HLA-B27、ANA 和ANCA 检测对类风湿性关节炎的诊断价值

曹娜娜，王娜，刘玉珂

（河南省洛阳正骨医院，河南 洛阳 471000）

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是临床常见的慢性免疫性疾病， 多发于40~60 岁中老年女性患者[1-3]。 临床常表现为对称性、进行性和侵蚀性关节炎， 严重者可造成关节畸形和功能丧失[4-6]。 近些年，随着人们饮食结构和生活方式的变化，RA 的发病率逐年递增，2020 年我国RA 的发病率在慢性病中占0.28%~0.36%[7-9]。早期RA 缺乏特异性的临床表现， 常被误诊为系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE） 和 骨 关 节 炎（Osteoarthritis，OA），往往延误最佳的治疗时机，且老年患者多伴基础疾病，若未及时有效治疗RA 会使膝关节造成不可逆性损伤， 严重影响患者的日常活动和生活质量。 因此，早期诊断对RA 患者的预后有积极的意义。 目前临床常用X 线、MRI 影像学检查进行诊断， 但是频繁使用影像学射线对患者造成极大的伤害[10]。 研究发现，动态监测血清免疫指标对RA 患者的治疗和预后有积极的指导意义[11]。 人类白细胞B27 抗原（Human leukocyte B27 antigen,HLA-B27）与关节性疾病有一定的相关性，抗核抗体（Anti-nuclear antibody ,ANA）是临床筛查自身免疫性疾病的重要指标[12-13]。 抗中性粒细胞胞质抗体(Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)以中性粒细胞和单核细胞为靶抗原的抗体，在原发性小血管炎中有较高的表达[14]。本研究旨在探讨HLA-B27、ANA 和ANCA 在诊断RA 的临床价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年9 月至2020 年9 月在我院住院的患者，其中RA 组132 例，并随机选取同期治疗的非RA 组患者132 例。 纳入标准：满足RA 的诊断依据[15]；RA 诊断标准：晨僵≥6 周；累及部位3 个及以上；手关节炎；对称性关节炎；类风湿结节； 血清类风湿因子阳性；X 片提示骨侵蚀或关节局限性脱钙或明显脱钙； 满足以上≥4 条。排除标准：患恶性肿瘤；肝肾功能不全；临床资料不全。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集患者空腹静脉血5 mL，静置30 min 后离心并分离血清（2 000 r,10 min），取上层清液置于-80 ℃冰箱保存，从采集到检验≤2 h。

1.2.2 检测方法 采用酶联吸附试验法 （ELISE 检测）白细胞介素33（Interleukin-33，IL-33）、白细胞介素35（Interleukin-35，IL-35）水平，试剂和试剂盒均采用杭州联科生物技术股份有限公司。 检测前质控并矫正仪器，在试验中设置空白、阳性、阴性和质控孔，选择自动酶标仪比色分析，在450 nm波长处测定吸光度值（OD 值）并计算样本含量。 采用化学发光分析仪分析25-（OH）VitD3 水平， 试剂和试剂盒均采用上海钰博生物科技有限公司。

使用流式细胞术检测HLA-B27 阳性率，仪器： 美国贝克曼库尔特公司FC500 流式细胞仪和原装试剂。记录淋巴细胞中HLA-B27+/B7-细胞的平均荧光强度和细胞表达率。 判定标准：HLAB27+/B7-占总淋巴细胞比例大于60%且平均荧光强度大于5。

采用间接免疫荧光法检测ANA 阳性率，仪器选用德国欧蒙公司生产放射免疫计数仪， 试剂选用上海科新生物公司生产试剂。 判定标准：荧光显示镜下特异性荧光为阳性。

采用间接免疫荧光法检测ANCA 阳性率，仪器选用德国欧蒙公司生产放射免疫计数仪， 试剂选用上海江莱生物科技有限公司生产试剂。 判定标准：荧光显示镜下特异性荧光为阳性。

1.3 观察指标

比较两组一般资料和VitD、IL-33 和IL-35水平。

比较两组HLA-B27、ANA 和ANCA 阳性率。

相 关 性 分 析IL-33、IL-35 和VitD 水 平 与HLA-B27、ANA 和ANCA 阳 性 率 的 关 系， 判 断HLA-B27、ANA 和ANCA 诊断RA 的准确性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 21.0 统计学软件对本研究中类风湿性关节炎患者临床数据进行整理和分析，满足正态分布且方差齐的计量资料采用（±s）表示，采用两样本独立t检验比较组间差异，计数资料用率表示， 采用χ2检验，Pearson相关性分析RA 患者IL-33、IL-35 和VitD 水平与HLA-B27、ANA 和ANCA 阳性率，kappa一致性分析HLAB27、ANA、ANCA 与联合检测的诊断价值，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比较两组一般资料 比较两组一般资料无显著差异（P>0.05），见表1。

表1 比例两组一般资料（±s）［n(%)］

表1 比例两组一般资料（±s）［n(%)］

类别 RA 组（n=132） 非RA 组（n=132） t/χ2 P性别1.132 0.287年龄（岁）吸烟史饮酒史家族史男女 有无 有无 有无37（28.03）95（71.97）52.36±5.21 49（37.12）83（62.88）43（32.58）89（67.42）73（55.30）59（44.70）45（34.09）87（65.91）52.64±5.34 50（37.88）82（62.12）47（35.61）85（64.39）68（51.52）64（48.48）0.431 0.016 0.271 0.381 0.667 0.899 0.604 0.537文化程度0.138 0.710高中及高中以下高中以上75（56.82）57（43.18）72（54.55）60（45.45）居住环境潮湿0.693 0.405关节活动度（°）是否84（63.64）48（36.36）76.36±5.36 81（61.36）51（38.64）76.69±5.48 0.495 0.621

