错配修复蛋白3在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

修小斐 高峰 王晓梅 徐嘉曼 肖雪兰 王大维

[摘要] 目的 探讨错配修复蛋白3（MutS homolog 3，MSH3）在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。方法 采用免疫组化检测20例正常口腔黏膜和60例口腔鳞状细胞癌组织中MSH3蛋白的表达。结果 口腔鳞状细胞癌组织中MSH3的阳性表达低于正常口腔黏膜。其中，高分化和中分化鱗状细胞癌中MSH3阳性表达高于低分化。与有淋巴结转移的鳞状细胞癌患者比较，无淋巴结转移的患者MSH3阳性表达明显升高。MSH3表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小无相关性。结论 MSH3蛋白表达降低与口腔鳞状细胞癌的分化程度和淋巴结转移相关，MSH3可能在口腔鳞状细胞癌进展过程中发挥重要作用。

[关键词] 错配修复蛋白3；口腔鳞状细胞癌；免疫组化；分化程度；转移

[中图分类号] R739.8    [文献标识码] A     [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2024.02.006

Expression of MutS homolog 3 in oral squamous cell carcinoma and its significance

XIU Xiaofei1， GAO Feng1， WANG Xiaomei1， XU Jiaman2， XIAO Xuelan1， WANG Dawei1

1.Department of Pathology， the Third Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang 050051， Hebei， China; 2.Department of Oral surgery， the Third Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang 050051， Hebei， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of MutS homolog 3 （MSH3） in oral squamous cell carcinoma and its significance. Methods The MSH3 protein expression was examined by immunohistochemistry in 20 normal oral mucosa and 60 oral squamous cell carcinoma tissues. Results Our results showed that MSH3 expression in oral squamous cell carcinoma tissues was lower than normal oral mucosa. The MSH3 expression in oral squamous cell carcinoma tissues with better differentiation was higher than that with worse differentiation. The positive MSH3 expression decreased from oral squamous cell carcinoma patients without lymph nodal metastasis to that with metastasis. MSH3 expression was not related to the patients’ gender， age， tumour location or size. Conclusion Downregulation of MSH3 is consistent with poorly differentiation and nodal metastasis in oral squamous cell carcinoma. MSH3 may play a significant role in the malignant progression of oral squamous cell carcinoma.

[Key words] MutS homolog 3; Oral squamous cell carcinoma; Immunohistochemistry; Differentiation; Metastasis

DNA错配修复（mismatch repair，MMR）系统是DNA重组和复制过程中纠正碱基错配的重要DNA修复途径，是细胞维持基因组稳定的必要条件，也可以调节肿瘤细胞对放疗和化疗药物的敏感性[1]。错配修复蛋白3（MutS homolog 3，MSH3）位于5q11-q12染色体上，是MMR系统的重要成员[2]。有研究表明，MSH3的表达降低或缺失可导致多种恶性肿瘤的发生，40%～60%的结直肠癌中出现异常MSH3表达，并与预后不良有关[3]。然而，MSH3的表达与口腔鳞状细胞癌的关系未见报道。本研究检测MSH3在正常口腔黏膜和口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况，分析口腔鳞状细胞癌MSH3蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度及淋巴结转移的关系，为口腔癌的诊断和预后评估提供依据。

1  资料与方法

1.1  标本收集

收集2019至2020年河北医科大学第三医院病理科诊断的口腔鳞状细胞癌标本60例，其中高+中分化41例、低分化19例，术前均未接受放疗或化疗。患者年龄为52岁（28～81岁）。根据肿瘤部位，舌癌27例、牙龈癌18例、颊癌15例。无淋巴结转移37例，有淋巴结转移23例。20例正常口腔黏膜组织为同期牙槽嵴整形手术切除的样本，经组织学检查无鳞状细胞癌和癌前病变。该研究经河北医科大学第三医院医学伦理委员会讨论审议并批准（伦理审批号：G2020-007-1）。该研究患者均已签署知情同意书。

1.2  免疫组化检测

石蜡包埋组织切片（4μm）后常规脱蜡至水，在0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（pH值为6.0）中高压锅中煮沸10min，室温静置30min，磷酸盐缓冲液（PBS，pH值为7.4）洗涤3次。内源性过氧化物酶的活性在0.5%H2O2甲醇中阻断10min，4℃下加入MSH3一抗（1：100，英国Abcam公司）孵育过夜。MaxVisionTMHRP试剂（福州迈新生物科技有限公司）在37℃下孵育30min，PBS洗涤，DAB显色，用苏木精复染后，中性树胶封片。

1.3  结果判定

双盲条件下，由两位有经验的病理科医师对免疫组织化学结果进行评估。MSH3在细胞核呈棕黄色颗粒表达。根据视野下细胞染色强度和阳性率进行评分判定：无着色为阴性；≤5%的细胞呈现不同程度的细胞核着色为弱阳性；5%～25%的细胞呈现强的细胞核着色或≤75%呈现弱或中等强度的细胞核着色为中阳性；>25%的细胞呈现强的细胞核着色或>75%呈现中等强度细胞核着色为强阳性。根据临床病理特征的相似性，将MSH3阴性、弱阳性染色划分为阴性表达组，中、强阳性染色划分为阳性表达组。

1.4  统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行处理分析，采用χ2检验进行分析，数据以n（%）表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1&nbsp; 正常口腔黏膜和鳞状细胞癌组织中MSH3表达

