宫颈癌组织中LncRNA CCAT2表达及其意义

彭 灿 南华大学附属第二医院妇科,湖南省衡阳市 421001

宫颈癌作为临床常见的一种恶性肿瘤,其发病率仅次于乳腺癌位居女性恶性肿瘤的第2位,对女性生命健康造成了严重威胁[1]。随着现代医学的发展和进步,宫颈癌的临床治疗方案已经从单一的手术治疗逐渐发展成为综合性的治疗方式,主要以传统治疗与新型辅助治疗相结合,但患者临床预后状况仍无明显改善,患者病死率仍居高不下[2]。因此,寻求宫颈癌疾病发生发展的相关分子机制,寻找有效的治疗靶点,对于改善患者临床预后具有着重要价值。长链非编码RNA(LncRNA)是一类长度在200nt以上的非编码RNA,虽然LncRNA不具备编码蛋白质的能力,但其可通过转录以及转录后、表观遗传等多种途径调控基因表达,且越来越多的研究发现,LncRNA在肿瘤发生发展过程中发挥着重要的调控作用[3]。本文探讨分析宫颈癌组织中LncRNA CCAT2表达及其意义,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2017年3月—2020年3月我院收治的宫颈癌患者86例作为观察对象,患者年龄32～70岁,平均年龄(49.47±11.20)岁。取术中留存宫颈癌组织标本及距肿瘤组织边缘5cm以上的癌旁正常组织。本研究经我院伦理委员会批准。

1.2 选择标准 (1)纳入标准:①经病理科检查确诊为原发性宫颈癌;②患者均经手术治疗;③患者临床资料完整,且组织标本保存完整;④患者术前均未接受放疗、化疗等其他抗肿瘤治疗方案。(2)排除标准:①合并其他原发性肿瘤患者;②合并严重免疫系统疾病患者;③合并严重心、肝、肾等器官疾病患者;④妊娠期及哺乳期女性。

1.3 LncRNA CCAT2表达 术中获取的宫颈癌组织及癌旁正常组织标本置于液氮中保存,根据Trizol试剂(美国Invitrogen)提取总RNA,使用分光光度仪对提取总RNA质量和浓度进行测定,测定结果合格后,将其置于-80℃冰箱内保存。按照逆转录试剂盒说明书将RNA逆转录为cDNA,然后将cDNA保存于-20℃保存。采用qRT-PCR反应检测,反应体系20μl,根据目的基因设计上下游引物,引物序列:LncRNA CCAT2上游引物:5’-CCCTGGTCAAATTGCTAAAC CT-3’,下游引物:5’-TTATTCGTCCTGTTTTATGGAT-3’;GADPH上游引物:5’-TGATGACATCAAGAAGGTGGTGAAG-3’,下游引物:5’-TCCTTGGAGGCCCAGTGGGCCAT-3’。反应条件:95℃ 30s;95℃ 15s、60℃ 30s,共完成35个循环,以GADPH作为内参基因,采用2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量。

1.4 生存预后 以患者术后出院作为起始日期,利用门诊资料、电话、微信、邮件等多种方式进行随访,随访截止日期为2023年1月31日,随访终点事件为患者死亡,记录患者总体生存期。

1.5 统计学方法 采用统计学软件SPSS25.0进行数据处理分析,计量资料比较采用t检验,计数资料比较采用χ2检验,生存分析绘制Kaplan-Meier生存曲线,生存情况比较采用Log-rank检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织及癌旁组织LncRNA CCAT2表达比较 宫颈癌组织中LncRNA CCAT2相对表达量为1.835±0.316,显著高于癌旁组织的0.972±0.225(t=20.631,P=0.000<0.05)。

2.2 宫颈癌组织LncRNA CCAT2表达与患者临床病理参数的关系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者宫颈癌组织LncRNA CCAT2相对表达量显著高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05),低分化患者宫颈癌组织LncRNA CCAT2相对表达量显著高于中高分化患者(P<0.05),有淋巴结转移患者宫颈癌组织LncRNA CCAT2相对表达量显著高于无淋巴结转移患者(P<0.05),而患者年龄、最大肿瘤直径、病理类型与LncRNA CCAT2表达无关(P>0.05),见表1。

表1 宫颈癌组织LncRNA CCAT2表达与患者临床病理参数的关系

2.3 宫颈癌组织LncRNA CCAT2表达与患者预后的关系 以患者宫颈癌组织中LncRNA CCAT2相对表达量平均值1.835作为临界值,将LncRNA CCAT2相对表达量≥1.835患者作为高表达组(n=43)、LncRNA CCAT2相对表达量<1.835患者作为低表达组(n=43)。低表达组患者生存预后显著优于高表达组(P<0.05),见图1。

3 讨论

由于宫颈癌患者早期临床症状不明显,容易被忽视,目前对于宫颈癌的早期筛查手段,主要包括细胞学检查以及HPV检测[4]。随着基因芯片技术的不断发展和进步,宫颈癌的发病机制成为了越来越多学者共同关注的焦点,近年来,多项研究显示,宫颈癌组织中LncRNA表达水平与宫颈癌疾病发生、侵袭以及患者临床预后均具有密切的联系[5-6]。LncRNA作为一种无完整开放阅读框的RNA,是非编码RNA家族中的重要成员之一,并无蛋白质编码功能。但随着目前研究的不断深入,越来越多的研究报道显示,LncRNA在多种肿瘤进展过程中发挥着重要的调控作用,包括参与染色质的修饰、转录激活以及核内运输等复杂生物学功能,此外,LncRNA在转录调控、表观遗传调控等生物学过程中可引起基因表达水平的改变,而这一系列生物学行为在生命体生长、发育以及增殖等方面具有重要作用[7-8]。

LncRNA CCAT2最初被发现在结直肠癌组织中高表达,位于染色体8q 24.21上,已被多项研究证实其表达升高与多种恶性肿瘤的风险增加有关[9]。LncRNA CCAT2作为一种潜在的新型恶性肿瘤标志物,其表达增加促进了蛋白质合成以及核糖体生物发生相关基因的表达,直接与增殖阻断蛋白1(BOP1)核糖体生物发生因子之间相互作用,而BOP1可通过增加染色体分离的极光激酶B的活性促进染色体不稳定以及癌症的发生,同时增加对奥沙利铂以及5-氟尿嘧啶等化疗药物的耐药性[10]。为了进一步明确LncRNA CCAT2与宫颈癌之间的关系,本文探讨分析宫颈癌组织中LncRNA CCAT2表达及其意义。

本文结果显示,宫颈癌组织中LncRNA CCAT2相对表达量显著高于癌旁组织,同时其表达水平与患者临床分期、组织分化程度以及淋巴结转移有关。与相关研究报道结果相似[11],表明在宫颈癌中,存在LncRNA CCAT2的异常高表达,且LncRNA CCAT2参与了宫颈癌疾病进展过程,与肿瘤的恶性程度有关。此外,通过生存分析结果显示,LncRNA CCAT2低表达组患者生存预后显著优于高表达组,LncRNA CCAT2有望成为宫颈癌潜在的生物治疗靶点及预后预测分子标志。但关于LncRNA CCAT2对宫颈癌的具体调控机制仍不清楚,提示后续还需要进一步深入的研究分析。

综上所述,LncRNA CCAT2在宫颈癌组织中呈高表达,且其表达水平与肿瘤FIGO分期、肿瘤组织分化程度、淋巴结转移以及患者临床预后有关,LncRNA CCAT2有望成为宫颈癌早期诊断和治疗、预后预测的潜在生物学标志物,值得进一步深入研究分析。