低分子肝素辅助治疗对重度子痫前期产妇胎盘缺氧及细胞凋亡的影响研究

宋世静 宋立猛 包亚荣 李 响

（内蒙古自治区人民医院妇产科，内蒙古 呼和浩特，010017）

子痫前期是妊娠阶段非常常见的一种并发症，其中症状更为严重的为存在重度子痫前期的患者，这一症状的产生对孕妇以及胎儿均会造成较大的影响，会使得临床早产以及新生儿死亡的概率不断增加，临床所开展的治疗难度较高[1]。近年来，有关子痫前期发病机制的相关研究表明，内皮功能损伤会使得小血管出现痉挛，抗凝-促凝失衡会使得子痫前期孕妇出现血压升高，并且其肾功能也会出现一定程度损伤，而临床常用的治疗手段就是解痉、抗凝以及改善患者微循环[2]。低分子肝素（LMWH）是能够对内源性以及外源性凝血途径造成影响的抗凝药物，近年来得到了较为广泛的使用[3]。本研究旨在探讨使用LMWH 辅助治疗对重度子痫前期孕妇出现胎盘缺氧以及细胞凋亡现象的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2021 年8 月—2022 年9 月内蒙古自治区人民医院收治的96 例接受治疗的重度子痫前期产妇作为研究对象，按照随机数表法分为对照组和观察组，每组48 例。对照组产妇年龄27～34 岁，平均年龄（30.56±3.25）岁；孕周36～39周，平均孕周（37.25±5.25）周；身体质量指数（BMI）18～28 kg/m2，平均BMI（22.25±1.25）kg/m2。观察组产妇年龄27～34 岁，平 均年龄（30.47±3.96）岁；孕周36～39 周，平 均 孕 周（37.95±5.14）周；BMI 18～28 kg/m2，平 均BMI（22.87±1.36） kg/m2。两组患者基线资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。两组产妇及家属均对治疗有基础了解并同意实施。本研究经内蒙古自治区人民医院医学伦理委员会审批。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：符合我国重度子痫前期症状的诊断标准[4]。

排除标准：①未在规定限期内接受完整治疗干预的患者；②各类代谢疾病并存的患者；③无正常配合度；④无正常沟通交流能力；⑤药物过敏者。

1.3 方法

对照组患者通过使用常规对症治疗方式完成疾病干预，为患者使用硫酸镁临床治疗，具体如下，将25%硫酸镁（生产企业：河北天成药业股份有限公司，国药准字H20033860，规格：10 mL：1 g）5 g 加入10%葡萄糖注射液中，静脉滴注，30 min 内完成滴注；后将25%的硫酸镁15 g 加入5%葡萄糖注射液500 mL 中，静脉滴注，滴注速度1 g/h；之后按照患者实际血压控制情况给予25%硫酸镁2.5 g，肌肉注射，早晚各1 次，硫酸镁总剂量不能高于30 g/d。

观察组患者在上述对症治疗基础上，为患者使用低分子肝素临床治疗，具体如下，4 100 IU 的低分子肝素[生产企业：葛兰素史克（天津）有限公司，国药准字J20130168，规格：0.4 mL:4 100 AXaIU×2 支]，皮下注射，2 次/d，5 d 为1 个疗程，每周重复1 个疗程，直到分娩前24 h 停药。

1.4 观察指标

①血清标本采集及指标检测，分别于治疗前以及治疗后分娩前，采集两组患者外周静脉血5 mL，常规离心分离血清后，于-80 ℃冰箱保存。检测时，将血清标本取出，4 ℃状态下完成解冻，采用酶联免疫吸附试剂盒（生产企业：天津科维诺生物科技有限公司，规格：48T 96TMM）检测血清中胎盘生长因子（PLGF）、妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）以及人可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）、可溶性内皮因子（sEng）水平。

②胎盘标本采集与指标检测，在患者分娩完成30 min 后，采集两组患者胎盘以及周围组织，用0.9%氯化钠溶液对标本进行反复冲洗，之后用滤纸将所有水分吸干，将该胎盘组织转移到冻存管之中并使用液氮对其短暂冷冻处理，将冻存管取出之后保存在-80 ℃冰箱中。在实施临床指标检测的过程之中，将胎盘组织取出，并在其中加入蛋白裂解液，提取蛋白样本后，使用BCA 试剂盒（生产企业：上海齐源生物科技有限公司，批号QYS-237014）测量标本总蛋白含量，使用放射免疫沉淀试剂盒检测ROS、RNS、GPx-1、SOD-1、Trx 含量；使用酶联免疫吸附试剂盒检测Fas、Fasl、caspase-3、caspase-8、Survivin、XIAP、Bcl-2 含量。

