基于NLRP3炎症小体探讨半夏泻心汤对炎症性结直肠癌小鼠的影响❋

乐音子, 曾 莉, 苏联麟, 顾云慧, 丁天雯, 谢 金, 颜 帅△

(1.南京中医药大学附属苏州市中医医院,江苏 苏州 215009;2.南京中医药大学,南京 210023)

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是最常见的胃肠道恶性肿瘤,已成为全球范围内发病率(排名第三)及病死率(排名第二)极高的恶性肿瘤之一[1]。2020年在欧盟27个国家中,结直肠癌占所有新诊断癌症的12.7%,同时CRC早期诊断的患者不到40%,大多数患者确诊时已出现淋巴结及远处脏器转移[2]。虽目前可进行各种早期筛查试验和治疗(化疗、手术、放疗以及靶向治疗),但流行病学资料显示CRC患者病死率并未见明显降低[3]。2015年欧洲CRC的经济负担为19.1亿欧元,预计到2023年CRC的医疗费用将会达到另外一个新高度[4]。我国的癌症谱正在从发展中国家向发达国家(美国、英国)转变,人口老龄化和不良生活方式将继续增加我国肿瘤疾病医疗负担[5]。

目前已证实慢性炎症参与肿瘤的增殖、转移、凋亡等各个阶段[6],亦被称为恶性肿瘤的第七大生物学特征[7]。研究证实CRC患者组织中存在大量炎性细胞浸润,且肿瘤分期与瘤体组织中炎性细胞因子含量呈正相关,提示炎症与CRC的发生和转归密切相关[8]。炎症小体是在微生物和应激信号刺激下形成的大的胞浆蛋白复合体,NLRP炎症小体(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein, NLRP)3已经被证实在炎症性结直肠癌发生发展中扮演重要角色,尽管其确切机制尚不清楚[9]。新近临床研究发现NLRP3在结直肠癌阳性组织中高度表达;且NLRP3的高表达与较差的预后相关[10]。体外实验研究确证NLRP3表达是CRC细胞上皮向间充质转化的先决条件,同时促进CRC细胞迁移和增殖的作用[11]。针对晚期结肠癌及结直肠癌术后患者化疗,应用半夏泻心汤辅助治疗,可减毒增效,显著提高患者生活质量,减少复发和转移,延长生存期[12-14]。本实验旨在从NLRP3炎症小体观察其在炎症性CRC进展中的作用及半夏泻心汤的干预的可能作用机制。

1 材料

1.1 动物

8～10周龄健康雄性C57BL/6小鼠100只,体质量(20±2)g,购自湖南省斯莱克景达动物实验公司,合格证号 SCXK(湘)2019-0004。所有实验程序经南京中医药大学附属苏州市中医医院动物伦理委员会批准(批准号:2022伦动批054)。

1.2 药物及主要试剂

半夏泻心汤由半夏12 g、黄芩9 g、干姜9 g、人参9 g、黄连3 g、甘草9 g、大枣(四枚)36 g组成,购自南京中医药大学附属苏州市中医医院,饮片由南京中医药大学炮制教研室陆兔林教授鉴定为正品。取以上7味中药,80倍量处方,第1次加6倍量水浸泡0.5 h;第2次加4倍量水,煎煮1 h,趁热过滤;合并2次滤液,静置24 h,2 000 r/min离心10 min,上清液滤过,减压浓缩至含生药1 g/mL,密封后,4 ℃保存备用。美沙拉嗪购自上海爱的发制药有限公司(货号210409)。葡聚糖硫酸钠盐(dextran sulfate sodiuln, DSS)和氧化偶氮甲烷(azoxymethane, AOM)均购自美国MP公司(货号分别为0216011080和0218397125)。NLRP3、芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor, AhR)、三叶因子(trefoil factor, TFF)3、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-9芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor, AhR)、三叶因子(trefoil factor, TFF)3一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG二抗均购自美国Proteintech公司(货号分别为PA5-79740、17840-1-AP、23277-1-AP、10375-2-AP和SA00001-2);Ki67一抗购自英国Abcam公司(货号ab16667);TUNEL试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司(货号40306ES50);TRIzol试剂购自美国Thermo Fisher Scientific公司(货号15596026);mRNA逆转录试剂盒购自中国北京康为世纪有限公司(货号CW2569)。

