CG、LAP与miR-155对妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断价值及与疾病严重程度的关系*

洪 雷 朱晓丽 杭 楚 周 民

1.六安世立医院妇产科(安徽 六安, 237008) 2.安徽省立医院妇科

妊娠期肝内胆汁淤积症是以皮肤瘙痒及生化性胆汁淤积为特点的疾病,多发生在孕晚期,少数在孕25周以前发病[1]。尽管该疾病对孕产妇来说是一种良性疾病,但容易导致胎儿窘迫、死胎、早产等,孕妇极易发生产后出血,且此类患者发生胎儿猝死是目前常规胎儿监护不能预测的。研究显示,我国妊娠期肝内胆汁淤积症发病率为5%,围产儿死亡率为32.4%,胎儿窘迫率为36.1%[2]。因此早期诊断、及时干预,对改善围产儿预后非常重要。目前妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制尚未明确,既往研究结果表示妊娠期肝内胆汁淤积症与母体性激素水平增加、硒元素缺乏、免疫失衡等关系密切[3]。妊娠期大量孕激素和雌激素在胎盘合成,会引起孕妇血清甘胆酸(CG)水平升高[4]。亮氨酸氨基肽酶(LAP)主要分布于肝细胞和胆管上皮中,其水平随着孕周逐渐升高,分娩后降低。MicroRNA是一类重要基因调控因子,其可通过调控靶基因对细胞分化、增殖、侵袭迁移起作用。王宏宇等[5]研究显示,miR-155能够抑制胎盘血管生成因子,参与某些妊娠并发症发生。目前关于CG、LAP、miR-155与妊娠期肝内胆汁淤积症关系的研究鲜有报道,本研究旨在探讨CG、LAP与miR-155表达水平对妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断价值及与疾病严重程度的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2018年11月至2023年3月收治的妊娠期肝内胆汁淤积症患者103例作为观察组,另选取同期在妇产科住院的非妊娠期肝内胆汁淤积症患者100例作为对照组,患者及家属均签署知情同意书。观察组患者年龄20～45岁,平均(30.22±3.12)岁;BMI 16～26 kg/m2,平均(21.35±1.25)kg/m2;孕周8+4～40+1周,平均(20.01±4.43)周。对照组患者年龄20～43岁,平均(30.14±3.10)岁;BMI 16～25 kg/m2,平均(21.24±1.11)kg/m2;孕周8+4～40+1周,平均(20.12±4.31)周。两组研究对象上述资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。

根据妊娠期肝内胆汁淤积症分度标准[6],将患者分为重度组55例和轻度组48例,重度组患者年龄22～43岁,平均(30.41±3.10)岁;BMI 16～27 kg/m2,平均(21.12±1.20)kg/m2;孕周9+4～40+1周,平均(20.18±4.40)周。轻度组患者年龄20～40岁,平均(30.30±3.18)岁;BMI 15～25 kg/m2,平均(21.13±1.15)kg/m2;孕周10+4～40+1周,平均(20.51±4.31)周。两组患者上述资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准:(1)符合《妊娠期肝内胆汁淤积症诊疗指南(2015)》[6]标准患者:①妊娠期出现以皮肤瘙痒为主的症状;②血清转氨酶轻度升高;③伴有轻度黄疸;④妊娠终止后,生化指标正常;(2)均为单胎者;(3)无其他原因导致的皮肤瘙痒、黄疸等症状者;(4)无其他妊娠合并症或并发症者;(5)临床病例资料齐全者。排除标准:(1)孕期有免疫抑制剂或免疫增强剂使用史者;(2)合并自身免疫性疾病、风湿性疾病者;(3)严重肝肾功能不全者;(4)合并恶性肿瘤性疾病者;(5)有不能用妊娠期肝内胆汁淤积症解释的实验室检查异常者。

1.3 方法 临床资料收集:收集所有研究对象年龄、BMI、孕次、孕周等基础资料,同时收集血清肝功能指标,包括总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)与总胆汁酸(TBA)。