1.5 统计学分析

采用SPSS 21.0 统计学软件分析数据，符合正态分布的计量资料以（±s）表示，经t 检验；计数资料以[n（%）]表示，经χ2检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组产妇血清中胎盘缺氧相关细胞因子水平比较

治疗前，两组产妇血清中胎盘缺氧细胞因子水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组PLGF 与PAPP-A 水平均有所升高，且观察组PLGF、PAPP-A 水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后，两组sFlt-1与sEng 水平均有所降低，且观察组sFlt-1、sEng 水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 两组产妇血清中胎盘缺氧相关细胞水平因子水平比较 （±s）

注：与同组治疗前比较，aP<0.05。

sEng（ng/mL）治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 治疗前 治疗后观察组 48 42.61±6.81 97.58±10.43a 1.86±0.21 3.43±0.42a 221.36±35.84 104.56±13.56a 39.58±5.57 15.26±1.84a对照组 48 43.25±6.27 64.73±8.14a 1.87±0.31 2.35±0.31a 225.36±33.47 156.58±20.16a 39.76±5.31 28.36±3.49a t 0.479 17.202 0.185 14.333 0.565 14.833 0.162 23.004 P 0.633 <0.001 0.853 <0.001 0.573 <0.001 0.871 <0.001组别 例数PLGF（ng/mL）PAPP-A（μg/mL）sFlt-1（pg/mL）

2.2 两组产妇胎盘中氧化应激损伤分子水平比较

观察组产妇ROS 与RNS 等氧化应激产物指标水平低于对照组，GPx-1、Trx 以及SOD-1 等抗氧化酶相应指标水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 两组产妇胎盘中氧化应激损伤分子水平比较 （±s）

表2 两组产妇胎盘中氧化应激损伤分子水平比较 （±s）

氧化应激产物组别 例数抗氧化酶ROS（μmol/mg） RNS（μmol/mg） GPx-1（U/mg） SOD-1（U/mg） Trx（U/mg）观察组 48 5.29±0.87 3.35±0.42 23.84±3.46 40.25±5.63 37.69±5.27对照组 48 8.42±0.94 7.53±0.94 11.39±1.76 22.34±3.26 21.26±3.08 t 16.930 28.128 22.220 19.073 18.648 P<0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001

2.3 两组产妇促凋亡分子水平比较

观察组产妇Fas、Fasl、caspase-3、caspase-8 水平低于对照组，而Survivin、XIAP 与Bcl-2 水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 两组产妇促凋亡分子水平比较 （±s）

表3 两组产妇促凋亡分子水平比较 （±s）

组别 例数 Fas（ng/mg） Fasl（ng/mg） caspase-3（pg/mg） caspase-8（pg/mg） Survivin（ng/mg） XIAP（ng/mg） Bcl-2（ng/mg）观察组 48 3.18±0.53 2.36±0.34 93.42±13.25 145.58±18.25 45.24±6.93 19.26±2.47 68.63±8.21对照组 48 5.86±0.79 4.98±0.63 221.26±35.69 325.47±42.25 21.56±3.36 10.61±1.32 29.53±4.19 t 19.517 25.355 23.264 27.080 21.302 21.398 29.389 P<0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001

3 讨论

重度子痫前期会对母婴均造成极大的伤害，会导致其出现全身小动脉痉挛、内皮功能损伤以及胎盘血流灌注不足等情况，相较于轻度子痫前期的患者，症状更加显著，常规治疗过程中所使用的硫酸镁解痉治疗并不能产生较为理想的效果。近年来，关于对重度子痫前期所开展的临床研究表明，患者体内会持续性出现内皮损伤现象，致使促凝血因子出现失衡，导致血液处于高凝状态，靶器官内所产生的微血栓现象会进一步加重脏器缺血损伤症状，从而引发患者出现血压升高以及大量蛋白尿等情况[5-6]。根据血液高凝状态以及重度子痫前期患者临床资料与信息，在临床上对于该疾病的治疗越来越广泛的开始使用LMWH[7]。

