一株猪源沙门氏菌血清型的鉴定及其药敏试验

陈星，倪海星※，赵慧敏，申子平，原慧斌

（1.长治职业技术学院，山西 长治 046000；2.四川恒通动物制药有限公司，四川 内江 641000）

因管理不善，2023年5月2日，山西省陵川县某规模养猪场的保育室仔猪死亡7 头，除发生死亡外，其他仔猪的症状有呼吸急迫，食欲下降，体温升高，精神沉郁，皮肤有紫斑，粪软带血等；剖检死猪发现肝脾肿大，脾质坚硬，切面为蓝紫色；肝脏上有坏死灶或坏死点，并且多呈肿大状；肠黏膜上有灰黄色膜，剥离后显露红色溃疡面；淋巴结肿大，有的淋巴结干酪样坏死；肺发生卡他性炎症等。初步怀疑为沙门氏菌感染，为进一步确诊和确保疗效，进行了沙门氏菌血清型的鉴定和药敏试验。

1 材料

1.1 试剂

SS 琼脂平皿由凯恒生物有限责任公司生产；普通琼脂平皿、血琼脂平板由科玛嘉生物有限责任公司生产；LB 液体培养基由环凯微生物有限公司生产；革兰氏染液由杭州百思生物技术有限公司生产；生化反应试剂由上海博湖有限公司生产；药敏试纸片由杭州生物技术有限公司生产；沙门氏菌抗原鉴定血清购自天润（宁波）生物有限公司。

1.2 仪器

微量移液枪（规格：5～50μL）购于北京大龙实验仪器有限公司；电子天平（型号：HZY-1203）购于华志科学仪器有限公司；恒温培养箱（型号：DNP-9162-1A）购于常州润华电器有限公司；蒸汽灭菌锅（型号：LSH-18B）购于上海尚普仪器设备有限公司。

1.3 病料

2023年5月3日，无菌采集山西省陵川县某规模养猪场病死仔猪的肝脏、脾脏为病料。

2 方法

2.1 病菌的镜检

将无菌采集的病料肝脏或脾脏直接压片，用酒精灯加热，使之干燥、固定，革兰氏染色，显微镜下进行镜检。

2.2 病菌的分离与培养

无菌条件下，将采集的病料肝脏或脾脏，划线接种到血琼脂平皿上，37 ℃下培养18～24 h；把培养后的单菌落接种于无菌的载玻片，均匀涂片、革兰氏染色、镜检。挑取单个菌落划线接种到沙门氏菌-志贺氏菌培养基，纯化培养后，接种于马丁肉汤，37 ℃下培养24 h。

2.3 生化鉴定检测

用纯化培养后的菌株进行生化鉴定。试验项目有：V-P 试验、麦芽糖、卫矛醇、靛基质试验、山梨醇、菊糖、水杨苷、果糖、葡萄糖、肌醇、木糖、MR 试验、鼠李糖、H2S、半乳糖、乳糖、甘露醇和蔗糖等。

2.4 致病性测定

用生化鉴定后的菌株作致病性测定试验[1]。随机将试验小白鼠（18～20 g/只）分成试验组和对照组两组。两组小鼠数量相等。每组接种5 只，采用腹腔注射的接种方法。试验组：每只接种0.2 mL（细菌含量5×108CFU/mL）马丁肉汤培养后的菌液；对照组：每只注射0.2 mL 无菌马丁肉汤培养基。两组小鼠分开饲养，并观察记录小鼠状况。对死亡的小鼠及时剖检，7 d 后剖检所有小鼠。采脾脏或肝脏作为病料，再次进行细菌的分离培养。培养后镜检。

2.5 病菌血清型鉴定

对在生化鉴定试验中符合沙门氏菌特点的菌株进行血清型鉴定。

用微量移液枪抽取20 μL 沙门氏菌多价诊断血清，置于一无菌载玻片上，再抽取20 μL 方法2.2 制备好的沙门氏菌培养液于多价血清中，用枪头混匀后静置2 min，观察结果。如液滴中出现凝集，则鉴定为阳性。为防止有自凝现象的发生，另用无菌生理盐水替代多价血清和培养菌液反应设为对照[2]。

若发生凝集，再用单因子鉴定血清代替多价血清重复这一步的操作，以确定菌株血清型。

2.6 菌株的药敏试验

对血清型鉴定后的菌株进行药敏试验，试验方法为纸片法[3]。药物有：环丙沙星、氨苄西林、庆大霉素、萘啶酸、阿米卡星、替卡西林、氧氟沙星、链霉素、阿莫西林/棒酸、头孢噻呋、复方新诺明、头孢曲松、诺氟沙星和卡那霉素等。

3 结果

3.1 分离与鉴定结果

结果见表1。经镜检、分离、培养和生化鉴定后判断该株病菌为沙门氏菌。

表1 病菌分离与鉴定结果

3.2 致病性测定结果

经试验，在接种后39 h 有小鼠出现死亡，72h内试验组小鼠全部死亡。对照组没有发病、死亡情况。说明该株沙门氏菌毒力高、致病性强。

剖检病死小白鼠，发现肝、脾肿大，肝有坏死点，脾脏较硬。无菌采集肝脏后涂片、镜检；再次分离培养，然后鉴定。符合沙门氏菌特征。

3.3 测试菌血清型鉴定结果

经玻片凝集反应鉴定，确定该株沙门氏菌为鼠伤寒沙门氏菌。

3.4 药敏试验结果

由表2 可见，该株沙门氏菌对氧氟沙星、头孢噻呋、头孢曲松敏感；对阿米卡星、诺氟沙星和环丙沙星中敏；而对萘啶酸、氨苄西林、卡那霉素和复方新诺明等药物耐药。

表2 药敏试验结果

4 讨论

经过试验，得知该猪场发生的猪副伤寒病的病原为鼠伤寒沙门氏菌。针对该株沙门氏菌做了致病力的测定，得出菌株毒力高、致病力强，这和本猪场仔猪高死亡率（高达23%）相符合。建议其猪场在仔猪副伤寒的预防上，采用自制疫苗的方法进行免疫。

药敏试验得知该株沙门氏菌对氧氟沙星、头孢噻呋和头孢曲松敏感。建议本猪场在治疗仔猪副伤寒时优先选用这三种药物；少用或不用环丙沙星等作用一般的药物；禁用氨苄西林、庆大霉素和复方新诺明等药效差的药物。试验后，该猪场采纳了建议，预防和治疗效果都很明显。

总之，沙门氏菌血清型较多，致病性较强，所以在防治上就比较困难[4、5]。为避免盲目地预防与治疗，建议养猪场先明确本场存在的沙门氏菌血清型，然后采用自制疫苗来预防仔猪副伤寒的发生。一旦发生本病，就要找出高效的药物，并且严格、合理用药来治疗该病。同时，强化饲养管理，减少感染机会，这样才能最大程度地控制猪沙门氏菌病在本场的流行，保证仔猪的成活率[6]。□