GC法测定天然型维生素E软胶囊中的有关物质

黄良江,麦丽萍

(1.来宾市检验检测中心,广西 来宾 546100;2.武宣县卫生计生监督所,广西 武宣 545900)

维生素E软胶囊分为合成型和天然型[1-2],是临床常用的一种药物,其主要成分为维生素E,辅料为甘油、明胶等。维生素E软胶囊现行标准收载于2020年版《中华人民共和国药典》。相关文献显示,杂质(+)-α-生育酚为合成型的维生素E已知杂质,现行的标准中仅规定原料药为维生素E(合成型)的维生素E软胶囊进行有关物质检查,未控制原料药为维生素E(天然型)的维生素E软胶囊制剂的有关物质[3]。研究表明,天然型维生素E有着比合成型维生素E更好的生物活性和生物利用率[4-6],成品制剂的价格也比合成型成品的价格高。因此,在利益的驱动下,不法分子有可能会利用现行标准的缺陷以合成型维生素E冒充天然型维生素E用于维生素E软胶囊产品生产,而现行标准未对标示为天然型维生素E软胶囊进行有关物质检查,存在一定的药品安全隐患。笔者查阅有关文献,对天然型维生素E软胶囊进行有关物质研究的报道较少[7-9]。为提高天然型维生素E软胶囊的药品安全性和质量,本研究参考相关文献,对天然型维生素E软胶囊开展有关物质研究,建立气相色谱法测定天然型维生素E软胶囊的有关物质,并对检出的已知杂质和未知杂质进行分析,以期为天然型维生素E软胶囊的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津GC-2030气相色谱仪,FID检测器(日本岛津),LabSolutions色谱工作站,电子天平(瑞士梅特勒-托利多)。

1.2 试药

天然型维生素E软胶囊(批号:210719、210726、210803、210815、210913,青岛某药业公司),维生素E对照品(批号:100062-201811,中国食品药品检定研究院),(+)-α-生育酚(批号FS1614161,天津阿尔塔科技有限公司),正己烷(色谱纯)

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:CD-1毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);柱温:265 ℃,恒温分离;进样口温度:290 ℃;检测器温度:300 ℃;载气为高纯氮气,流速为1.5 mL/min;V(H2)∶V(O2)∶V(N2)=32∶200∶24;进样量1 μL,分流比20∶1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 杂质对照品溶液的制备

精密称取杂质(+)-α-生育酚对照品适量,用正己烷稀释,制成浓度为10.00,20.00,30.00,40.00,50.00 μg/mL的对照品溶液,用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。

2.2.2 供试品溶液和对照溶液的制备

供试品溶液:取天然型维生素E软胶囊内容物适量(约相当于维生素E 25 mg),精密称定,加入正己烷10 mL,密塞,振摇使维生素E溶解,静置,滤过,取续滤液。对照溶液:精密量取供试品溶液续滤液1 mL,置100 mL棕色容量瓶中,加正己烷定容至刻度,摇匀,使用时用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。

2.2.3 空白溶液的制备

以说明书载明的辅料用正己烷溶解作为空白溶液,使用时用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。

2.2.4 系统适用性溶液的制备

取维生素E对照品和杂质(+)-α-生育酚对照品各适量,精密称定,加正己烷溶解,并稀释制成每1 mL中含维生素E 250 μg与杂质(+)-α-生育酚100 μg的混合溶液,用0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。

2.3 系统适用性考察

取“2.2.4”项下的系统适用性溶液以1 μL进样量注入气相色谱仪,按“2.1”中色谱条件测定,记录色谱图,结果见图1。系统适用性试验测得系统适用性溶液中主成分维生素E峰与杂质(+)-α-生育酚峰之间的分离度R=3.256,理论塔板数以杂质(+)-α-生育酚峰计算,理论塔板数为91 887;系统适用性溶液中主成分维生素E峰与杂质(+)-α-生育酚峰之间的分离度大于1.5,理论塔板数大于5 000,表明该色谱系统条件下样品中主成分能与其他杂质成分良好分离,能够准确定量。

图1 系统适用性试验溶液

2.4 方法学考察

2.4.1 空白辅料干扰实验

称取处方中各辅料的最大取样量制成混合空白辅料溶液,精密量取混合辅料溶液1 μL注入气相色谱仪,依法测定,结果见图2。结果表明:空白辅料在杂质(+)-α-生育酚保留时间23.5 min附近不存在辅料峰,辅料峰不干扰有关物质的检测。

图2 空白溶液

2.4.2 检出限和定量限考察

将质量浓度为10.00 μg/mL的杂质(+)-α-生育酚对照品溶液逐级稀释进样,以信噪比(S/N)分别为3和10计算检出限和定量限。结果显示,当信噪比(S/N)约为3.0时测得方法检出限为0.195 μg/mL,当S/N约为10.0时测得方法定量限为0.644 μg/mL。

2.4.3 线性关系考察

分别精密吸取“2.2.1”项下各系列浓度的杂质(+)-α-生育酚对照品溶液1 μL注入气相色谱仪,按“2.1”中色谱条件进样测定,以质量浓度X(μg/mL)为横坐标,以杂质(+)-α-生育酚峰面积的作为纵坐标,进行线性回归,绘制标准曲线。结果显示,杂质(+)-α-生育酚的回归方程为Y=257.857X+0.249 063,线性相关系数r=0.999 99。结果表明杂质(+)-α-生育酚在10.00～50.00 μg/mL内线性关系良好。杂质(+)-α-生育酚对照品溶液色谱图见图3。

