LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌组织中的表达及与预后的相关性

何倩影 刘 洋 李红强

作者单位：450000 郑州大学第一附属医院

甲状腺癌在临床具有较高的发病率,且发病人群趋于年轻化[1-2]。手术是临床治疗甲状腺癌的有效方法,可通过切除病灶控制病情发展,于疾病早期行手术治疗预后较好,中晚期患者手术治疗后预后相对较差。临床探寻可预测患者预后相关标志物,指导临床采取针对性治疗,对于改善患者预后意义重大[3-4]。随着临床对于分子生物标志物研究的不断深入,较多的标志物被发现与甲状腺癌患者的预后密切相关[5-6]。长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(LncRNA MIAT)可通过转录与转录后等途径参与癌细胞的增殖、侵袭与生长,在多种恶性肿瘤患者中呈异常表达。而LIM和SH3蛋白1(LASP1)蛋白为细胞运动过程内常见关键蛋白因子。基于此,本研究以63例甲状腺癌患者为研究对象,分析LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与患者预后的联系,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年6月至2019年6月该院诊治的63例甲状腺癌患者。纳入标准:经病理检查证实为甲状腺癌;患者病历有关资料齐全;患者纳入遵照自愿原则,签署知情同意书。排除标准:存在其他恶性肿瘤者;合并凝血功能异常者;合并全身性感染者;存在免疫系统或凝血功能异常者;存有酒精、药物依赖史者;伴有心脏病、糖尿病者。所有患者中男性29例,女性34例;年龄35～71岁,平均年龄(52.69±7.48)岁;体重指数(BMI)18.6～27.3 kg/m2,平均BMI(23.67±1.53)kg/m2。

1.2 方法

标本采集:术中采集所有患者的癌组织与癌旁正常组织,留存待检。以逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)测定LncRNA MIAT:先以TRIzol法提取所有组织内的总RNA,按检测试剂盒操作步骤获取cDNA;之后运用荧光定量PCR仪对LncRNA MIAT与内参GAPDH行扩增反应;qRT-PCR反应体系20 μl:2×UltraSYBR Mixture 10 μl,上游与下游引物均为2 μl,cDNA模板2 μl,ddH2O 4 μl;反应条件:95 ℃ 3 min,95 ℃ 30 s,58 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,共30个循环,72 ℃ 10 min;之后以2-△△ct法测定LncRNA MIAT相对表达量,相对表达量在1及以上定位高表达,反之为低表达。以免疫组织化学法检测LASP1蛋白表达:常规制作甲状腺癌组织和癌旁组织石蜡切片,厚度4 μm,脱蜡、水化;以柠檬酸钠缓冲液行抗原修复,滴加3%过氧化氢溶液,在室温条件下施行15 min的孵育,然后用磷酸缓冲盐溶液(PBS)洗涤3次;以10%山羊血清在室温条件之下封存30 min,滴加一抗,在4 ℃环境下过夜,次日以PBS洗涤3次,滴加二抗后在室温条件下孵育30 min;之后以苏木精染色,脱水并封片,于显微镜下观察。阳性判定标准:①染色强度:0分:无着色;1分:浅黄色;2分:棕黄色;3分:棕褐色。②阳性细胞数评分:随机取10个具有代表性的视野计算阳性表达率,阳性表达率=阳性细胞数/肿瘤细胞总数×100%;1分:阳性表达率<10%;2分:10%～50%;3分:>50%。两者相乘总分大于3分为阳性表达,反之为阴性表达。

1.3 观察指标

(1)癌组织与癌旁正常组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白阳性表达。(2)LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者年龄、性别、肿瘤部位、病灶数、有无淋巴结转移等的关系。(3)LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者预后的关系。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 癌组织与癌旁正常组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白阳性表达对比

癌组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织,有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 癌组织与癌旁正常组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白表达对比

2.2 LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者临床病理特征的关系

LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者的淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、病灶数无关(P>0.05)。见表2。

2.3 LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者预后的关系

Kaplan-Meier结果显示:LncRNA MIAT高表达、LASP1蛋白阳性表达患者的3年生存率[39.47%(15/38)、46.00%(23/50)]低于LncRNA MIAT低表达、LASP1蛋白阴性表达患者[72.00%(18/25)、76.92%(10/13)],有统计学差异(χ2=6.396、3.955,P=0.011、0.047)。

3 讨论

甲状腺癌的发病机制较为复杂,临床通常认为与癌基因、生长因子、遗传等密切相关。由于甲状腺癌初期多无明显特征,故多数患者经临床确诊时已错过最佳治疗时机,预后相对较差[7]。因此,选择一有效的诊断手段,尽早明晰甲状腺癌严重程度,指导临床施行个体化的治疗措施,对于改善患者预后意义重大。

LncRNA MIAT是一种长度>200 bp,但不存在编码蛋白质功能的RNA,且其机制多为负向调控某种抑癌微小RNA(miR)表达[8-9]。LncRNA MIAT通过靶向调控miR水平,继而参与疾病的进展[10]。LASP1于乳腺癌内被首次发现,属肌动蛋白结合蛋白,在调节细胞运动与伪足延伸中至关重要,与癌细胞的转移、侵袭联系紧密[11-12]。同时,该因子还可当成转移有关的蛋白质,以此参与肿瘤的发生,其在细胞骨架的形成中发挥关键功效,且为不同肿瘤的预后标志物。本研究结果显示,癌组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织;LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者的淋巴结转移、临床分期有关,提示两项指标在甲状腺癌患者的癌组织中表达水平较高,可能参与甲状腺癌发生、发展的过程。本研究结果还显示:LncRNA MIAT高表达、LASP1蛋白阳性表达患者的3年生存率低于LncRNA MIAT低表达、LASP1蛋白阴性表达患者,提示LncRNA MIAT高表达、LASP1蛋白阳性表达患者预后更差。因此,临床对于LncRNA MIAT高表达、LASP1蛋白阳性表达患者需定期检查,及时施行个体化治疗,以减少不良预后的发生。

综上所述,LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌患者癌组织内表达水平较高,两项指标参与甲状腺癌的发生与发展,且表达水平越高,患者预后越差。