LMWH 这一种药物能够对内源性凝血途径产生影响的同时，会对外源性凝血途径造成影响，使凝血过程中所含凝血因子X、XⅡa 活性降低，与抗凝血酶产生结合效应，从而对凝血酶的功能产生抑制作用，并且能够激活tPA 以及uPA，促进微血栓的溶解[8]。相关临床研究报告显示，LMWH 对出现重度子痫前期症状的患者实施治疗，能够明显改善患者高血压、蛋白尿症等状况，并能够纠正患者血液异常高凝状态[9]。

胎盘是妊娠期胎儿的一种重要附属脏器，胎盘血流灌注量出现降低以及缺血缺氧症状的产生均是导致重度子痫前期发生的重要病理环节[10]。当前，临床有关于LMWH 所开展的辅助治疗是否能够对该症状患者的胎盘缺氧症状起到改善作用并没有一个明确的报告。当胎盘处于缺血和缺氧的病理状态下时，多种细胞因子的合成与分泌会出现非常显著的紊乱现象。PLGF 这一物质是胎盘细胞增殖、分化过程非常重要的细胞因子，并且该细胞因子还能诱导内皮细胞进行增殖与迁移[11]。PAPP-A 是一种由胎盘合体滋养层合成与分泌的分子，能够更好地显示出胎盘所拥有的发育和相应功能，在重度子痫前期症状的患者中，其血清中所含有的PLGF 与PAPP-A含量均有所降低[12]。sFlt-1 与sENG 能够与PLGF、VEGF 产生相互结合效应的同时能够让其所拥有的生物学效应被阻断，从而对胎盘血管的形成产生影响，会导致内皮以及胎盘功能受到损伤，存在重度子痫前期症状的患者血清中所含有的sFlt-1 与sEng 的水平会出现明显的上升[13]。本研究结果显示，在接受临床治疗后，两组产妇PLGF 与PAPP-A 水平均有所升高，sFlt-1 与sEng 水平均有所降低，且观察组PLGF与PAPP-A 水平高于对照组，sFlt-1 与sEng 水平低于对照组。上述结果表明，常规所开展的对症治疗联合LMWH 为患者施以辅助治疗能够缓解患者所存在的胎盘缺氧症状，对于胎盘中细胞因子的分泌能够起到良好的调节作用。在重度子痫前期患者的病情发展变化过程中，缺血缺氧不仅仅会导致多细胞因子出现分泌紊乱，还会对氧化应激反应产生激活效应从而诱导细胞凋亡。本研究的结果表明，LMWH 能够减轻胎盘组织中的氧化应激损伤，能够对细胞凋亡过程产生抑制效果。

存在重度子痫前期症状的患者其疾病在发展的过程中，所表现出的缺血缺氧状态不仅仅会导致多种细胞因子分泌出现紊乱现象，还会对氧化应激反应产生激活效应，并且还会诱导细胞凋亡这一过程。在氧化应激反应被激活过程中，局部组织所生成的ROS 与RNS 水平升高，从而导致滋养细胞以及内皮细胞中所含有的多种生物结构产生氧化损伤。此外，因为局部组织中GPx-1、Trx 以及SOD-1 等抗氧化酶都能够将ROS 与RNS 物质消除，但当ROS 与RNS 生成数量过多时，因机体所拥有的抗氧化能力有限，使GPx-1、Trx 以及SOD-1 等抗氧化酶的消耗量增加，从而产生局部组织抗氧化酶数量降低的情况，并且还会导致机体所拥有的抗氧化能力减弱。本研究结果显示，ROS 与RNS 不仅会对细胞结构以及功能造成直接损伤，同时还可通过Fas/Fasl 途径的作用对细胞凋亡过程起到诱导效应。Fas 是肿瘤坏死因子超家族中的一种，该物质与Fasl 结合之后能够将caspase-8 因子的级联激活通路开启，从而使得caspase-8 产生活化效应并介导细胞凋亡。通过对上述氧化应激和细胞凋亡结果进行分析，能够说明LMWH 能够对胎盘组织所产生的氧化应激损伤程度起到减轻的作用，并阻碍细胞凋亡过程。

综上所述，对于存在重度子痫前期症状的产妇，为其使用低分子肝素开展辅助治疗，能够显著改善其所出现的胎盘组织缺氧情况，减轻患者所出现的氧化应激反应程度，达到理想的阻碍细胞凋亡的效果。