外周血miR-30a对脓毒血症并发ARDS患者预后的预测价值

欧阳银, 唐伟伟

安庆市立医院急诊科, 安徽安庆246003

脓毒血症是临床较为常见的危重症状,流行病学调查显示,脓毒血症的发病率为0.3%,随着人口老龄化的不断升高,脓毒血症的发病率也呈现逐年上升的趋势[1-2]。如果临床对脓毒血症不及时进行有效科学的治疗,最终会导致多器官受累[3]。肺是最早也是最常见的受累器官,随着肺内炎症细胞的聚集以及炎症介质的释放,免疫失调,肺泡上皮细胞和肺毛细血管内皮细胞损伤,弥漫性肺间质和肺泡水肿,最后引发急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS),ARDS是临床较为常见的脓毒血症的并发症[4]。随着患者ARDS的发生,病情逐步加重,病死率也呈现显著的上升趋势。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)作为一种氧化应激信号转导的重要物质,细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)属于MAPK家族,ERK信号通路是一种重要的信号转导通路[5]。miR-30a能够促进气道上皮细胞的新生血管增生,进一步造成气道的高反应性,引发机体产生ARDS[6]。而在ARDS的疾病进展过程中,ERK蛋白、磷酸化蛋白的异常表达最终会造成组织细胞的凋亡,而在此过程中会导致外周血miR-30a水平升高,因此miR-30a水平的监测对于患者的预后评价具有重要的意义。本研究主要分析外周血miR-30a对脓毒血症并发ARDS患者预后的预测价值,以期指导临床诊治。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2021年1月—2022年7月在本院就治的100例脓毒血症合并ARDS患者为研究对象,其中男66例,女34例,平均年龄(70.95±11.40)岁,体质指数(24.83±1.02)kg/m2,急性生理与慢性健康评分(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEII)为(21.49±5.65)分,序贯器官衰竭估计评分(sequential organ failure assessment,SOFA)为(8.91±2.79)分。根据患者28天的生存情况分为死亡组35例,生存组65例,两组患者的一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05;表1)。本研究经本医院伦理委员会论证通过,所有患者均签署知情同意书。纳入标准:①符合欧洲危重医学会颁布的脓毒血症诊断标准[7];②符合呼吸窘迫综合征诊断标准。排除标准:①合并慢性心、肝、肾等脏器功能严重障碍;②伴有急性冠状动脉综合征;③伴有恶性肿瘤疾病;④近3个月接受免疫抑制剂治疗。

表1 两组临床资料比较

1.2 miR-30a检测

所有患者入院后,均静脉采血4 mL,按照TRIzol试剂(北京百奥莱博科技有限公司)说明书提取血清总RNA,采用qRT-PCR方法进行扩增,扩増方法:95 ℃条件下预变性5 min,94 ℃变性30 s,50～60 ℃退火30 s,72 ℃延伸10 min,35个循环。miR-30a的检测采取2-ΔΔCT方法进行计算,ΔCT=CT目的基因-CT内参。

1.3 ERK蛋白及磷酸化蛋白水平测定

Western blotting实验严格按照试剂盒操作,采用Image-lab软件进行条带分析,以β-actin为参考蛋白,计算两组的MAPK通路中的ERK蛋白及磷酸化蛋白水平。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计软件处理数据。计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验。采用ROC曲线分析miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白对预后的预测价值。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者的miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白水平比较

死亡组的miR-30a水平、磷酸化蛋白高于生存组,ERK蛋白低于生存组(P<0.05;表2)。

表2 两组患者的miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白水平比较

2.2 miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白对死亡的联合检测效能比较

通过联合检测效能进行分析,miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白联合检测对脓毒血症并发ARDS的诊断特异度较高(表3)。

表3 miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白联合检测效能比较 %

2.3 ROC曲线分析

ROC曲线分析显示,miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白联合检测对脓毒血症并发ARDS患者预后的预测效能高于单独检测(表4和图1)。

图1 ROC曲线分析

表4 ROC曲线分析

3 讨 论

脓毒血症的病理基础为全身性的炎性反应,随着疾病的进展,全身的炎症细胞被过度激活后,机体的炎性反应呈现级联反应,机体对于炎性反应的控制水平显著下降,严重影响患者的生命安全[8-9]。在疾病的早期,及时对ARDS产生的风险进行评估,及时通过有效措施降低患者发生ARDS的风险,对于临床具有积极的意义。但是在临床指标中,由于脓毒血症患者的炎性反应以及氧化应激反应对常规的生化指标的干扰,采取常规生化指标对患者的ARDS进行预测存在一定的局限性[10]。微小核苷酸是近年来的研究疾病进展的热点,其相对稳定性对于临床治疗具有相对的指导意义[11]。在脓毒血症患者的疾病进展中,其引发的炎症瀑布反应均会造成呼吸道黏膜的损伤,其发生ARDS的风险显著升高[12]。

ERK蛋白作为MAPK家族,参与调控气道上皮细胞相关炎症因子的表达[13]。而在此阶段,随着炎性反应的不断变化,最终引发机体的正常呼吸道黏膜细胞的损伤以及凋亡,在此过程中,miR-30a在血清中的释放水平显著升高。而在本研究中,合并ARDS患者的miR-30a水平呈现上升趋势。miR-30a主要存在呼吸道黏膜细胞中,随着脓毒血症疾病的不断进展,其局部产生的炎症因子对于黏膜细胞的刺激性作用,其发生凋亡的风险显著升高,在呼吸道细胞中的miR-30a不断在血液中释放,造成miR-30a的显著升高[14]。通过对miR-30a、ERK蛋白、磷酸化蛋白的联合检测的效能分析,对ARDS的预测效能升高,可作为临床诊断的重要依据。提示miR-30a可通过对ERK蛋白、磷酸化蛋白的显著调控作用,进而影响患者的疾病进展。miR-30a还可通过对细胞之间的脂质代谢的调节,影响细胞与细胞之间的黏附作用,也是患者ARDS进展的重要因素。miR-30a是MAPK/ERK信号途径的重要节点,通过对患者的miR-30a水平的检测,可以有效对患者的预后进行预测。

综上所述,外周血miR-30a、ERK蛋白以及磷酸化蛋白表达异常可作为脓毒血症并发ARDS患者预后判定的重要依据。