免疫组化检测MSH3在正常口腔黏膜上皮和鳞状细胞癌细胞核表达。在正常口腔黏膜，大部分（95%）MSH3为阳性表达，仅有1例（5%）为阴性表达组。40例（67%）鳞状细胞癌组织为阳性表达，20例（33%）为阴性表达。口腔鳞状细胞癌MSH3表达阳性水平明显低于正常口腔黏膜（χ2=6.22，P=0.013）。见表1、图1。

2.2  鳞状细胞癌MSH3表达与临床病理特征的关系

在41例高+中分化鳞状细胞癌中，33例（80%）MSH3呈阳性表达。而在19例低分化鳞状细胞癌中，僅7例（37%）为阳性表达。高+中分化鳞状细胞癌MSH3阳性表达高于低分化鳞状细胞癌（P=0.001）。在鳞状细胞癌患者中，37例无淋巴结转移患者，MSH3阳性表达为30例（81%）。23例有淋巴结转移者，仅10例（43%）MSH3为阳性表达。MSH3阳性表达在有淋巴结转移的鳞状细胞癌患者比无淋巴结转移患者明显下降（P=0.003）。MSH3表达情况与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

3  讨论

MSH3是MMR系统的重要组成部分，主要功能是维持基因组的完整性，修复基因复制和重组过程中产生的DNA错配。MSH3蛋白在结直肠癌、胃癌、膀胱癌、前列腺癌、肾细胞癌和卵巢癌中表达下降[3-9]，研究表明MSH3表达降低在肿瘤发生发展过程中发挥一定的作用。本研究发现MSH3在口腔鳞状细胞癌中表达较正常口腔黏膜显著下降，这与其他肿瘤研究结果一致，提示MSH3蛋白在口腔鳞状细胞癌的发生发展中发挥一定的作用。由于MSH3通过纠正DNA重组和复制过程中的碱基错配来维持基因组的稳定性，其表达的降低或缺失可能诱导细胞突变，导致癌症发生。

既往研究表明MSH3表达强度与膀胱癌和肾癌的分化程度密切相关，MSH3蛋白在高级别膀胱癌和肾癌组织中的表达水平明显低于低级别肿瘤[6，8]。本研究发现分化较好的鳞状细胞癌中MSH3的阳性表达高于低分化的鳞状细胞癌，表明MSH3在鳞状细胞癌组织中的低表达与肿瘤的进展有关，其促进鳞状细胞癌细胞更具有侵袭性。Ni等[10]发现MSH3蛋白表达水平与结直肠癌淋巴结的转移情况无关。但在本研究中，发现有淋巴结转移的口腔癌患者MSH3的阳性表达率低于无淋巴结转移的患者，这说明MSH3在促进口腔鳞状细胞癌的转移中起着重要的作用，与结直肠癌淋巴结转移情况不同。

綜上，MSH3在口腔鳞状细胞癌组织中表达降低，且与肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关，提示MSH3可能在口腔鳞状细胞癌进展过程中发挥重要作用。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

[参考文献]

[1] 李惠， 孙怡， 刘春样， 等. MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白在结直肠癌中的表达及在Lynch综合征筛查中的意义[J]. 临床与实验病理学杂志， 2017， 33（4）： 360–364.

[2] HU F， T SHIMADA. Isolation and characterization of cDNA clones derived from the divergently transcribed gene in the region upstream from the human dihydrofolate reductase gene[J]. J Biol Chem， 1989， 264（17）： 10057–10064.

[3] LAYCOCK A， KANG A， ANG S， et al. Lack of correlation between MSH3 immunohistochemistry and microsatellite analysis for the detection of elevated microsatellite alterations at selected tetranucleotide repeats （EMAST） in colorectal cancers[J]. Hum Pathol， 2021， ;118： 9–17.

[4] WATSON M， LEA D， HAGLAND H， et al. Elevated microsatellite alterations at selected tetranucleotides （EMAST） is not attributed to MSH3 loss in stageⅠ-Ⅲcolon cancer： an automated， digitalized assessment by immunohistochemistry of whole slides and hot spots[J]. Transl Oncol， 2019， 12（12）： 1583–1588.

[5] HU N， KADOTA M， LIU H， et al. Genomic landscape of somatic alterations in esophageal squamous cell carcinoma and gastric cancer[J]. Cancer Res， 2016， 76（7）： 1714–1723.

[6] KAWAKAMI T， SHIINA H， IGAWA M， et al. Inactivation of the hMSH3 mismatch repair gene in bladder cancer[J]. Biochem Biophys Res Commu， 2004， 325（3）： 934–942.

[7] JAFARY F， SALEHI M， SEDGHI M， et al. Association between mismatch repair gene MSH3 codons 1036 and 222 polymorphisms and sporadic prostate cancer in the Iranian population[J]. Asian Pac J Cancer Prev， 2012， 13（12）： 6055–6057.

[8] DEGUCHI M， SHIINA H， IGAWA M， et al. DNA mismatch repair genes in renal cell carcinoma[J]. J Urol， 2003， 169（6）： 2365–2371.

[9] XIAO X， MELTON DW， GOURLEY C. Mismatch repair deficiency in ovarian cancer - molecular characteristics and clinical implications[J]. Gynecol Oncol，&nbsp;2014， 132（2）： 506–512.

[10] NI H， JIANG B， ZHOU Z， et al. Inactivation of MSH3 by promoter methylation correlates with primary tumor stage in nasopharyngeal carcinoma[J]. Int J Mol Med， 2017， 40（3）： 673–678.

（收稿日期：2023–02–03）

（修回日期：2023–11–15）