血清CG、LAP检测:采集两组研究对象空腹静脉血3 ml,低速离心机分离血清,收集血清,低温保存,同批检测。测定前取出冻存标本,置于室温平衡,取室温平衡后的标本50 μl试管内,加入200 μl标记物和200 μl抗体,充分混匀,置于37℃恒温,1 h,加入500 μl分离剂,混匀,室温静置15 min,低速冷冻离心机4℃,3 600 r/min离心20 min,弃上清液,放射免疫分析法检测血清CG、LAP水平。

miR-155检测:采集外周血5 ml,轻晃抗凝管使血液与管壁抗凝剂充分接触,1 600 r/min离心10 min,将上清液转移至无酶EP管中,15 000 r/min离心10 min,吸取上清液于无酶EP管中,低温冷冻备用。置紫外分光光度计于260 nm处测定吸光度,并计算浓度。

1.4 观察指标 (1)比较对照组和观察组、重度组和轻度组患者基础资料及CG、LAP与miR-155水平。(2)分析CG、LAP与miR-155指标诊断妊娠期肝内胆汁淤积症的价值并绘制ROC曲线。(3)分析CG、LAP与miR-155指标判定疾病严重程度的价值并绘制ROC曲线。

2 结果

2.1 对照组和观察组患者基础资料及CG、LAP与miR-155表达水平 对照组与观察组患者年龄、BMI、孕周、孕次差异无统计学意义(P>0.05),观察组患者肝功能指标、CG、LAP与miR-155表达水平均高于对照组患者(P<0.05),见表1。

表1 对照组和观察组患者基础资料及CG、LAP与miR-155表达水平比较

2.2 重度组和轻度组患者基础资料及CG、LAP与miR-155水平重度组与轻度组患者年龄、BMI、孕周、孕次差异无统计学意义(P>0.05),重度组患者肝功能指标水平、CG、LAP与miR-155水平均高于轻度组患者(P<0.05),见表2。

表2 重度组和轻度组患者基础资料及CG、LAP与miR-155表达水平

2.3 CG、LAP与miR-155指标诊断妊娠期肝内胆汁淤积症的价值 CG、LAP与miR-155联合检测诊断妊娠期肝内胆汁淤积症的AUC值高于单项检测(P<0.05),见表3。ROC曲线见图1。

图1 CG、LAP与miR-155指标诊断妊娠期肝内胆汁淤积症价值的ROC曲线

表3 CG、LAP与miR-155指标诊断妊娠期肝内胆汁淤积症的价值

表4 CG、LAP、miR-155指标判定疾病严重程度的价值

2.4 CG、LAP与miR-155指标判定疾病严重程度的价值 CG、LAP与miR-155联合检测评估妊娠期肝内胆汁淤积症严重程度的AUC值高于单项检测(P<0.05),见表3。ROC曲线见图2。

图2 CG、LAP与miR-155指标判定疾病严重程度价值的ROC曲线

3 讨论

妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇预后良好,但对胎儿有不良影响,尤其是妊娠晚期突发性胎儿死亡无法准确预测。既往研究显示,妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘组织细胞凋亡率增加[7],但CG、LAP与miR-155表达水平与该疾病关系的研究较少。本研究通过检测患者CG、LAP与miR-155表达水平,探讨其对妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断价值及疾病严重程度评估。在本研究中观察组患者各项肝功能指标均高于对照组患者,而Kirbas等[8]研究发现,研究人群、年龄、测量方法等均会影响TBA的截断值。因此依赖于TBA及肝功能水平诊断该疾病存在局限,发现敏感生物标志物提高疾病诊断率,对于促进母婴健康具有重要临床意义。

