冷自身抗体伴IgG 抗-S 致配血不合1 例

马晨

(淄博市中心血站,山东淄博255000)

为了保证临床输血安全有效,最大程度降低输血反应的发生,在输注红细胞血液制品前都要进行交叉配血试验,配血相合才能将献血者的红细胞血液制品输注给患者。对于临床输血患者出现配血困难的现象,多是同种抗体和自身抗体引起的,自身抗体中以冷自身抗体较为常见,当发现患者存在冷自身抗体时,要仔细筛查其是否具有同种抗体,以免漏检同种抗体而引发输血后免疫反应。

1 材料与方法

1.1 标本来源 患者,女,69 岁。因胸闷、气急、腰痛就诊,血红蛋白42 g/L,临床诊断为贫血,无既往输血史。

1.2 试剂与仪器 抗-A、-B 标准血清(批号:20211220),抗-D(IgM,批号:20221809),人ABO 反定型试剂红细胞(批号:20235337),抗-C(IgM,批号:20233001),抗-c(IgM,批号:20233101),抗-E(IgM,批号:20233201),抗-e(IgM,批号:20233301),筛选细胞(批号:20237046),以上为上海血液生物医药有限责任公司产品,抗人球蛋白试剂(多特异性,批号:8000458512),抗-IgG(批号:8000456496),抗-C3d(批号:8000455557),抗-S(IgM,批号:8000454483),谱细胞(批号:8000459981),以上为Sanquin 公司产品,微柱凝胶卡(达亚美有限责任公司,批号:50531.82.16),KA-2200 离心机(久保田公司),37℃水浴箱(上海跃进医疗器械有限公司),微柱凝胶交叉配血系统(GRIFOLS 公司)。

1.3 方法

1.3.1 红细胞血型鉴定 ABO、Rh 及其他血型鉴定均为盐水介质法,立即离心并在37℃温育3 min 看结果,用温盐水(37℃左右)六洗后再次进行血型鉴定。

1.3.2 直接抗人球蛋白试验 包括抗球蛋白试剂(多特异性)、单抗-IgG、单抗-C3d、ABs 对照,立即离心进行检测,用温盐水(37℃左右)六洗后再次进行检测。

1.3.3 抗体筛选和特异性鉴定 使用抗筛细胞和谱细胞进行抗体筛选和鉴定,分别采用盐水介质法和凝胶微柱法,使用2-Me 破坏IgM 抗体后的血清采用凝胶微柱法进行抗体筛选和鉴定,使用酸放散的方法将放散液采用凝胶微柱法进行抗体筛选和鉴定。

1.3.4 吸收放散试验 1)选择6 人份O 型红细胞和患者血清等量混合,放4℃吸收1 晚,将上清液和谱细胞在抗人球蛋白卡反应,进行抗体的初步鉴定,2)选择6 人份O 型S 抗原阴性红细胞均分4 管,和患者血清等量混合,依次放4℃30 min 2 次,放37℃30 min 2 次,将上清液和谱细胞在抗人球蛋白卡反应,进一步进行抗体鉴定。

1.3.5 效价检测 使用试管法和试管经典抗人球法检测IgM 和IgG 抗体的效价。

2 结果

2.1 红细胞血型 患者血型为B、CcDEe,见表1。

2.2 直接抗人球蛋白试验 患者单抗实验>1＋,需要进行酸放散试验,见表2。

ABO 反定型ABO 正定型Rh 血型系统定型抗-A抗-BAcBcOc自身c抗-D抗-C抗-c抗-E抗-e IS1＋4＋3＋s3＋3＋1＋s4＋2＋w2＋2＋s2＋37℃2＋s000温六洗04＋4＋1＋s1＋s2＋2＋

2.3 抗筛试验 抗筛细胞阳性,表明存在不规则抗体,需用谱细胞进行进一步鉴定,见表3。

2.4 抗体鉴定试验 患者血清中检出IgM 冷自身抗体,未确定其特异性,血清中检出IgG 不规则抗体,未确定其特异性,放散液中检出不规则抗体,未确定其特异性,见表4。

2.5 吸收放散试验 第1 次吸收放散试验结果显示谱细胞格局有抗-S,第2 次吸收放散试验结果显示上清液中存在抗-S,见表5。

序号Rh-hr Kidd MNSs Duffy Lewis P DCEceJkaJkbMNSsFyaFybLeaLebP1 IS37℃1＋＋＋＋＋＋00＋0＋＋0＋＋＋3＋s2＋w 2＋＋00＋＋＋＋＋0＋＋00＋03＋1＋s 3＋＋＋＋＋＋0＋＋＋＋＋＋0＋03＋1＋s

2.6 患者S 抗原检测 S 抗原为阴性。

2.7 效价检测 冷自身抗体IgM 效价:4℃条件为256,37℃条件为<1,室温条件为8。抗-S IgG 效价:4(2-Me 处理后,经典抗人球法)。

3 讨论

红细胞的自身抗体是1 种能与自身抗原特异性结合并具有免疫功能的抗体,它在正常人血清中的效价很低。冷自身抗体绝大部分是IgM 类型的免疫球蛋白,在某些病理情况下,冷自身抗体的存在会干扰ABO、Rh 等血型鉴定,造成交叉配血困难[1]。据报道,冷凝集素的效价>64 时,就开始干扰血型鉴定和交叉配血[2],用温盐水(37～45℃)反复洗涤红细胞可去除大量的自身抗体[3]。本例中冷自身抗体的效价在4℃条件下达到了256,已经影响试验的结果,经过温盐水(37℃左右)6 次洗涤后,才清晰显示血型为B、CcDEe。

MNSs 血型系统的抗-S 绝大多数是由输血、妊娠等红细胞免疫产生,但也存在天然产生的[4]。间接抗球蛋白试验可检测出绝大多数具有临床意义的同种抗体[5],大多数抗-S 可以通过间接抗人球蛋白试验检测到[6-7]。中国汉族人群S 抗原阴性的概率很高,受S 抗原免疫刺激的概率较低,因此平常很难检测到抗-S[8]。

当患者同时存在自身抗体和同种抗体时,自身抗体常易遮盖同种抗体的特异性,使同种抗体漏检而导致严重的输血反应[9]。因此,当判断冷自身抗体和同种抗体同时存在时,应当首先排除冷自身抗体的干扰,一般可用递增温度(由37℃逐升到45℃)的生理盐水反复洗涤红细胞[10]。目前最有效和能够依赖的方法还是自体或异体吸收技术,但是吸收技术操作耗时、昂贵且对操作人员技术水平要求高[3]。在配血困难的情况下,要在37℃、室温、4℃同时进行,这样可以初步断定是冷自身抗体还是温自身抗体引起的自身凝集,从而选择正确的吸收方法,除去患者血清中的自身抗体后再进行不规则抗体筛查和交叉配血试验。而自身抗体伴同种抗体的存在多数为Rh 系统的特异性抗体,少数为MNSs 和Kidd系统[11]。本例采用异体吸收,没有采用自体吸收,是因为此患者直抗强阳性,无法将红细胞处理到不凝集同型、O 型和自身细胞的状态,所以选用异体细胞,通过4 次吸收试验后上清液上谱细胞,可以清晰地看到抗-S 的格局。

总之,对于自身抗体和同种抗体同时存在的疑难标本,我们要尽量排除自身抗体的干扰,鉴定同种抗体,根据鉴定结果找出与患者相匹配的血液进行输注以降低输血反应,提高临床输血的安全性。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。