原发性舍格伦综合征患者血清ADAM17表达水平及其与病情程度的相关性研究

杨彩红，萧韵健，袁 飞，莫伟平

（东莞市人民医院a.风湿科；b.检验科，广东东莞 523126）

原发性舍格伦综合征（primary Sjogren syndrome，PSS）是全身性自身免疫疾病，机体会产生多种自身抗体以及外分泌腺淋巴结细胞高度浸润，导致分泌功能发生障碍，临床表现为干燥、疼痛和疲劳等症状[1-2]。PSS多发于绝经女性及老年人，可从轻度症状逐渐延伸成为严重全身性疾病，对于其治疗有很大困难[3]。因此，研究PSS病理机制，筛选可用于疾病诊断以及疗效评估的生物标记物十分重要。解聚素金属蛋白酶17（a disintegrin and metalloprotease 17，ADAM17）作为一种糖蛋白，其介导黏附因子、细胞以及生长因子等多种膜分子水解脱落，参与细胞信号转导，调节危害机体细胞发生发展过程以及转移途径[4]。研究发现，ADAM17在PSS炎症上皮中显著升高[5]，但其与病情程度关系尚不清楚。因此，本研究主要探讨ADAM17在PSS患者血清中的表达及其与病情程度关系，为临床治疗PSS患者提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取东莞市人民医院风湿科2022年2月1～10月1日收治的86例PSS患者（PSS组）。纳入标准：①PSS符合《原发性干燥综合征诊疗规范》[7]；②患者临床病理检测资料完整。排除标准：①并发其他血液系统疾病；②年龄＞80岁；③并发严重肝肾功能障碍者；④并发全身急慢性感染性疾病者；⑤并发原发性精神障碍者；⑥并发恶性肿瘤者。舍格伦综合征疾病活动指数（Sjogren’s syndrome disease activity index，SSDAI）评分[6]共包括11个检查项目和加权临床表现，评分为0～21分，根据SSDAI评分将PSS患者分为活动期（≥5分）45例（活动期组），其中男性17例，女性28例，平均年龄50.53±11.51岁，体质量指数（BMI）22.49±2.51kg/m2；吸烟24例，饮酒22例，高血压14例，糖尿病15例；稳定期（＜5分）41例（稳定期组），其中男性14例，女性27例，平均年龄50.39±11.48岁，BMI 22.37±2.46kg/m2；吸烟20例，饮酒21例，高血压12例，糖尿病11例。同时选取同期健康体检者43例作为对照组，其中男性19例，女性24例，平均年龄50.34±11.46岁，BMI 22.43±2.41kg/m2；吸烟21例，饮酒18例，高血压5例，糖尿病6例。三组的性别、年龄、BMI，吸烟、饮酒、高血压以及糖尿病之间的比较，差异均无统计学意义（χ2/F=0.919,0.003,0.026,0.240,0.809,1.757,4.559,均P＞0.05）。本研究所有患者均签署知情同意书，且经医院伦理委员会批准通过。

1.2 仪器与试剂 血清ADAM17试剂盒（武汉华美生物工程有限公司）；抗SSA抗体和抗SSB抗体试剂盒（广东固康生物科技有限公司）；肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6），白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10），白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）试剂盒（上海酶研生物科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 标本采集：所有研究对象均抽取清晨空腹静脉血5 ml，离心（4 000 r/min，10 min）提取上层血清，置于-80 ℃冰箱中储存待检。

1.3.2 观察指标检测：采用酶联免疫吸附法检测血清ADAM17水平，具体操作严格按照说明书进行。采用免疫双扩散法检测血清抗SSA抗体、抗SSB抗体；采用流式细胞法检测血清炎症因子TNF-α，IL-6，IL-10，IL-17的水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS 25.0分析本研究数据。计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；采用Logistic回归分析PSS的影响因素；采用Pearson法分析血清ADAM17与PSS患者生化指标的相关性，采用spearman分析血清ADAM17与SSDAI评分的相关性；采用多元线性回归分析影响SSDAI评分的因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组、稳定期组、活动期组间各项指标的比较 见表1。稳定期组、活动期组抗SSA抗体阳性率、抗SSB抗体阳性率、TNF-α，IL-6，IL-17，ADAM17水平高于对照组，IL-10水平低于对照组，差异具有统计学意义（χ2=4.288,28.586,16.824,53.030,t=5.019,13.425,7.525,12.624,19.169;33.081,13.899,19.398,4.860,14.943,均P＜0.05）；活动期组抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性率、TNF-α，IL-6，IL-17，ADAM17，SSDAI评分高于稳定期组，IL-10水平低于稳定期组，差异均具有统计学意义（χ2=11.764，13.936，t=8.186,4.862,13.295,5.108,9.846,14.901,6.099,均P＜0.05）。