注: 与正常对照组比较**P<0.01;与模型组比较#P<0.05,##P<0.01A.正常对照组;B.模型组;C.半夏泻心汤低剂量组;D.半夏泻心汤高剂量组;E.美沙拉嗪组图1 各组小鼠体质量、结肠长度变化及肿瘤生长情况

注:与正常对照组比较**P<0.01;与模型组比较#P<0.05,##P<0.01A.正常对照组;B.模型组;C.半夏泻心汤低剂量组;D.半夏泻心汤高剂量组;E.美沙拉嗪组图2 各组小鼠脾脏及胸腺指数比较

A.正常对照组;B.模型组;C.半夏泻心汤低剂量组;D.半夏泻心汤高剂量组;E.美沙拉嗪组图3 各组小鼠结肠组织病理形态变化(HE,×400)

A.正常对照组;B.模型组;C.半夏泻心汤低剂量组;D.半夏泻心汤高剂量组;E.美沙拉嗪组图4 TUNEL法检测各组小鼠结肠组织细胞凋亡情况

A.正常对照组;B.模型组;C.半夏泻心汤低剂量组;D.半夏泻心汤高剂量组;E.美沙拉嗪组;芳香烃受体(AhR)图5 免疫组化法检测各组小鼠结肠组织Ki67和AhR蛋白表达情况(×400)

A.正常对照组;B.模型组;C.半夏泻心汤低剂量组;D.半夏泻心汤高剂量组;E.美沙拉嗪组图6 Western blot法检测各组小鼠结肠组织NLRP3、AhR、TFF3和MMP-9 蛋白表达

1.3 仪器

5424 R高速冷冻离心机,德国Eppendorf公司;BMJ-A型组织包埋机,常州中威电子仪器公司;Krumdieck MD6000切片机,德国TSE Systems公司;CX33显微镜,日本Olympus公司;FC酶标仪、PIKOREAL96 PCR扩增仪、WR0100中型胶电泳槽,美国Thermo Fisher Scientific公司。

2 方法

2.1 炎症性结直肠癌小鼠模型制备分组及给药方法

适应性饲养后,将100只健康C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪组、半夏泻心汤低剂量组、半夏泻心汤高剂量组,每组各20只。除正常对照组外,其余小鼠均行CRC模型构建[15],具体过程如下:模型组、美沙拉嗪组、半夏泻心汤低剂量组、半夏泻心汤高剂量组小鼠腹腔注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane, AOM)10 mg/kg一次,并给予2%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)饮水,连续饮用7 d,第8天更换蒸馏水连续饮用14 d;第22天再次给予1.5%DSS饮水,连续饮用5 d,第27天更换蒸馏水连续饮用16 d;第43天更换为1.5%DSS连续饮用5 d,第48天更换蒸馏水连续饮用至造模第63天结束。正常对照组腹腔注射与AOM同体积的0.9%氯化钠溶液,连续饮用蒸馏水直至造模第63天实验结束。第42天后,每组各取2只小鼠处死并观察一般状态及结肠组织病理学变化确认是否造模成功。从第42天开始,正常对照组及模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/天;其余三组小鼠按对应药物灌胃治疗,直至取材。半夏泻心汤低剂量组、半夏泻心汤高剂量组和美沙拉嗪组分别按照3.915 g/kg/d、15.66 g/kg/d、0.6 g/kg/d的剂量灌胃21 d。

2.2 小鼠一般情况、结肠长度变化及成瘤率情况

观察并记录小鼠一般行为状态,记录给药期间体质量、大便性状及便血情况。实验结束后禁食24 h后,脱颈处死小鼠,比较各组小鼠结肠长度变化及结肠成瘤率情况,同时获取结肠样本留存待测后续指标。

