两湖地区肺癌人群MICA 基因分布比较分析

陈慧，陈纯静，李育萌，陈恩

（1.南华大学附属第一医院病案室，湖南 衡阳 421001；2.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；3.南华大学附属第一医院检验医学中心，湖南 衡阳 421001）

肺癌是目前全球发病率和死亡率最高的肿瘤， 且呈现发病率逐年增高、 发病年龄年轻化趋势。 肺癌的发生发展与吸烟、大气污染、危险因素暴露及基因变异等多种因素特别是人群遗传背景有关[1-2]。 MICA 是NK 细胞表面NKG2D 分子的配体，MICA 与NK 细胞表面NKG2D 分子结合后，可以通过调节NK 细胞功能来发挥重要的作用[3]。MICA 基因和多种肿瘤的发生发展密切相关，我们前期研究也表明MICA 基因多态性和肺癌的易感性相关， 但不同种群特别是两湖地区肺癌人群之间MICA 分布是否有差异仍不清楚。本研究选择两湖地区肺癌人群，对其MICA 的分布进行比较分析。

1 材料与方法

1.1 研究对象 160 名肺癌患者分别来自湖北省荆州市和湖南省衡阳市，其中荆州市100 例，衡阳市60 例；所有患者均经病理诊断为肺癌患者；研究对象相互间无亲缘关系； 并符合伦理委员会的其他相关要求。

1.2 外周血基因组DNA 的提取 收集肺癌患者新鲜的EDTA 抗凝静脉血2 mL， 采用WHO 推荐的标准盐析法提取gDNA，测定波长260 nm 和280 nm的OD 值，A260/A280 值在1.6 ～1.8 范围内为宜。

1.3 MICA 基因分型方法 采用PCR-SSP(PCR sequence-specific primers) 与PCR-SBT （PCR sequence-based typing） 两种不同的方法对样本进行MICA 基因分型，具体方法参照文献进行[4-5]。

1.4 统计学分析 MICA 等位基因频率、MICA 基因型频率、Hardy-Weinbergequilibrium (HWE) 采用SHESIS 软件（http://analysis.bio-x.cn）计算获得，χ2检验、 单因素方差分析及t检验采用SPASS 18.0软件完成。

2 结果

2.1Hardy-Weinberg平衡吻合度检验 所选择的研究样本经Hardy-Weinberg平衡吻合度检验分析表明， 各等位基因的分布理论频率与观察频率之间无显著差异， 表明本实验所选样本符合Hardy-Weinberg平衡（χ2=31.29，P=0.6913）。

2.2 两地肺癌人群一般资料比较分析 本组研究对象分别来自湖南省衡阳市和湖北省荆州市的确诊肺癌患者，衡阳肺癌患者60 例，平均年龄61.73岁（36~83 岁），其中男性49 例（81.7%），女性11 例（18.3%）；荆州肺癌患者100 例，平均年龄60.9 岁（33~81 岁），其中男性69 例（69.0%），女性31 例（31.0%）； 两组人群中性别和年龄间无统计学差异，见表1。

表1 两地肺癌人群一般资料比较

2.3 两地肺癌人群MICA 等位基因频率分布差异分析 衡阳组和荆州组各检出8 种MICA 等位基因，其中衡阳组中未检出MICA*027，荆州组中未检出MICA*009N； 荆州患者组中分布频率最高的3 种等位基因是MICA*00201、MICA*019 和MICA*010；衡阳患者组中分布频率最高的3 种等位基 因 是 MICA*010、MICA*00201 和 MICA*01201； 两组间MICA 等位基因分布存在统计学差异（χ2=16.75，P=0.0327），见表2。

表2 两地区肺癌人群MICA 等位基因频率分布差异

2.4 两地肺癌人群MICA 等位基因型差异分析衡阳组和荆州组共检出28 种MICA 等位基因型，其中荆州组中检出24 种，衡阳组中检出19 种。 但两地肺癌人群MICA 等位基因型分布无统计学差异（χ2=39.23，P=0.0609），见表3。

表3 两地肺癌人群MICA 等位基因型差异

2.5 两地肺癌人群MICA-STR 等位基因频率分布差异分析 衡阳组检出5 种MICA-STR 等位基因，荆州组中检出4 种MICA-STR 等位基因； 荆州组中未检出MICA-A6。两地肺癌人群MICA -STR 等位基因频率分布无统计学差异 （χ2=5.54，P=0.2362），见表4。