表1 对照组、稳定期组、活动期组间各项指标的比较[n（%），（±s）]

表1 对照组、稳定期组、活动期组间各项指标的比较[n（%），（±s）]

项目对照组（n=43）稳定期组（n=41）活动期组（n=45）F/χ2/t值P值抗SSA抗体（阳性）8（18.60）16（39.02）34（75.56）29.676＜0.001抗SSB抗体（阳性）3（6.98）19（46.34）38（84.44）53.043＜0.001 TNF-α（μg/L）80.59±15.6596.62±19.74122.48±25.2646.005＜0.001 IL-6（μg/L）45.38±8.5366.74±15.3580.39±26.1740.338＜0.001 IL-10（μg/L）89.47±12.2659.82±9.7239.48±7.63275.910＜0.001 IL-17（μg/L）55.73±9.9286.35±14.3797.48±17.3799.970＜0.001 ADAM17（pg/ml）57.31±9.0568.13±14.3389.81±18.1962.363＜0.001 SSDAI评分（分）——4.35±0.4114.45±4.3214.901＜0.001

2.2 多因素Logistic回归分析发生PSS的影响因素以是否发生PSS为因变量（是=1，否=0），以ADAM17，抗SSA抗体、抗SSB抗体、TNF-α，IL-6，IL-10和IL-17为自变量，各自变量赋值见表2，进行多因素Logistic回归分析。多因素Logistic回归分析表明，高水平ADAM17，抗SSA抗体阳性、抗SSB抗体阳性、高水平TNF-α，高水平IL-6，低水平IL-10，高水平IL-17是影响PSS发生的危险因素（均P＜0.05）。见表3。

表2 各自变量赋值方式

表3 Logistic回归分析发生PSS的影响因素

2.3 PSS患者血清ADAM17水平与炎症指标、SSDAI评分的相关性 根据Pearson相关性分析得知，PSS患者血清ADAM17水平与TNF-α，IL-6，IL-17水平呈正相关（r=0.543，0.582，0.578，均P＜0.05），与IL-10水平呈负相关（r=-0.572，P＜0.05）。根据spearman相关性分析得知，血清ADAM17水平与SSDAI评分呈正相关（r=0.603，P＜0.05）。

2.5 影响SSDAI评分的因素（多元线性回归分析）以SSDAI评分为因变量（≥5=1，＜5=0），以ADAM17，抗SSA抗体、抗SSB抗体、TNF-α，IL-6，IL-10，IL-17为自变量，各自变量赋值见表4，进行多元线性回归分析。结果表明，高水平ADAM17，抗SSA抗体阳性、抗SSB抗体阳性、高水平TNF-α，高水平IL-6，低水平IL-10，高水平IL-17是影响SSDAI评分的危险因素（均P＜0.05）。见表5。

表4 各自变量赋值方式

表5 影响SSDAI评分的因素

3 讨论

原发性舍格伦综合征（PSS）是以侵犯外分泌腺体的系统性自身免疫病，病理上表现为外分泌腺体中大量淋巴细胞浸润内脏器官，导致多种器官和系统损伤，其中唾液腺和泪腺进行性淋巴细胞浸润会产生抗SSA抗体、抗SSB抗体或其他外分泌腺特异性抗体，导致外分泌腺分泌功能受损[8]。患者有干渴感、眼睛干涩、浑身乏力、有酸痛感[9]。PSS主要是T淋巴细胞亚群活化产生促炎细胞因子IL-6，TNF-α等，从而引发炎症环境[10]，体液因子、环境和遗传等因素都会导致炎症发生[11]。PSS发病率呈逐渐上升趋势，大多以女性和老年人为主要发病群体，因其主要发病机制尚不明确，在临床上患者症状多样化，所以会出现漏诊现象。因此，寻找敏感生物标记物，能够早期发现PSS并正确判断病情严重程度，采取合理治疗方案对于改善患者健康尤为关键。

