国际FAPAS乳粉中沙门氏菌能力验证结果分析

秦婧 石菲

作者简介：秦婧（1989—），女，陕西西安人，硕士，工程师。研究方向：食品微生物检测与研究。

摘 要：目的：参加FAPAS乳粉中沙门氏菌能力验证可维持实验室检验能力，提高检验检测机构竞争力。方法：依据FAPAS作业指导书及GB 4789.4—2016对乳粉中沙门氏菌进行检测，同时加入标准菌株ATCC 14028作为阳性对照。结果：样品M280d072-A检出沙门氏菌；样品M280d072-B未检出沙门氏菌。结论：国际FAPAS乳粉中沙门氏菌检测能力验证结果评价为满意。

关键词：FAPAS；沙门氏菌；能力验证

Analysis of FAPAS Salmonella Ability Verification Results in Milk Powder

QIN Jing， SHI Fei

（Shaanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection， Xian 710048， China）

Abstract： Objective： Participating in FAPAS Salmonella ability verification in milk power can maintain laboratory testing capacity and improve the competitiveness of testing institutions. Method： According to the instruction of FAPAS and GB 4789.4—2016， Salmonella in milk powder was detected and ATCC 14028 was added as a positive control. Result： The Salmonella was detected in sample M280d072-A; the Salmonella was undetected in sample M280d072-B. Conclusion： The results of the FAPAS test for Salmonella in milk powder were satisfactory.

Keywords： FAPAS; Salmonella; ability verification

沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，广泛存在于自然界中，能引起人和动物急性肠胃炎、食物中毒、败血症等。世界各国都将沙门氏菌视为一项重要的食品安全指标，且普遍规定沙门氏菌不得检出。《食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量》

（GB 29921—2021）对沙门氏菌的要求十分严格，2021年新出台的《食品安全国家标准 散装即食食品中致病菌限量》（GB 31607—2021）对散装即食食品沙门氏菌规定不得检出。食品中沙门氏菌的检验是食品微生物检验中的一项常规检验，是每个检验检测机构都应该具备的资质，是每个食品微生物检验员都应该具备的能力，同时对国民健康具有重要意义。中国合格评定国家认可委员会（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）规定寻求并参加能力验证是合格评定机构的责任和義务[1]。在食品分析领域，分析实验室能力验证（Food Analysis Performance Assessment Scheme，FAPAS）已发展成为享誉全球的国际评价体系[2]，我国已经有越来越多的检验检测机构参与FAPAS能力验证。为评估实验室对食品中沙门氏菌的检验能力，本实验室参加FAPAS于2022年11月组织的乳粉中沙门氏菌检测能力验证，依据的方法是《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）。

1 材料与方法

1.1 试剂

缓冲蛋白胨水（Buffered Peptone Water，BPW）、四硫磺酸钠煌绿增菌液（Tetrathionate Broth Base，TTB）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（Selenite Cystine Broth，SC）、亚硫酸铋琼脂（Bismuth Sulfite Agar，BS）、木糖赖氨酸脱氧胆盐（Xylose Lysine Desoxycholate，XLD）琼脂、沙门显色培养基、营养琼脂、沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒等均来自北京陆桥技术股份有限责任公司。

1.2 仪器与设备

生化培养箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂，SPX-250B-Z）；二级生物安全柜（美国赛默飞世尔科技，1300SERIESA2）；Vitek 2 Compact全自动微生物生化鉴定仪（法国生物梅里埃股份有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 样品的接收和确认

实验室收到FAPAS乳粉中沙门氏菌能力验证样品2份，样品编码是M280d072-A、M280d072-B，样品为25 g乳粉，塑料瓶包装，外包装完好，样品性状为白色粉末，且无结块等异常现象，因此确认样品完整。2份样品标记为072A和072B，安排两位检验员共同检测，同时用实验室标准菌株ATCC 14028做阳性对照。

1.3.2 样品的前处理和预增菌

根据此次能力验证作业指导书的说明，开启样品前应先将两份样品072A和072B置于室温下

30 min。在P2生物安全实验室的生物安全柜中以无菌操作开启样品，将样品置于提前准备好的无菌均质袋中，先加入少量BPW充分冲洗塑料瓶内部，并将BPW吸出转入之前的无菌均质袋中，最终使水化的BPW总量为225 mL。用均质器将样品和BPW充分混匀1～2 min，即为预增菌液，并做好标记，分别标记为072A和072B。同时接种ATCC 14028做阳性对照，以未接种的BPW做空白对照，将预增菌液于（36±1）℃培养8～18 h。后续依据GB 4789.4—2016进行检测分析。

1.3.3 选择性增菌

将072A、072B、ATCC 14028、空白对照的预增菌液于（36±1）℃培养18 h后取出，混匀，移取1 mL，转种于10 mL TTB内，于（42±1）℃培养18～24 h。同时，另取1 mL转种于10 mL SC内，于（36±1）℃培养18～24 h。分别做好样品标记，以上操作均在生物安全柜中进行。

1.3.4 分离

将所有TTB、SC选择性增菌液于（36±1）℃培养24 h后取出，经混匀后，将每支TTB和SC分别划线接种于BS琼脂、XLD琼脂和沙门显色培养基上，并做好样品标识。其中BS琼脂于（36±1）℃培养48 h，XLD琼脂和沙门显色培养基于（36±1）℃培养24 h。

1.3.5 生化试验

从072A、ATCC 14028的选择性琼脂平板上分别挑取可疑菌落接种营养琼脂平板进行纯培养，于（36±1）℃培养24 h。将培养好的纯培养物接种至沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒，同时采用Vitek2 Compact全自动微生物生化鉴定仪对纯培养物进行鉴定。

