武汉城市圈献血人群戊型肝炎病毒流行情况调查

余琴 许婷婷 张丽洁 赵磊

（武汉血液中心，湖北 武汉 430030）

戊型病毒性肝炎由戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）感染引起，严重危害人类健康[1]。近年来，戊型肝炎发病率呈上升趋势，我国制定的《传染病防治法》已将戊型肝炎列为主要肝炎之一。自然人群中存在大量的HEV 无症状感染者，而HEV 可经输血传播，这对输血安全构成潜在风险。目前已有部分国家对献血者进行HEV常规性筛查或选择性筛查[2-6]。由于我国无偿献血人群HEV的流行病学数据仍不够完整，HEV 尚未被列入到献血者血液标本的常规检测中。多项研究显示，HEV 感染呈现显著的地域及人群分布差异[7-8]。因此，调查不同区域无偿献血者的HEV 感染情况，对于反映我国无偿献血人群HEV感染状况及制定无偿献血者HEV 筛查策略具有重要意义。本研究旨在调查武汉城市圈不同地区无偿献血人群的HEV 流行情况，为献血者HEV筛查策略的制定提供数据支撑。

1 材料与方法

1.1 标本来源

随机收集2021 年1—12 月武汉血液中心实施集中化检测的4个地区（鄂州、天门、仙桃、潜江）献血者血液标本3 329 份（-40℃保存）。献血者年龄在18～60 岁，均经血液传染性指标HBsAg、抗-HCV、HIV Ag/Ab、梅毒抗体和ALT筛查。其中检测项目全部合格（ALT正常组）的血样2 737份，ALT＞50 U/L（ALT升高组）的血样592份。本研究经武汉血液中心伦理委员会审查批准（KY2020-06）。

1.2 试剂与仪器

抗-HEV IgM检测试剂（批号：EM2021 0904B）、抗-HEV IgG 检测试剂（批号：EG20211005B）和HEV Ag 检测试剂（批号：EV20210802A）均为北京万泰生物药业有限公司产品。HEV RNA检测试剂（PCR-荧光法）（苏州新波生物技术有限公司，批号20210702）。所有试剂均在有效期内使用。STAR全自动加样仪与FAME 24/20 全自动酶免分析仪（HAMILTON公司）；Pre-NAT Ⅱ全自动核酸检测反应体系构建系统（上海浩源公司）；ABI 7500实时荧光定量PCR 仪（Applied biosystems 公司）。所有仪器设备的使用均在校验有效期。

1.3 方法

1.3.1 ELISA法检测抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV Ag

每份标本取10 μL 或100 μL 血浆，按照抗-HEV IgG、IgM 和HEV Ag 试剂说明书进行检测，双波长OD 450 nm/620 nm 测定。检测结果的判定参照试剂说明书进行。

1.3.2 Real-time PCR检测HEV RNA

对592份ALT＞50 U/L的标本和抗-HEV IgM阳性的合格标本进行单人份核酸检测。每份标本取1.6 mL，RNA的提取和PCR扩增按照试剂说明书进行。HEV RAN 试剂单人份的分析灵敏度为3.51 IU/mL[95%LoD(2.34～5.43)IU/mL]，8人份的分析灵敏度为24.33 IU/mL[95% LoD (21.72～38.61)IU/mL），可覆盖HEV基因1～4型。

1.4 统计学分析

统计分析使用SPSS 20 软件统计数据，使用GraphPad Prism 8.0 作图。采用频率（n）和百分比（%）来描述分类变量，95%置信区间（CI）估计比例。采用χ2检验或Fisher 精确检验来评估不同地区和不同ALT 水平组抗-HEV IgG 和抗-HEV IgM阳性率的差异，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同地区献血者ALT检测情况

见表1。ALT 升高组中鄂州、天门、仙桃、潜江4 个地区献血者的ALT 值分布情况如图1，中位数分别为69.5 IU/mL、71.5 IU/mL、76.5 IU/mL 和71.3 IU/mL。

图1 ALT升高组不同地区献血者ALT值分布情况Figure 1 Distribution of ALT values among blood donors from different regions in the elevated ALT group

表1 不同地区献血者ALT检测情况（n，%）Table 1 ALT results among blood donors in different regions

2.2 不同地区献血者抗-HEV IgG、IgM、HEV Ag、HEV RNA检测结果

ALT正常组2 737份标本均未检测出HEV Ag，28 份抗-HEV IgM 阳性标本未检测出HEV RNA；ALT 升高组592 份标本均未检测出HEV Ag 和HEV RNA，见表2。献血者抗-HEV IgG 阳性率最高的是天门29.44%（136/462），其次是潜江22.69%（236/1 040）、仙桃22.66%（230/1 015）、鄂州14.53%（118/812）（χ2=40.076，P＜0.05）；抗-HEV IgM 阳性率最高的也是天门2.38%（11/462），其次是仙桃1.58%（16/1 015）、潜江0.96%（10/1 040）、鄂州0.74%（6/812）（χ2=7.78，P＞0.05）。