解聚素金属蛋白酶17（ADAM17）被称为肿瘤坏死因子α转化酶（TACE），是ADAM家族一员，主要是由824个氨基酸组成，是具有多个结构域的I型跨膜蛋白，在细胞黏附、蛋白水解以及细胞信号转导途径中起着关键作用，广泛存在于哺乳动物中[12]。ADAM17底物包括多种细胞因子、黏附分子和其相关受体，因此，ADAM17在机体炎症反应和免疫系统中起着重要调节作用，主要通过剪切各种底物参与癌症和机体自身免疫性疾病[13]。ADAM17作为一种机体潜在标志物，在多种实体肿瘤如乳腺癌和卵巢癌中呈现高表达[14]。此外ADAM17在结直肠癌中阳性表达率显著高于正常组织，可能与结直肠癌侵袭有关，可作为结直肠癌患者临床诊断[15]。还有研究发现，miR-146a-5p靶向并负调控膜mIL-23 R的外胚层脱落酶ADAM17，从而减少膜mIL-23 R外胚层脱落，为治疗PSS提供一种新方法[16]。在本研究中，活动期组和稳定期组血清ADAM17水平均升高，说明ADAM17与PSS的发生发展密切相关。

检查抗SSA抗体和抗SSB抗体对于诊断PSS临床价值具有重要意义，因为该抗体具有高效特异性[17]。有研究发现引起PSS关键的因素还有炎症因子，如IL-10是抑制炎症反应因子，而TNF-α，IL-6，IL-17是促进炎症细胞因子，TNF-α也是反映疾病严重程度的标志，IL-6主要由机体中性粒细胞和单核巨噬细胞分泌，还会诱导合成其他炎症因子，IL-17会促进中性粒细胞和树突状细胞分泌，加快其成熟和趋化过程，可以促进病情发展[18]。在本研究中，稳定期组和活动期组抗SSA抗体阳性率、抗SSB抗体阳性率、TNF-α，IL-6，IL-17表达均升高，稳定期组和活动期组IL-10表达水平降低，说明PSS患者免疫功能明显下降，加速病情发展。ADAM17可以水解TNF-α，IL-6等膜蛋白细胞外的功能区并导致脱落，促使配体的形成，通过旁分泌或自分泌从而结合相应的受体，协调NFkB，Notch信号通路、EGFR-PI3K-Akt途径等转移信号，参与炎症反应、细胞增殖、血管生成等过程[19]。根据Pearson相关性分析得知，PSS患者血清ADAM17水平与TNF-α，IL-6，IL-17表达水平呈正相关，与IL-10表达水平呈负相关。说明ADAM17对机体免疫应答起着正向调控作用。

有研究报道，SSDAI评分越高，病变程度越高，病情越严重[20]。根据相关性分析得知血清ADAM17水平与SSDAI评分呈正相关，说明血清ADAM17与患者病情程度有关，Logistic回归分析得知，高水平ADAM17，抗SSA抗体阳性、抗SSB抗体阳性、TNF-α，IL-6，IL-17以及低水平IL-10是影响PSS发生的危险因素。多元线性回归分析得知，高水平ADAM17，抗SSA抗体阳性、抗SSB抗体阳性、高水平TNF-α，高水平IL-6，低水平IL-10，高水平IL-17是影响SSDAI评分的危险因素，说明血清ADAM17水平与PSS的病情严重程度密切相关，临床检测血清ADAM17可评估患者病情严重程度。

综上所述，PSS患者血清ADAM17水平显著升高，其与患者的病情严重程度相关，其表达水平随着病情严重程度增加而增加。本研究尚存在局限性，如未探究ADAM17在PSS中的具体调控机制，样本量不足等，后续将会增加细胞和动物实验，扩大样本量对本研究进行验证。