2 结果与分析

2.1 选择性增菌结果

1.3.3中培养后的TTB、SC培养物观察情况如表1所示，两名检验员检测的结果一致。

2.2 分离结果

按1.3.4方法进行培养，结果见表2。TTB和SC培养结果相一致，其中072A和ATCC 14028的选择性培养基上各有一种可疑菌落，需要进行后续生化试验；072B的选择性培养基未见菌落生长，判定M280d072B沙门氏菌未检出（25 g乳粉）。两名检验员检测结果一致。

2.3 生化试验结果

2.3.1 沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒结果

沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒鉴定结果见表3。依据GB 4789.4—2016中5.4.1～5.4.2对生化反应结果进行判定，样品072A和ATCC 14028均为沙门氏菌属，且两名检验员检测结果一致。

2.3.2 Vitek 2 Compact全自动微生物生化鉴定仪结果

经鉴定，发现样品072A和ATCC 14028均为鼠伤寒沙门氏菌，且两名检验员检测结果一致。

2.4 结果报告

综合生化试验和Vitek 2 Compact全自动微生物生化鉴定仪的结果，样品M280d072-A检出沙门菌/

25 g，样品M280d072-B未检出沙门菌/25 g。

3 結论与讨论

此次国际FAPAS乳粉中沙门氏菌能力验证结果评价为满意，表明该实验室具备沙门氏菌检测分析能力。BPW是一种广泛性增菌液，也可作为稀释液，具有修复细胞的作用，可复苏沙门氏菌，也可用与单增李斯特氏菌的检验。TTB、SC是选择性增菌液，其含有的选择性抑制剂对不同沙门氏菌的选择效果不同，因此在检测过程中TTB和SC两种增菌液需要同时使用，避免漏检[3]。BS琼脂选择性比较强，对样品中的杂菌有抑制作用，能更好地分离出目标菌[4]。XLD琼脂选择性较低，在日常检验中常遇到一些样品在XLD琼脂上为黄色菌落且不带黑色中心，符合GB 4789.4—2016中沙门氏菌在XLD琼脂上的菌落特征，但最终经生化试验或Vitek生化鉴定仪鉴定并不是沙门氏菌属。与BS琼脂和XLD琼脂不同的是，沙门显色培养基在观察菌落时更加直观、容易辨认。对于本次能力验证所采用的沙门显色培养基，说明书上明确沙门氏菌典型菌落为紫红色，其他为蓝绿色、无色或不生长。也有研究表明科马嘉显色培养基比SS、XLD和HE的假阳性更少[5]。当然沙门显色培养基单瓶净含量小，且单价比其他几种选择性培养基要高。许多实验室通常选择性培养基选用BS琼脂和XLD琼脂，在必要时如高风险食品或能力验证时再加入沙门显色培养基。

基于本次试验，将乳粉中沙门氏菌能力验证中操作关键点总结如下。①准备工作。先确定检验人员，提前准备和检查相关试剂、器具和设备。②样品确认。实验室收到FAPAS样品时，应先对样品进行确认，如仔细核对样品信息、检查样品的外包装是否完整、样品性状是否正常（颜色、有无结块等）。③作业指导书和检验方案。收到样品后，应先制定作业指导书和确定检验方法。检验方案的设计应包括检验人员、检验地点、时间安排、试剂配制、样品前处理、预增菌、选择性增菌、分离及鉴定等操作关键点，以及突发状况的应对预案。④试剂配制。TTB增菌液经121 ℃、20 min高压灭菌后，应立即放入冷水中冷却，在临用前以无菌操作加入碘液和煌绿，然后进行分装。BS琼脂平板、XLD琼脂平板及沙门显色平板均不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，否则会降低其选择性，BS和XLD两种琼脂平板应于使用的前一天配制。两种琼脂平板应贮于室温暗处，BS琼脂平板应在48 h内使用，否则容易影响分离鉴定结果。制备好的沙门显色平板应于2～

8 ℃冰箱冷藏保存一周。⑤混匀的重要性和必要性。在所有食品微生物检验过程中，每个步骤应使用均质机和混匀器进行均质混匀。⑥样品的前处理过程控制。整个检测过程应在P2生物安全实验室中的生物安全柜中进行。样品由冷藏室中取出后应先在室温下静置30 min使其复苏；两名检验员共同确认样品的性状正常后，以无菌操作开启样品。⑦检验过程控制。每个步骤务必做好样品标识避免混淆，且应有实验室质量监督员在旁指导监督。操作完成后，应对生物安全柜和实验室进行彻底清理消毒，避免造成阳性污染。⑧结果分析。每个步骤样品和阳性对照培养好后，注意观察反应现象。

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会.能力验证规则：CNAS—RL02：2016[EB/OL].（2016-04-15）[2023-08-21].https：//www.docin.com/p-1699040362.html.

[2]陈万胜，马莉，亓潇.国际FAPAS乳粉中沙门菌属能力验证的关键点[J].河南预防医学杂志，2020，31（12）：900-903.

[3]王萍，董贵军，乔勇升，等.显色培养基上沙门氏菌及干扰菌的分离鉴定[J].食品研究与开发，2017，38（12）：158-161.

[4]徐秀梅，张晓军.几种选择性培养基检测沙门氏菌的效果比较[J].河南预防医学杂志，2017，28（10）：764-766.

[5]陈茂义，胡婕，刘建昭，等.科玛嘉显色培养基和XLD?SS?HE分离食品中沙门菌效果比较[J].公共卫生与预防医学，2008，19（4）：12-14.