表2 不同地区献血者抗-HEV IgG/IgM检测结果比较Table 2 Comparison of anti-HEV IgG/IgM results among blood donors from different regions

3 讨论

HEV 感染引起的戊型肝炎已经成为全球公共卫生健康问题。近年来，我国戊型肝炎报告发病率呈上升趋势，2004 年为1.27/10 万，2019 年上升至2.02/10万[9]。HEV虽是可经输血传播病原体，但是我国现行的血液筛查策略中并没有明确对无偿献血者血液开展HEV常规性或选择性筛查。虽然近些年我国多地采供血机构对无偿献血人群进行了HEV 流行情况的调查研究，但是相关数据还不够完整，我国献血者血液HEV 筛查策略的制定还需更多的数据支撑。

HEV 流行具有显著的地域特征。我们前期调查显示武汉地区献血者HEV IgG 流行率为16.44%，抗-HEV IgM 流行率为1.0%，HEV Ag 流行率为0.08%，HEV RNA流行率为0.058‰[10-11]。2016年的1项多中心Meta分析显示，我国无偿献血人群抗-HEV IgG 阳性率为29.2%、抗-HEV IgM 阳性率为1.1%、HEV Ag 阳性率为0.1%，不同地区之间的抗-HEV阳性率差异较大[12]。2023年的多中心Meta分析结果显示，我国无偿献血人群抗-HEV IgG 流行率为23.0%，抗-HEV IgM 流行率为1.13%，不同城市和地区之间存在显著性差异[13]。本研究调查的抗-HEV IgG 阳性率低于2016 年而接近于2023年的分析数据，抗-HEV IgM 阳性率较稳定及一致。与其它国家或国内其他地区的调查数据相比，如中国香港（抗-HEV IgG 15.8%；抗-HEV IgM 0.8%）、法国（抗-HEV IgG 7.7%；抗-HEV IgM 0.6%）、爱尔兰（抗-HEV IgG 5.3% 、抗-HEV IgM 0.19%）、美国（抗-HEV IgG 12.28%；抗-HEV IgM 0.67%）[14]，本研究献血人群的抗-HEV 流行率较高。这提示HEV 在武汉城市圈4 地区献血人群中存在较高流行。同时，本研究结果显示4个地区献血人群抗-HEV IgG 阳性率有差异（P＜0.05）。抗-HEV IgG流行率的地区差异，推测可能与地区经济发展、人群结构、医疗卫生条件、防控重视程度等综合因素有关，不同地区流行差异具体原因还有待进一步研究。

众所周知，ALT 水平升高与病毒性肝炎相关。在一些HEV 感染的受试者中，ALT 水平升高可能伴随着急性无症状或有症状的感染，并可持续长达6周。因此，无症状的ALT水平升高可能是活动性和传播HEV 的非特异性标志物。Ren 等[15]对来自中国5个地区747名ALT水平升高献血者进行的一项研究显示，ALT水平升高献血者抗-HEV IgG阳性率和抗-HEV IgM 阳性率均高于ALT 正常献血者（40.02%vs27.42%,P＜0.01；2.76%vs1.02%,P＜0.01）。本研究的结果与该报道一致。有研究表明，ALT 水平升高献血者与ALT 正常献血者相比，HEV Ag 和HEV RNA 的检出率更高[16]。抗-HEV IgM 是HEV 近期感染的标志物。因此，本研究对592 份ALT 水平升高献血者标本和28 份抗-HEV IgM 阳性的ALT 水平正常献血者标本进行HEV RNA 单人份检测，但均未检测出HEV RNA。其原因可能是：1）ALT 水平升高可能不是活动性HEV感染的敏感标志物；2）HEV RNA的诊断窗口较短，通常仅在感染后持续4～6 周，所取血样不在诊断窗口期内；3）武汉城市圈4地区献血人群现症感染率较低。据文献报道我国HEV RNA 流行率为0.028%，法国为1∶744（0.13%），德国为1∶1 241（0.08%），荷兰为1∶1 987（0.05%），西班牙为1∶3 846（0.03%），英国为1∶4 771（0.02%）[2,13]，因此本研究未检测出HEV RNA可能是由于检测标本数有限。

本研究也存在不足之处：首先是标本量不够大，后期需要进行更大规模的研究来确认HEV RNA 的流行率、基因型以及输血传播的风险；其次是本研究仅对ALT 水平升高献血者和IgM 阳性的合格献血者进行了HEV RNA 单人份检测，没有筛查所有合格献血者的标本，可能导致低估HEV RNA 的流行率。尽管存在这些局限性，但本研究是在前期的调查基础上，进一步对武汉周边地区献血人群HEV 流行率调查，可丰富我国无偿献血人群HEV 感染数据，并为献血人群HEV 筛查策略的制定提供一定的数据支撑。综上所述，本研究调查了武汉城市圈无偿献血人群HEV 的流行情况，HEV 在武汉城市圈献血人群中存在流行，但现症感染率极低，且不同地区抗-HEV 抗体阳性率存在差异。我国无偿献血人群HEV血液筛查策略有待进一步完善。