不同干燥方式对岱山金头蜈蚣黄曲霉毒素含量的影响*

鲍雯雯 周国儿 李 彬

1 舟山市中医院 浙江舟山 316000

2 舟山市食品药品检验检测研究院 浙江舟山 316000

中药蜈蚣为蜈蚣科动物少棘蜈蚣（Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch）的干燥体，其性辛温，具有息风镇痉，通络止痛，攻毒散结的功效，主要用于肝风内动，痉挛抽搐，小儿惊风，中风口嗝，半身不遂等病症的治疗[1]。蜈蚣及其组方可治疗风湿性关节炎、腰椎间盘突出和恶性肿瘤等疑难及危重病症[2，3]。根据蜈蚣生物学特征可得出，大蜈蚣、红头红足蜈蚣和红头黄足蜈蚣为蜈蚣科动物少棘蜈蚣。浙江省舟山市岱山县盛产红头红足蜈蚣，也被叫做岱山金头蜈蚣，传统的蜈蚣产地加工方式即采用烘焙法[4]。蜈蚣营养丰富，如果加工或储存不当，容易腐败发臭，发霉生菌。黄曲霉毒素是一种毒性极强的真菌毒素，其危害性主要在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。可以产生黄曲霉毒素的真菌主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌，影响这类腐生菌繁殖及产毒的因素主要是基质、水分、温度、通风条件等[5-7]。其中水分是霉菌滋生的首要环境因素，因此，本研究从产地加工的干燥方式进行探讨，以控制蜈蚣中的黄曲霉毒素含量。

1 材料和试药

1.1 仪器：Agilent 1260 高效液相色谱仪、UVE 荧光检测器、Agilent ChemStation 工作站（安捷伦公司）；T 25 digitai 均质器（德国IKA 公司）；ME204E 型电子分析天平（瑞士METTLER TOLEDO 公司）；DHG-9240A 型恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。

1.2 试剂耗材：黄曲霉毒素混合标准品（中国食品药品检定研究院，批号：610001-202006，标示浓度黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分别为1.04、0.38、1.08、0.38μg/mL）；CNW 免疫亲合柱（上海安谱）；甲醇、乙腈为色谱纯（J.T.Baker 公司），氯化钠为分析纯（国药集团化学试剂有限公司），水为超纯水。

1.3 药材：蜈蚣购自浙江省舟山市岱山县衢山镇，经舟山市中医院周国儿主任中药师鉴定为少棘蜈蚣（Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch）。

2 方法与结果

2.1 样品的制备：采购已产地自然干燥的岱山金头蜈蚣500g，作为样品组一（S晒），取约1000g活蜈蚣置盛放沸水的水盆内烫死，捞起冲洗干净，沥干，立即分别置2台恒温干燥箱内烘干。一部分湿虫30℃烘干约60h作为样品组二（S 30℃），虫体干透，腥臭味明显；一部分湿虫60℃烘干约12h 作为样品组三（S 60℃），虫体干透，微有腥气。

2.2 色谱条件：Agilent X-Bridge-C18 色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；柱温：35℃；流动相：甲醇-乙腈-水（40∶18∶42）；流速：1.0mL/min；用柱后衍生法检测，光化学衍生器（254nm），以荧光检测器检测，激发波长365nm，发射波长450nm。

2.3 溶液准备：具体如下。

2.3.1 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品1.0mL，置20mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备：分别取上述三组样品粉碎过二号筛，精密称定15g粉末，加入氯化钠3g，置于匀浆均质器中，精密加入70%甲醇溶液75mL，高速搅拌2min（搅拌速度12000r/min），离心5min（离心速度2500r/min），精密量取上清液15mL，置50mL 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，离心10分钟，精密量取上清液20mL，通过免疫亲合柱，流速每分钟3mL，用水20mL洗脱，洗脱液弃去，弃去洗脱液，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2mL 量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 系统适用性试验：按“2.2”项下色谱条件，精密吸取“2.3.1”项下混合对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，结果见图1。由图1 分析可知，出峰顺序依次为黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1，各目标峰对称性良好。

图1 黄曲霉素对照品图谱

2.5 样品测定：参考2020年版《中国药典》四部通则中《2351 真菌毒素测定法黄曲霉毒素测定法》第一法，各样品按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定。每个样品取样2 份制备，每份供试品溶液进样2次。精密吸取各供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，对舟山市岱山县衢山镇某供应商提供的蜈蚣常规晒干样品（S晒）和60℃快速烘干12小时（S 60℃），30℃连续烘干60 小时（S 30℃）的样品进行检测。三组供试品中黄曲霉素检测结果均为阴性，结果见图2～4。

图2 S晒样品图谱

图3 S 30℃样品图谱

图4 S 60℃样品图谱

3 讨论

《中国药典》2020年版规定24种药材需要检测黄曲霉毒素，其中包含蜈蚣。因此本实验也直接参考药典四部统一的“黄曲霉毒素测定法（通则2351第一法）”进行检测，没有做方法学考察。查阅《中国药典》2020 版，其在蜈蚣饮片炮制项下描述“去竹片，洗净，微火焙黄，剪段”，并无指定具体干燥方式。通过产地走访了解，当地蜈蚣养殖户一般是沸水烫死后反复晒干，此晒干方式可复刻模拟成30℃下连续烘干，因此设置一组样品为30℃连续烘干60 小时，另一组样品设置为较高60℃快速烘干（在实验设计时有设置高温90℃干燥组，容易出现焦糊味，表明干燥温度不宜过高）。通过实验结果表明，此三组样品均未检测出黄曲霉素，黄曲霉素含量未超标。但在外观形态的观察中，样品二30℃连续烘干60 小时，有浓烈特异的腥臭味，不适合临床应用，样品一产地晒干和药品三60℃快速烘干12 小时，无浓烈特异腥臭味，适合临床应用。其中样品一为产地光照下晒干，耗时较长，容易受外界环境影响，造成成品得率损失。样品三60℃快速烘干12小时，在外观形态、成品得率和黄曲霉素含量等各方面都合格。是否可以作为经验鉴别依据，应用于产地的大批量加工，需要更大样品量的检测数据支持。本研究表明岱山金头蜈蚣采用较高温度及时干燥，置通风干燥处储藏，可以较好的控制黄曲霉毒素，进一步保证岱山道地药材蜈蚣的质量，提高临床用药安全性和临床疗效。