CG是胆酸和甘氨酸结合而形成的结合胆酸,由胆囊贮存,经门静脉被肝摄取,进入体循环的胆酸,当肝细胞受损伤时,会引起CG代谢和循环紊乱;当孕妇有妊娠期肝内胆汁淤积症时,胆酸在外周循环中堆积,血中CG含量增高,并产生皮肤瘙痒症状[9]。母体胆汁酸水平增高是妊娠期肝内胆汁淤积症的生化特征,患者血清CG水平较正常孕妇水平明显增高,可高达10～100倍[10]。正常妊娠胎儿胆汁酸处于动态平衡,胎盘早期胎儿肝脏可自胆固醇合成胆汁酸,引起肝脏分泌和代谢功能不成熟,因此胎儿本身就存在生理性淤胆。本研究检测对照组患者与观察组患者血清CG水平,结果显示,观察组患者CG水平高于对照组患者,重度组CG水平高于轻度组患者,提示血清CG水平随着疾病程度加重而升高。正常妊娠盘细胞内有丰富内质网和线粒体,妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘合体滋养细胞绒毛稀少,生理功能受损,必然会影响胎盘的转运功能,进而导致胎儿循环中的胆汁酸浓度增高。有学者研究认为,妊娠期母体雌激素、孕激素水平升高,会导致肝内胆汁轻度淤积,CG呈生理性轻度增高,而妊娠期肝内胆汁淤积症患者CG明显增高,根据CG升高幅度可区分二者[11]。

LAP广泛分布于肝、肾、脑、肌肉等组织,可评价人体肝功能。随着临床对LAP研究进展,发现胎盘中的LAP对维持正常妊娠具有重要作用,LAP是唯一一种可将催产素降解成催产素酶的蛋白酶,在孕37周达到高峰,分娩后恢复正常[12]。当LAP不随着妊娠时长增高时可能提示异位妊娠、先兆流产等妊娠并发症的发生[13]。本研究中,观察组患者血清LAP水平高于对照组患者,重度组患者血清LAP水平高于轻度组患者,提示血清LAP在妊娠期肝内胆汁淤积症发生发展过程中发挥着重要作用。当发生妊娠期肝内胆汁淤积症时,淤积的胆汁会破坏肝细胞,进而会导致LAP大量释放[14]。

miRNA是一类内源性小分子非编码单链RNA,通过与mRNA的3,-UTR完全或不完全互补配对结合,在转录后对靶基因进行负调控,其参与了细胞分化、增殖、死亡等一系列重要进程,在细胞和组织表达中表现出疾病相关性、组织特异性,因此其被应用于许多疾病发病机制研究[15]。miR-155是与免疫系统密切相关的miRNA之一,在各类活化免疫细胞中表达普遍增高。miR-155在巨噬细胞中通过调节多种信号通路调节天然免疫应答反应,而在T细胞中通过影响T细胞分化,维持内环境稳定[16]。已有研究显示miR-155表达与白血病、胃癌、糖尿病等有关[17,18],但关于其在妊娠期肝内胆汁淤积症发病过程中的表达的相关研究较少。谭志琴等[19]研究证实了miR-155在妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清中表达水平显著升高,提示其可能参与了该疾病发生发展。本研究中观察组miR-155水平高于对照组,重度组患者miR-155水平高于轻度组,表明miR-155与妊娠期肝内胆汁淤积症发生发展有关,其可作为此类患者围产儿预后预测潜在靶点。妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制可能是免疫功能失调,由此推测可能是某些miRNA表达失调导致靶基因异常,进而导致母体免疫失衡。另外本研究还显示,CG、LAP与miR-155联合检测诊断妊娠期肝内胆汁淤积症的AUC值高于单项检测,CG、LAP与miR-155联合检测评估疾病严重程度的AUC值高于单项检测,表明上述指标联合检测有助于早期预测妊娠期肝内胆汁淤积症的严重程度。同时本研究也为下一步研究免疫因素参与妊娠期肝内胆汁淤积症发病和胎儿不良妊娠结果的分子机制奠定了基础。

综上,检测CG、LAP与miR-155有助于早期诊断妊娠期肝内胆汁淤积症,且CG、LAP与miR-155联合检测有助于早期预测妊娠期肝内胆汁淤积症的严重程度。但本研究样本量较少,研究时间较短,今后可进一步开展严格设计的大样本量、多中心试验,获得更客观的证据。