2.2 比较两组血清学水平 RA 组患者IL-33 水平高于非RA 组患者（P<0.05），IL-35 和VitD 水平显著低于非RA 组患者（P<0.05），见表2。

表2 比较两组患者IL-33、IL-35 和VitD 水平（±s）

表2 比较两组患者IL-33、IL-35 和VitD 水平（±s）

组别 IL-33（pg/mL）RA 组（n=132）非RA 组（n=132）t P 28.45±2.14 11.36±2.08 65.794<0.001 IL-35（pg/mL）25.37±3.47 54.18±5.63 50.050<0.001 VitD（nmmol/L）32.88±3.51 50.25±5.46 30.746<0.001

2.3 比较RA 组患者HLA-B27、ANA 和ANCA 阳性率 RA 组患者HLA-B27、ANA 和ANCA 阳性率均高于非RA（P<0.05），见表3。

表3 比较RA 患者HLA-B27、ANA 和ANCA 阳性率［n（%）］

2.4 RA 组患者IL-33、IL-35 和VitD 水平与HLAB27、ANA 和ANCA 阳性率的相关性分析 RA 组患者IL-33 水平与HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈正相关，IL-35 水平与HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈负相关，VitD 水平与HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈负相关，见表4。

表4 RA 患者IL-33、IL-35 和VitD 水平与HLA-B27、ANA 和ANCA 阳性率的相关性分析

2.5 比较RA 组患者指标特异性和敏感度 见表5。

表5 比较指标特异性和敏感度

3 讨论

RA 是慢性全身炎症性疾病，目前对发病机制尚无定论，以侵蚀性关节炎为主要特征，常表现为关节滑膜炎症、 关节软骨和软组织受损， 常见于腕、手、足、膝的病变，多以手掌指关节和近节指关节受累[16-17]。 具有极高的致残率，可发生于任何年龄，女性高于男性。 目前RA 的治疗原则是延缓疾病进展、降低风湿活动性，达到控制关节破坏和预防关节功能丧失的目的。 早期发现和早期治疗是RA 患者良好预后的关键， 由于RA 早期缺乏特异性临床特征，因此增加了临床医师的诊断难度，但是风湿性疾病患者常出现特异性自身抗体可以为临床医师提供借鉴和判断。

本研究发现，RA 组患者IL-33 水平高于非RA 组患者，IL-35 和VitD 水平低于非RA 组患者。IL-33 是当机体受到外在刺激时产生的前炎性因子， 与其受体结合影响细胞因子的分泌， 使Th1/Th2 免疫应答失衡，参与炎症、免疫学疾病和心血管疾病的反应，在RA 类疾病中有较高的表达。IL-35 是一种抑炎症因子，通过诱导Tregs和调节性B细胞使T 细胞发生最大抑制效应参与免疫应答，因此在RA 中相对较低。 VitD 不仅可以维持人体钙环境稳定， 对免疫调节也起重要作用，RA 患者多伴不同程度的骨质疏松，RA 患者体内钙流失水平高于非RA 患者， 因此VitD 含量相对较少。 因此， 临床医师在风湿性疾病的诊断治疗中可关注IL-33、IL-35 和VitD 水平辅助判断RA。

本研究中RA 组患者HLA-B27、ANA 和ANCA 阳性率均明显高于非RA 组。HLA-B27 是一种显性遗传标志抗原，可以调节免疫应答，通过结合自身肽段使T 细胞杀伤靶细胞，损伤组织和器官，在全身性炎症反应中有特异性的表现。 既往研究发现，HLA-B27 在强直性脊柱炎中有较高的表达[18]，因此HLA-B27 在RA 中特异度高， 但灵敏度相对较低。 ANA 靶抗原是核酸、组蛋白、非组蛋白和各种蛋白酶， 除细胞核外在细胞质和细胞器中也大量存在，是非特异性的自身抗体，在心血管疾病和血栓疾病中均可出现较高的阳性率， 既往研究发现，ANA 在系统性红斑狼疮中有较高的表达[19]。 因此ANA 在RA 中特异度高，但灵敏度相对较低，在临床诊断中应联合其他指标共同鉴别。ANCA 是第一个被证实参与血管炎发病的相关抗体， 以靶抗原为中性粒细胞胞浆的多种成分， 如丝氨酸蛋白酶3（PR3）、髓过氧化物酶（MPO）、弹性蛋白酶和乳铁蛋白，当人体受到外在刺激时，中性粒细胞被募集参与抗击外来感染源同时发生凋亡。且RA 患者IL-33 水平与HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈正相关，IL-35 和VitD 水平与HLA-B27 （+）、ANA（+）和ANCA（+）呈负相关。临床医师可通过检测IL-33、IL-35 和VitD 水平辅助判断RA 患者疾病的严重程度，以期指导临床。

因此，临床难以依据单一指标诊断RA，应结合HLA-B27、ANA 和ANCA 联合评估和判断，避免误诊和漏诊，HLA-B27、ANA 和ANCA 联合检测可以提高RA 诊断的准确度。