基上可生长无色透明的光滑（S）型菌落、浅黄色颗粒状的粗糙（R）型菌落和混浊粘胶状的黏液（M）型菌落。当布鲁氏菌受到抗生素影响时容易引发变异，如细胞外膜的脂多糖受损后，菌落从S型变为R型，细胞壁的肽聚糖受损时菌落细胞壁缺失形成L型细菌，

4.细菌抵抗力。自然状态下布鲁氏菌的生产能力很强，对干燥、寒冷具有很高的抵抗力，能在污染的水源、土壤、患病动物的分泌物中存活1～4个月，在衣物、皮毛上可以存活5个月。但该病原菌对热敏感，60℃暴露30分钟或70℃暴露5分钟即可被灭活。同时，布鲁氏菌对一般消毒剂敏感，0.5%洗必泰、0.2%漂白粉溶液和2%来苏尔溶液5分钟内可将其杀灭。

二、流行病学

1.传染源及传播途径。目前已知有60余种家畜和野生动物可作为布鲁氏菌病的宿主，猪、牛、羊是主要传染源，不同种动物之间可以相互传染，其中慢性感染的动物危害最大，临床上无明显症状，长期排毒，污染环境，部分感染动物可以终生携带病菌。布鲁氏菌主要通过消化道传播，通过食用感染的饲料、水源、肉、奶从黏膜侵入机体。同时也可通过皮肤黏膜进行传播，长期接触感染动物的尸体、排泄物、皮毛的相关从业人员极易感染此病。此外，该病也可通过呼吸道、蚊虫叮咬、眼结膜等途径传播。

2.易感动物。羊布鲁氏菌病的易感动物与动物的年龄和生理状况相关，该病的主要症状是繁殖障碍，动物年龄较小时生殖器发育不完全，感染率较低，随着动物生殖器官逐渐成熟，对该病的易感性不断增加，初次妊娠的母羊最易感，但随着产子次数增多，抵抗力也逐渐增强，老龄动物不易感。

3.流行特点。羊布鲁氏菌病无明显季节性，一年四季均可发病，但在母畜生产的4～8月为高峰期。该病有较强的适应性，在全国各地普遍存在，多发于高温地区，牧区发病率高于农村地区。

三、诊断

1.临床症状。羊布鲁氏菌病的潜伏期在半个月左右，少数病例潜伏期长达数月或一年，患病动物通常表现为隐性感染，临床症状不明显，发病初期体温升高、精神萎靡，出现关节炎、腱鞘炎、滑膜炎、结膜炎等症状，患病母羊流产前阴唇、乳房肿大，阴道内肿胀、充血，阴道内有黄色、灰褐色的恶臭黏液流出，妊娠3个月左右出现流产，生产胎儿大多数为死胎，流产后出现子宫内膜炎、子宫蓄脓等症状。患病公羊出现睾丸炎。

2.病理剖检。患病动物病理变化主要表现在生殖系统，流产母羊的子宫绒毛叶出现贫血，呈黄色，表面黏着黄绿色或灰色的脓液絮状物、纤维蛋白、脂肪状的渗出物；流产胎儿出现败血症病变，胃内存在大量黄白色黏液样絮状物，肠、胃、脐带等部位有出血点，脾、肝、淋巴结肿胀，有不同程度的坏死灶，肺部出现支气管炎和肺炎病灶，胎衣出现黄色胶冻样浸润，部分被纤维蛋白脓液覆盖；患病公羊睾丸和附睾有坏死灶，随着病程的发展睾丸逐渐萎缩。

四、检测

1.病原学检测。病原学检测较为常见，采集疑似患病母羊的粪便、乳汁、阴道分泌物、羊水或流产胎儿的胎衣、肺、淋巴结等病料，将其制成玻片进行革兰氏染色和柯兹洛夫斯基染色，通过显微镜观察发现病原菌呈红色短杆状，可初步鉴定为布鲁氏菌，之后将未污染的病料接种于血液琼脂、胰蛋白胨琼脂、肝汤琼脂培养基上培养，陈旧病料或污染病料可以在选择培养基上培养。通过菌落的生长特性、形态大小、生化反应进行鉴定。