表4 两地肺癌人群MICA-STR 等位基因频率分布

2.6 两地肺癌人群MICA -STR 等位基因型差异比较 衡阳组和荆州组共检出14 种MICA -STR 等位基因型，其中荆州组中检出14 种，衡阳组中检出10 种。 但两地肺癌人群MICA -STR 等位基因型分布无统计学差异（χ2=19.11，P=0.1203），见表5。

表5 两地区肺癌人群MICA-STR 等位基因型差异

3 讨论

肺癌是目前世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，并且肺癌患者逐年趋于年轻化。 据湖南省和湖北省肿瘤年报显示， 湖南省癌症新发病例数约15 万/年、 湖北省癌症新发病例数约17 万/年，两省因癌症死亡数均约为10 万/年，肺癌在新发和死亡的病例中仍排名第一。 肺癌发病机制复杂，与多种因素特别是人群遗传背景有关， 大量的研究开始关注于肺癌与基因多态性之间的关联性研究。 通过肿瘤与基因多态性相关性的研究，可以在肿瘤预防、精准诊疗、预后评估等方面为肿瘤临床防治提供指导。

MICA 基因位于第6 号染色体的6p21.3 区域的MHC 基因座位内， 包括了6 个外显子结构和5个内含子结构，与MHC-I 类基因的组织排列方式十分相似，属非经典的MHC Ⅰ类基因家族[6-7]。MICA 基因第5 外显子和其余几个外显子不相同，其在不同型别之间具有微卫星的多态性， 一般有4~10 个串联重复序列，根据微卫星GCT 串联重复的数目差异，可将其分为A4~A10 等不同类型的等位基因。 已有大量研究表明MICA 与多种肿瘤相关，MICA 在多种肿瘤的转归的过程中发挥了重要的作用[8-12]。 我们前期研究表明，MICA 等位基因多态性与肺癌的易感性间存在关联性[13]，但对不同地区人群之间差异未进行比较。 在本研究中，我们选择湖南和湖北即两湖地区的汉族肺癌患者人群进行研究， 对其MICA 基因分布特征进行分析研究。结果表明，在两湖地区肺癌人群MICA 基因分布之间存在统计学差异，也是首次报道。

在进行两湖地区肺癌人群研究中， 湖北省选择荆州市，湖南省选择衡阳市。 因衡阳和荆州对两地人群都有很好的代表性。 荆州地处湖北之中、中部之中、江汉平原腹地，总面积1.41 万平方公里，常住人口为523 万， 是汉地九州之一和楚文化的发祥地之一。 衡阳位于湖南省中南部，总面积1.53万平方公里，常住人口为664 万人，湘南地区的政治、经济、军事、文化中心。 《尚书·禹贡》记载，“荆及衡阳惟荆州”[14]，荆州及衡阳都具有悠久的历史，保持了遗传的持续性，衡阳及荆州两地对两湖地区肺癌人群MICA 基因分布研究具有很好的代表性。

本研究中衡阳组和荆州组各检出8 种MICA等位基因，其中衡阳组中未检出MICA*027，荆州组中未检出MICA*009N； 荆州患者组中分布频率最高的3 种等位基因是MICA*00201、MICA*019和MICA*010； 衡阳患者组中分布频率最高的3种等位基因是MICA*010、MICA*00201 和MICA*01201； 两组之间MICA 等位基因分布间存在统计学差异， 结果表明两湖地区肺癌人群MICA 等位基因频率分布之间存在差异。不同人群中MICA 遗传背景不同[15]，引起此种差异的原因可能是两地人群MICA 等位分布频率本身存在差异，但湖南和湖北人群MICA 基因分布频率目前仍然未有研究，我们将会进行进一步的研究分析； 同时也不能排除肺癌对多种MICA 等位基因均易感。

本研究在衡阳组和荆州组检出的MICA 等位基因型、MICA -STR 等位基因分布频率和MICA -STR 等位基因型均不相同。但两地肺癌人群MICA等位基因型、MICA -STR 等位基因分布频率和MICA -STR 等位基因型分布总体比较并无统计学差异（P＞0.05），结果进一步表明两湖地区肺癌人群MICA 基因分布之间存在差异。 分布总体比较并无统计学差异原因主要是MICA 等位基因型中包含有杂合子和纯合子， 受到了另外一条等位基因影响；MICA-STR 包含了不同的基因型如MICA-A4包含了MICA*012、MICA*045 等，不同MICA 等位基因型影响所致。 本研究提示在临床诊疗中，特别是健康人群体检中， 可以开展MICA 基因型鉴定，对肺癌等肿瘤易感基因人群， 需通过生活方式干预、 增加体检频次等方法预防肿瘤发生及开展早期诊断。