2.3 脏器指数

摘取小鼠的胸腺和脾脏,用0.9%氯化钠注射液洗净残血后,并用滤纸吸干,称重(mg),得到胸腺指数和脾脏指数。即:脏器指数=(脏器重量/小鼠体质量)×10。

2.4 小鼠结肠组织病理学改变

分别取脾脏、结直肠组织在10%多聚甲醛中浸泡(选择肿瘤分布密集部位结肠,由回盲部一侧开始将结肠卷叠在一起,正常组随机选取部分肠管卷叠)48 h后,经脱水、常规石蜡包埋,切成4 μm的切片。依次脱蜡、水化,进行HE染色制作病理切片,光学显微镜下观察组织形态。

2.5 ELISA检测小鼠血清中炎症因子含量

各组小鼠眼球取血,静置2 h,4 ℃、3 000 r/min离心15 min,取上清,-20 ℃冰箱备用,按照肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,干扰素(interferon, IFN)γ,白介素(interleukin, IL)-6和IL-10 ELISA试剂盒说明书进行后续检测。

2.6 TUNEL法检测结肠组织中的细胞凋亡情况

取结肠组织切片,经脱蜡、水化后,添加细胞通透液反应30 min;加TUNEL反应液,反应 1 h ;滴加荧光素标记的抗体,避光孵育30 min后,荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。

2.7 免疫组织化学检测结肠组织Ki67和AhR 蛋白表达

取结肠最大的冠面切片进行免疫组化染色,经脱蜡、水化、热抗原修复后,滴加过氧化氢灭活内源性过氧化物酶;置于一抗蛋白液Ki67(1:500)或AhR(1:100)中4 ℃孵育过夜,二抗蛋白液(1:1 000)中37 ℃反应30 min ;滴加3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐水合物(3,3'-diaminobenzidine, DAB)显色,苏木精复染后显微镜下观察,计算累积吸光度值,阴性对照用磷酸缓冲盐溶液代替一抗。胞浆呈棕黄色为阳性细胞。镜下观察不同视野下免疫组化阳性细胞数。

2.8 荧光定量PCR法检测结肠组织NLRP3、AhR、TFF3和P53 mRNA的水平

依据TRIzol法提取各组结肠组织样本的总RNA,以组织总mRNA为模板,逆转录cDNA,逆转录产物可直接用于荧光定量PCR反应,进行扩增。运用Primer 5软件设计引物,PCR引物由北京擎科生物科技有限公司合成,各引物序列见表1。定量PCR扩增程序:95 ℃预变性10 min,进入以下循环95 ℃变性15 s;60 ℃ 退火60 s共40个循环。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参,用相对定量法计算目的基因的表达水平,相对表达量用2-△△Ct表示。每个样本独立重复实验3次。

表1 实时荧光定量PCR引物序列

2.9 Western Blot法检测结肠组织NLRP3、AhR、TFF3、MMP-9蛋白的表达

解冻小鼠结肠组织,称取0.05 g置于EP管中,加入放射免疫沉淀法(radio immunoprecipitation assay,RIPA)裂解液500 μL,匀浆裂解各组小鼠结肠组织,取上清液并用双吡啶甲酸(bicinchoninic acid,BCA)定量法测定样品组织蛋白原液浓度。制备蛋白样品并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,转移至聚偏二氟乙烯膜,将印迹与一抗NLRP3(1:5 000)、AhR(1:2 000)、TFF3(1:1 000)、MMP-9(1:500)、GAPDH(1:5 000)孵育24 h,缓冲液清洗聚偏二氟乙烯膜3次,加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG二抗(1:6 000)孵育1 h,再次洗涤,加入ECL发光液进行显影并成像。使用Quantity one专业灰度分析软件进行分析,其后将每组目的蛋白的灰度值除以GAPDH灰度得出相应的相对表达量。