2.凝集试验。血清凝集实验是通过已知的抗体或抗原检测病料中的布鲁氏菌，传统的凝集实验包括试管凝集试验（SAT）和平板凝集试验，试管凝集试验是将待检血清倍比稀释分别与抗原相结合，观察有无凝集，可对血清中的抗体进行定量，是早期检测布鲁氏菌病的方法。目前常用的方法为虎红平板凝集试验（RBPT），将已知抗原滴加在玻璃片上，将分离出的羊血清和抗原混合，反应4分钟后肉眼判断出现颗粒状凝集，血清滴度为1∶50判断为阳性。该方法反应迅速、操作简单、价格便宜，常用于基层兽医检疫工作的普查与初筛，但容易出现假阳性，对血清样本要求较高。

3.补体结合试验。补体结合试验（CFT）的原理是将抗原、补体、待检血清3种成分混合，再加入红细胞和溶血素，补体能与抗原抗体复合物或红细胞与溶血素复合物相结合，当待检血清中存在抗体，与抗原形成抗原抗体复合物，吸附补体，反应系统中无游离的补体，则不会引起红细胞溶血，补体结合反应呈阳性，说明该羊患有布鲁氏菌病。CAT是检测布鲁氏菌病最准确、有效的诊断方法之一，其操作方法有具体的国际化标准，判断标准统一，是国际贸易中检测羊布鲁氏菌病的指定方法，但其操作复杂，无法在基层推广。

五、防控

1.免疫与预防。免疫接种是控制羊布鲁氏菌病最有效的措施，目前我国常用的疫苗有S2苗（猪布鲁氏菌2号弱毒活疫苗）、M5苗（羊布鲁氏菌5号弱毒活疫苗）和RevⅠ疫苗（羊布鲁氏菌RevⅠ型弱毒活疫苗），其中S2毒力稳定，安全性高，妊娠母羊也可使用，对羊、牛都有很好的免疫保护效果，可通过皮下注射、饮水、气雾等方式进行免疫，对羊、牛的免疫期长达两年。但疫苗接种只能降低感染羊布鲁氏菌病的风险，且疫苗接种后的保护效果具有时效性，所以还需要对羊群进行检查，每年对新生羔羊、未免疫羊群和免疫一年半以上的羊群进行检测。同时坚持自繁自养，定期对养殖场进行消毒，加强对羊群的饲养管理，保证羊圈的卫生环境。

2.疫情处理。羊布鲁氏菌病属于人畜共患传染病，一经扩散很难控制，而且布鲁氏菌属于兼性细胞内寄生，暂无合适的治疗药物，不提倡使用抗生素治疗，避免出现耐药菌株。所以发现疑似病例，尤其是妊娠母羊出现流产症状，应立即将其隔离，进行血清学检查，结果为阳性后向当地动物防疫监督机构报告，并划分疫区和控制区，通过实验室复诊后将疫区内的患病动物全部扑杀，根据《畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程》（GB-16548-2006）对流产的胎儿、排泄物、胎衣、乳、尸体进行无害化处理，对患病动物接触过的场所、用具、饲料进行消毒和处理，并进行流行病学调查，追溯发病源头。

六、结语

羊布鲁氏菌病属于慢性传染病，临床上无明显症状，常被忽略，随着羊的养殖规模不断扩大，一旦暴发会对养殖业造成巨大的损失，危害周边人类健康。因此，在生产过程中，结合布鲁氏菌病的特点定期对羊布鲁氏菌病进行鉴别，尽早诊断，做好防疫工作，减少羊布鲁氏菌病的发生，一旦检测出阳性要立即扑杀，并做好无害化处理，将疫病危害降到最低。