天花粉多糖对正常大鼠镇痛作用的研究

吕 航,王紫怡,付立波,李佳林

(长春师范大学生命科学学院,吉林 长春 130032)

疼痛是一种极其复杂的体验,在感知觉方面以及情感方面都有涉及[1]。疼痛产生的原因众多,多种疾病都会因组织损伤产生相应部位的疼痛,这也成为了病人就医的主要原因,而没有组织损伤则大多与心理因素有关。随着科技进步和研究深入,我们逐步发现了疼痛的机理是中枢神经系统对外周伤害性刺激的反应,随着研究逐步加深,出现了较为成体系的治疗药物,主要分为西药和中成药两大类。其中,西药应用较为广泛,而在中成药方面的研究相对较少。

天花粉是葫芦科植物栝楼(TrichosantheskirilowiiMaxim)的干燥根。天花粉多糖是天花粉的主要活性成分,从天花粉中提取到的多糖含有两组组分[2],是由6种单糖构成的杂多糖,其提纯以水提醇沉法为主[3]。生理功能主要为抗肿瘤和免疫调节[4]。目前国内外对天花粉多糖的研究主要集中于提纯和生理功能的研究,尚没有研究表明其是否具有镇痛效果,故此次实验选择天花粉多糖进行痛觉方面的研究。

1 实验材料

1.1 实验器材

Randall-Selitto痛觉测试仪(压板):出自意大利UGO;YLS-6B热板仪:出自上海曼普生物公司;YP1201N电子天平:出自上海精科实业集团;注射器:出自江西洪达医疗器械集团有限公司;灌胃针:出自上海玉研科学仪器有限公司;烧杯:出自浙江润兰科技有限公司。

1.2 实验药品和动物

天花粉蛋白粗提物:西安瑞英生物科技有限公司;生理盐水:广州零界医药有限公司;雄性Wistar大鼠6只:长春亿斯实验动物技术有限责任公司。

2 实验方法

2.1 大鼠灌胃

准备灌胃针头,用左手小指和无名指抓住大鼠尾巴,另外三指按住大鼠颈部,保持大鼠的头部和颈部成一条直线,方便灌胃针头顺利进入并将对大鼠的伤害降到最低。灌胃针从大鼠嘴角进入,能够压住舌头并抵住上颚,将灌胃针头轻轻向内推进,有刺空感说明针头顺利通过食管进入食道,此时可以进行灌胃药液推进[5]。注意若无刺空感,不可强行将药物灌胃,可以重新找准位置将灌胃针头插入。

2.2 行为学测痛

行为学测痛包括热板测试和压板测试两部分。正式实验前,需对大鼠进行为期至少7天的训练使大鼠熟悉测试内容,做到人鼠配合默契。正式实验注射药物前,进行三轮测试求取平均值作为基础对照值,分别灌胃生理盐水,5,20,80 mg/mL的天花粉多糖水溶液,在灌胃后的5,10,15,20,30,45,60 min的7个时间节点测量大鼠后爪缩爪反应潜伏期(Hindpaw Withdrawal Latencies,HWL)。

2.3 数据处理

将记录的时间数据输入Excel表格进行初步计算,以“均值±标准误”形式表示,使用Origin9.1软件作图。数据整合分析使用SPSS 26.0软件,其中组内对比采用单因素方差分析,组间对比采用独立样本t检验的方法进行。

3 实验结果

生理盐水与不同浓度天花粉多糖水溶液灌胃后大鼠HWL的变化百分比如表1至表3所示。由表1可知,与灌胃生理盐水组相比,灌胃5 mg/mL天花粉多糖水溶液对正常大鼠的右爪的热刺激HWL有差异(P<0.05),对左爪和右爪的机械刺激HWL均有显著差异(P<0.05)。

表1 灌胃5 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠对热刺激和机械刺激的后爪缩爪反应潜伏期变化

表2 灌胃20 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠对热刺激和机械刺激的后爪缩爪反应潜伏期变化

表3 灌胃80 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠对热刺激和机械刺激的后爪缩爪反应潜伏期变化

由表2可知,与灌胃生理盐水组相比,灌胃20 mg/mL天花粉多糖水溶液对正常大鼠的左爪和右爪的热刺激HWL有显著差异(P<0.01),对左爪和右爪的机械刺激HWL也有显著差异(P<0.01)。

由表3可知,与灌胃生理盐水组相比,灌胃80 mg/mL天花粉多糖水溶液对正常大鼠左爪的热刺激HWL有显著差异(P<0.01),对右爪的热刺激有极显著差异(P<0.001),对左爪和右爪的机械刺激HWL均有极显著差异(P<0.001)。

4 讨论

本实验结果证明,与灌胃生理盐水作对照,天花粉多糖水溶液具有镇痛效果,且浓度越大,镇痛效果越明显,在30 min时镇痛效果最佳,镇痛效果会持续一定的时间。多数学者研究发现,中药成分中提取的多糖常为镇痛作用的有效成分。例如伸筋草多糖在外周与中枢神经上都能够发挥止痛作用[6];甘青青兰多糖能够消炎止痛[7];枸杞多糖[8]与刺五加多糖[9]也能够抗炎止痛等。且相关研究表明,多糖能通过抑制趋化因子与黏附因子表达和抑制酶活性从而进行抗炎镇痛[10-12];或者能够降低炎症初期毛细血管的通透性,抑制炎症介质部分渗出而减轻疼痛[13]。但对于天花粉多糖的镇痛途径还有待进一步研究。