2.10 统计学方法

应用SPSS 22.0 软件进行数据统计分析,采用单因素方差(one-way ANOVA)分析,计量资料以均数±标准差表示,P<0.05具有统计学意义。

3 结果

3.1 各组小鼠一般情况和结肠病变情况比较

采用意向性分析原则计算小鼠炎症性结直肠癌的造模率(实验中死亡小鼠计为未成瘤)为63.35%。体质量下降是AOM/DSS诱导结直肠癌的重要评价指标之一。结果如图1显示,造模过程中发现结直肠癌小鼠的体质量从第7天开始呈现下降趋势;在第42天给予药物干预后,结直肠癌小鼠体质量从第49天开始呈现较显著回升。与模型组比较,给予低、高剂量的半夏泻心汤后,模型组小鼠的体质量有显著的回升。绝大部分小鼠出现不同程度的生理不适反应,如精神萎靡、腹泻症状,严重的还出现便血症状。当给予半夏泻心汤及美沙拉嗪干预后,腹泻、粪便隐血及便血症状得到显著改善。与正常组比较,模型小鼠因造模剂刺激肠道发生炎症、水肿等病变,结肠长度明显缩短(P<0.01)。与模型组相比,半夏泻心汤和美沙拉嗪组显著抑制小鼠结肠缩短现象。同时模型组小鼠结肠组织肿瘤生长密集,数量较多,瘤体间距小;与模型组比较,半夏泻心汤和美沙拉嗪分别干预后不同程度改善CRC小鼠结肠组织瘤体数目、间距和大小均有不同程度改善(P<0.05)。

3.2 各组小鼠脾脏及胸腺指数比较

脾脏和胸腺是机体重要的免疫器官,其脏器指数在某种程度上作为粗略评估其免疫功能的指标。由图2可知,模型组小鼠经半夏泻心汤干预后,模型组小鼠脾脏指数和胸腺指数均出现不同程度的降低,其中以半夏泻心汤高剂量组降低胸腺指数最为明显(P<0.01)。

3.3 各组小鼠脾脏组织病理学、结肠组织病理学的影响

组织病理学结果如图3所示,脾脏病理切片结果显示模型组小鼠脾脏白髓和红髓均有增多趋势,且见蓝色淋巴细胞区域聚集,经半夏泻心汤和美沙拉嗪干预后有一定的下降趋势。正常组小鼠结肠形态正常(黏膜上皮排列有序,结肠隐窝腺体基本完整,肠绒毛正常生长),杯状细胞丰富,无炎性细胞浸润;模型组小鼠与正常组相比较,结肠组织黏膜破损明显,隐窝腺体萎缩,结构局部消失或变形,肠绒毛结构变薄,杯状细胞接近消失,同时存在大量炎性细胞浸润,与瘤体组织表现较一致。造模期间分别给予低、高剂量半夏泻心汤和美沙拉嗪治疗后,三组小鼠结肠组织损伤程度明显降低,呈现较完整的黏膜,炎性细胞数量不同程度减少。

3.4 各组小鼠血清细胞因子水平比较

利用ELISA法检测血清TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10水平,结果如表2所示。与模型组比较,半夏泻心汤高剂量组小鼠血清TNF-α,IL-6和IFN-γ含量显著降低(P<0.01),IL-10含量显著升高(P<0.05)。

表2 各组小鼠血清炎性细胞因子水平比较

3.5 各组小鼠结肠组织肿瘤细胞凋亡情况

TUNEL染色检测结果显示,模型组肿瘤细胞凋亡率有所降低(P<0.05);而与模型组比较,半夏泻心汤高剂量组和美沙拉嗪组均可显著升高肿瘤细胞凋亡率,且半夏泻心汤高剂量组组提升程度更为明显(P<0.01),详见图4、表3。

表3 各组小鼠结肠组织肿瘤细胞凋亡情况比较

3.6 各组小鼠结肠组织Ki67和AhR免疫组化检测结果

如图5和表4所示,与正常组比较,CRC小鼠结肠组织Ki67和AhR蛋表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,半夏泻心汤高剂量组和美沙拉嗪组Ki67和AhR蛋白表达显著降低(P<0.05)。

表4 各组小鼠结肠组织Ki67、AhR表达情况比较

3.7 各组小鼠结肠组织NLRP3、AhR、TFF3和P53 mRNA表达比较

如表5所示,与正常组比较,模型组小鼠结肠组织NLRP3、AhR和P53 mRNA表达显著升高(P<0.01),TFF3 mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,半夏泻心汤高剂量组和美沙拉嗪组NLRP3、AhR和P53蛋白表达显著降低(P<0.05),半夏泻心汤高剂量组TFF3 mRNA表达显著升高(P<0.01)。