图3 杂质对照品溶液

2.4.4 溶液的稳定性试验

取样品批号为210719的供试品1份,按“2.2.2”项下制备供试品溶液,在供试品溶液于25 ℃下分别放置0,2,4,8,12,18,24 h,在规定的时间点取供试品溶液以“2.1”色谱条件分别进行测定。结果显示,不同时间段供试品溶液中均未检出杂质(+)-α-生育酚,未知最大单个杂质的平均含量为1.18%,RSD为0.53%,总杂质的平均含量为2.32%,RSD为0.76%,表明供试品溶液在24 h内具有良好的稳定性。

2.4.5 重复性试验

精密称取样品(批号:210719)6份,按“2.2.2”项下制备供试品溶液,分别取供试品溶液以“2.1”色谱条件测定,结果6份供试品溶液中均未检出杂质(+)-α-生育酚,未知最大单个杂质的平均含量为1.15%,RSD为0.43%(n=6),总杂质的平均含量为2.23%,RSD为0.58%(n=6),相对标准偏差RSD<5%,表明本方法重复性良好。

2.4.6 加标回收率考察

取同一批次(批号:210719)天然型维生素E软胶囊样品9份,精密称定。将9份样品分成3组,每组3份。按表1添加量添加杂质(+)-α-生育酚,制成低、中、高浓度添加水平的加标回收率试验溶液。上述9份溶液按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪测定,检测杂质(+)-α-生育酚含量,计算每份样品的加标回收率。结果测得低、中、高三种添加水平的样品中杂质(+)-α-生育酚的平均加标回收率为100.36%,RSD=2.89%(n=9),表明该方法的准确度良好。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.5 样品杂质测定

取批号为210719、210726、210803、210815、210913的天然型维生素E软胶囊(标示量100 mg)进行有关物质测定。供试品溶液中如检测出杂质峰,杂质(+)-α-生育酚峰面积不得大于1.0%,其他单个杂质峰面积不得大于1.5%,总杂质不得大于2.5%。测定结果见表2,供试品色谱图见图4～5。

图4 供试品溶液

图5 对照溶液

表2 天然维生素E软胶囊有关物质测定结果

3 讨论

3.1 杂质控制的意义

杂质(+)-α-生育酚为合成型的维生素E已知杂质,为生产过程中产生的工艺杂质,使用合成型维生素E作为原料生产制剂,制剂中可能引入(+)-α-生育酚,因此对标示为天然型的维生素E制剂,检查杂质(+)-α-生育酚,能有效辨别制剂是否掺杂合成型原料,对制剂的质量控制意义重大。《中华人民共和国药典》2020年版二部收载的“维生素E软胶囊”中有关物质仅对原料药和原料药为合成型的维生素E软胶囊制剂的有关杂质进行控制,未对原料药为天然型的维生素E软胶囊制剂进行有关杂质控制。因此,对原料药为天然型的维生素E软胶囊制剂进行有关杂质控制有利于提高天然型维生素E软胶囊的药品安全性和制剂质量。本研究建立的方法可有效测定天然型维生素E软胶囊中的杂质(+)-α-生育酚及总杂质含量,对天然型维生素E软胶囊质量控制和提高药品质量安全性以及对打击原料药掺杂合成型成分以次充好的违法行为具有重要意义。

3.2 色谱条件选择

本试验对色谱柱、进样口温度、柱温、检测器温度、分流比进行考察[10],因系统适用性试验中要满足主成分与杂质成分分离度要求,通过试验最终确定色谱柱为CD-1毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)、柱温为265 ℃、进样口温度为290 ℃、检测器温度为300 ℃、V(H2)∶V(O2)∶V(N2)=32∶200∶24、分流比20∶1时,主成分维生素E与杂质(+)-α-生育酚能实现良好分离,分离度为3.256,符合系统适用性试验的分离度要求。

3.3 测定结果分析

根据维生素E软胶囊质量控制要求,维生素E软胶囊中如检测出杂质峰,杂质(+)-α-生育酚峰面积不得大于1.0%,其他单个杂质峰面积不得大于1.5%,总杂质不得大于2.5%。试验中测定5批次天然维生素E软胶囊样品,均未检出杂质(+)-α-生育酚(或小于检测限),未知最大单个杂质的含量均小于1.5%,总杂质的含量也均小于2.5%,测定的5批次样品有关物质均达到药典规定要求,表明用于试验的5批次天然维生素E软胶囊样品中使用的原料药为天然型维生素E,不存在掺杂合成型原料药或使用合成型代替天然型制成制剂的现象,产品质量得到较好保证。

3.4 小结

本试验对5个批次的天然型维生素E软胶囊有关物质进行测定,测得5个批次样品中有关物质均达到药典规定要求。本研究在参考总结相关文献和标准的基础上,优化了毛细管气相色谱条件,该方法线性关系好,专属性、精密度、重复性良好。通过考察加标回收对方法进行了验证,得到了较好的准确度。该方法样品处理操作简便、快捷,结果准确可靠,可用于天然型维生素E软胶囊中有关物质的测定和质量控制。