表5 各组小鼠结肠组织NLRP3、AhR、TFF3和P53 mRNA比较

3.8 各组小鼠结肠组织 NLRP3、AhR、TFF3和MMP-9蛋白表达比较

如图6、表6所示,模型组小鼠的NLRP3、AhR、MMP-9蛋白表达较NC组明显升高(P<0.01),而TFF3蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,半夏泻心汤高剂量组能显著降低AhR(P<0.05)、NLRP3(P<0.01)和MMP-9(P<0.05)的蛋白表达,显著升高TFF3蛋白表达(P<0.01)。

表6 各组小鼠结肠NLRP3、AhR、TFF3和MMP-9 蛋白比较

4 讨论

结直肠癌以较高的死亡率和发病率以及巨大经济和社会负担成为全球研究热点,慢性炎症为致癌的关键因素参与肿瘤进展已成共识[16]。然CRC中“炎-癌”的分子机制尚未完全阐明。中药中的有效活性成分可以破坏CRC细胞的生存微环境,促进细胞凋亡,提高个体的免疫力,通过增强自身免疫系统清除病原体,从而达到抗癌的效果[17]。近年来CRC西医治疗飞速发展,但其治疗仍然存在短板,在随访期和终末期存在方案空缺,以改善疾病相关症状为疗效评价标准,以治人为核心理念的中医药在结直肠癌全程防治中具有重要作用[18]。

半夏泻心汤出自《伤寒论》,由半夏、黄连、黄芩、炙甘草、干姜、党参和大枣组成,全方辛开苦降,甘补益脾,调和胃肠[19]。全国首批名中医王晞星教授擅用辛开苦降法,以半夏泻心汤为基础方加减化裁,可以有效改善CRC患者腹泻症状,提高其生活质量[20]。课题组前期通过复制CRC荷瘤裸鼠模型,探讨半夏泻心汤抗CRC可能的机制研究[21],研究结果证明半夏泻心汤降低SW 480结肠癌裸鼠移植瘤结肠瘤体组织中核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid-2 related factor, Nrf)2和血红素氧合酶(heme oxygenase, HO)-1蛋白水平,升高瘤体组织中磷酸化C-Jun激酶的酶(phosphorylation c-Jun NH2-terminal Kinase,p-JNK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、p-p38和 p-P65的蛋白水平,上述效应随着剂量的增加而逐渐增强,揭示半夏泻心汤可能介导调控MAPK/NF-κB途径减轻CRC裸鼠体内氧化应激水平诱导结肠癌细胞凋亡。王晓燕等[22]通过体外实验研究表明半夏泻心汤不同时间点呈剂量-时间依赖性抑制人结肠癌HT-29 细胞增殖,考虑其发挥作用机制与调控磷脂酰肌醇3 激酶(phosphatidylinositol-3 kinase, PI3K) PI3K/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B, AKT)AKT/雷帕霉素机能靶标蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路下调mTOR蛋白表达,上调抑癌基因PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)蛋白表达水平有关。李良明[23]探究人结肠癌细胞SW620增殖活性的抑制率伴随半夏泻心汤剂量升高而逐渐增大;动物实验表明半夏泻心汤显著降低荷瘤裸鼠血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)水平,下调瘤体组织重血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR)2 mRNA表达阻断血管生成从而抑制CRC细胞增殖。临床及实验研究表明结直肠慢性炎症的反复损伤、修复、增生,引起基因突变导致癌变,整个病理过程呈现“炎症-不典型增生-癌变”[24]。冯娟等[25]采用腹腔注射二甲肼联合葡聚糖硫酸钠口服构建炎症性结肠癌ICR小鼠模型,研究结果显示半夏泻心汤可显著对抗结肠癌小数胸腺的萎缩,减少结肠内腺瘤形成,提示半夏泻心汤可阻断炎转癌的进程,但并未进一步探讨半夏泻心汤发挥作用的具体机制。AOM/DSS诱导结直肠癌小鼠模型作为理想模型符合CRC正常的病理发展过程。

在本研究中,整体动物层面随着造模剂诱导完成AOM/DSS组小鼠结肠长度明显缩短,成瘤数量较正常组明显增加,HE染色观察结肠组织肠黏膜结构明显消失或破坏,脾脏指数和胸腺指数升高明显,血清TNF-α、IL-6和IFN-γ水平显著升高,降低IL-10水平。关于炎症小体在肿瘤发展中的活性研究表明NLRP3在间充质样结肠癌细胞系中高表达,敲除结肠癌细胞中NLRP3基因,结肠癌细胞迁移和侵袭能力下降[11]。抑制AOM/DSS诱导小鼠结肠炎相关结直肠癌模型中巨噬细胞NLRP3炎症小体表达可明显阻断炎症性结直肠癌发展[26]。不断有证据表明内源性的AhR在CRC组织和肠癌细胞中表达水平明显上调[27-29]。NLRP3炎症小体在结肠炎相关肠癌的发生与防治中起到重要作用,但对半夏泻心汤通过AhR通路调控NLRP3途径的研究较少,针对此点探索将利于为CRC提供新的治疗思路及靶点。TFF是一种小的分泌肽具有三个环结构,包含高度保守的维持细胞功能的半胱氨酸二硫键基序蛋白质,稳定性强,常表达于肺、唾液腺和小肠[30]。胃肠道损伤后,TFF表达明显升高,研究表明主要由肠杯状细胞表达的TFF3在保护肠黏膜免受各种损伤方面起着重要作用,并通过促进细胞迁移、抑制凋亡和失巢凋亡途径有效的修复黏膜[31]。TFF3的表达在各种癌症(包括大肠癌)的发生和发展过程中增加[32],体外研究表明TFF3刺激CRC细胞的存活、增殖、侵袭和转移,并抑制其凋亡[33]。上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是一种综合组织起源、基质细胞成分和环境细胞因子的过程,涉及多方面的细胞生物学、基因的一系列变化表达,是上皮细胞通过基因突变转化为具有间质表型细胞的生物学过程,是CRC侵袭转移能力的核心枢纽[34]。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)被认为在CRC的生长和蔓延中起重要作用[35],MMP-9于癌前病变时被激活,与CRC分期密切相关,亦是CRC预后的生物学预测指标[36]。P53表达水平可作为结直肠癌术后患者的独立危险因素和预后因素,有助于判断肿瘤的恶性程度,进展和术后生存率[37]。

本研究中,与正常组相比,模型组小鼠结肠组织凋亡细胞数目减少,CRC小鼠结肠组织Ki67、NLRP3、AhR和MMP-9蛋白较正常组相比明显升高,TFF3蛋白明显降低。与正常组比较,NLRP3、AhR和P53mRNA 明显升高,TFF3 mRNA显著降低。应用半夏泻心汤干预CRC小鼠发现,半夏泻心汤可明显减轻CRC小鼠炎性反应和恶性增殖程度,促进肿瘤细胞的凋亡,改善肠黏膜屏障,阻断结直肠癌EMT发展。

综上所述,半夏泻心汤可减轻 AOM/DSS 诱导的CRC小鼠炎症反应,改善肠黏膜屏障功能,阻断AhR通路活化抑制NLRP3炎症小体生成可能是其治疗机制之一。但本研究未研究凋亡相关斑点蛋白(apoptosis-associated speck-like protein, ASC)和胱天蛋白酶(Caspase)-1的变化情况,且未使用NLRP3的抑制剂或AhR的激动剂进行佐证以支持目前研究结论。CRC发病机制复杂,基于微生态与CRC的表型相关性研究及半夏泻心汤干预能否改善肠道微生物增加肿瘤免疫还待于进一步探索;半夏泻心汤药效物质基础复杂,观察半夏泻心汤拆方后不同组分配伍对AOM/DSS 诱导的CRC小鼠代谢组学及肠道微生态的影响有助于为辛开苦降的代表方剂治疗结直肠癌提供一定的理论依据。