四川西部地区表观健康藏族成年人群血清同型半胱氨酸参考区间的建立

姜灵路，苟甜甜（通用医疗三六三医院检验科，成都 610041）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是蛋氨酸和半胱氨酸代谢的重要中间产物，随着我国经济发展，人民生活质量改善，各类代谢性疾病增多，导致Hcy无法降解而在体内聚集，这引起了临床对Hcy水平的关注[1]。Hcy水平受某些药物[2]、维生素及叶酸水平、饮食、性别年龄等因素影响[3]，导致不同人群的Hcy水平不同。目前我国各实验室多以厂家提供的试剂说明书为参考区间，尚无统一标准[4]，虽然已有部分地区建立了适合当地的Hcy参考区间，但缺乏针对四川西部地区藏族人群Hcy参考区间的研究。该地区由于地理环境特殊，居民生活、饮食习惯与现有的研究对象存在差异，这些差异是否会影响该地区Hcy水平未见报道，故本研究旨在通过分析该地区健康藏族人群的Hcy水平，探讨其与性别、年龄的关系，建立适合该人群的参考区间，为临床相关疾病的诊断及预后提供依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 经医院伦理委员会批准，选取2022年1～12月在三六三医院体检的表观健康藏族成年人2 668例为研究对象。其中男性1 326例，女性1 342例，年龄18～90岁。纳入标准：①四川西部地区居住时间≥1年；②年龄≥18岁；③藏族；④体检筛查合格的健康者。排除标准：①有明确恶性肿瘤及心脑血管疾病、严重肝肾疾病及静脉血栓疾病、全身炎症性疾病、糖尿病和高血压病史者；②妊娠或哺乳期女性；③半年内有过维生素B6，叶酸等影响Hcy代谢的药物使用史；④半年内有手术史或输血史；⑤腹部彩超等影像学异常者。

1.2 仪器与试剂 贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪，浙江夸克Hcy试剂盒（酶循环法），使用配套校准品。

1.3 方法 采集受试者空腹肘前静脉血3ml，3 000r/min离心7min，去掉脂血、严重黄疸和溶血标本，在室内质控和室间质评在控的前提下，3h内完成Hcy的检测。因Hcy低浓度结果无明确临床意义，故以P95作为单侧95%CI计算参考范围，按照美国临床和实验室标准协会（clinical and laboratory standards institute，CLSI）颁布的EP28-A3c文件要求，以D/R法去除离群值后，计算不同年龄段的参考区间。

1.4 统计学分析 使用SPSS24.0统计软件进行数据处理。选择Kolmogorov-Smirnov检验进行正态性检验，正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验进行两组间比较，单因素方差分析进行多组间比较。非正态分布的计量资料以中位数(M)和四分位距(IQR)表示，采用Mann-WhitneyU检验进行两组间比较，Kruskal-WallisH检验进行多组间比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正态性检验及不同性别间Hcy水平比较 见表1。经正态性检验可知，Hcy数据呈正偏态分布(S=0.946，K=1.55)，各个年龄段成年男性Hcy水平均高于女性（U=3 759.00～32 576.00），且差异有统计学意义（均P＜0.05）。

表1 不同性别间Hcy水平比较 [M（IQR）μmol/L]

2.2 不同年龄组间Hcy水平比较 见表2，图1。男性Hcy水平在60～70岁和＞70岁组之间，差异有统计学意义（F＝5.571，P＜0.05），其他年龄组间差异无统计学意义（F=2.180,P=0.284）。女性Hcy水平在30～40岁，40～50岁间比较，差异无统计学意义（F=13.116,P=0.171），其他年龄组之间，差异有统计学意义（F＝26.388，P＜0.05）。无论男性还是女性，Hcy水平在50岁以后升高比较明显。

图1 Hcy水平随年龄变化趋势

表2 不同年龄段Hcy参考区间比较

2.3 Hcy参考区间建立及验证 将差异无统计学意义的年龄组数据合并后，得到不同性别及不同年龄组间的参考区间见表3。根据我国2012年发布的行业标准要求进行参考区间验证[5]，选择2023年1～3月在四川大学华西医院西藏成办分院体检的表观健康藏族男性60例（18～60，60～70和＞70岁年龄组各20例)，女性100例（18～30，30～50，50～60，60～70和＞70岁年龄组各20例）进行Hcy的检测。各年龄组检测结果超出参考区间的均少于2名，通过验证。

表3 四川西部地区表观健康藏族成年人群Hcy参考区间[M（IQR），μmol/L]

3 讨论

同型半胱氨酸（Hcy）是蛋白质代谢过程中的降解产物，游离状态很少，大部分与蛋白质以结合物形式存在，统称为总Hcy[6]。一般来说，人体内的Hcy含量很低，当机体新陈代谢出现障碍时，Hcy因无法降解而在体内聚集，造成血液中Hcy含量增加。高Hcy会损伤血管壁，造成动脉粥样硬化，导致颈动脉狭窄及斑块形成，与高血压和心脑血管疾病有密切关系[1,7]。目前尚无Hcy参考区间的统一标准，且其水平易受性别、年龄、饮食、营养、环境及遗传基因的影响，具有区域性差异，因此，各实验室应建立适宜本地区的Hcy参考值范围。

我们研究发现，各个年龄段的成年男性Hcy水平均高于女性（表1，图1）。这与其他地区[8-14]的研究结果一致，这可能与Hcy代谢路径有关。正常情况下，Hcy在酶、维生素B和叶酸的作用下参与硫基和甲基的转化，并降解为半胱氨酸，转变为部分蛋白质[15]。当叶酸和维生素B缺乏时，Hcy合成甲硫氨酸受阻，其在体内的水平升高，Hcy浓度与叶酸、维生素B的浓度呈负相关[16]。有研究表明，健康成年女性叶酸及维生素浓度高于男性，且部分男性吸烟、喝酒等不良生活习惯可能影响Hcy代谢，这可能导致同一年龄段男性Hcy水平高于女性[17]。

本研究显示，四川西部地区藏族成人无论男女，Hcy水平总体随着年龄的增加而升高，且在50岁以后升高较明显（表2，图1），这与其他地区[8-14]的研究结果一致。这可能是因为随着年龄增长，肝肾功能逐渐下降，蛋氨酸循环异常，Hcy代谢酶活性下降，Hcy降解减少所致。同时，中老年人肠道吸收功能不佳，食欲降低造成营养缺乏，使体内叶酸及维生素B含量下降，从而导致Hcy浓度增加[18]。因此，有必要建立不同年龄段的Hcy参考区间。本研究还显示，四川西部地区表观健康藏族成年人群Hcy参考区间较四川德阳[11]地区偏低，这可能与四川西部地区高海拔和藏族人群高蛋白饮食为主有关，较新的Meta分析研究显示，高海拔地区人群Hcy水平较低海拔地区低[19]，且富含维生素C、高纤维、高蛋白饮食习惯人群Hcy水平通常较低[20]。

本研究使用的试剂说明书提供的Hcy参考区间是0～15μmol/L，但本研究结果显示男性参考区间均高于15μmol/L，女性除70岁以上人群，其他年龄组均低于15μmol/L，且所得结果均通过验证，由此可知不应完全根据试剂说明书建立参考区间。但本研究还存在一些局限性：①本研究暂未能覆盖儿童等特殊人群，因此未建立四川西部地区藏族儿童的Hcy参考区间；②本研究暂未纳入四川西部地区汉族人群，因此未将四川西部藏族人群与汉族人群水平进行比较。后续我们将扩大样本量和年龄范围，区分研究对象的民族，深度分析四川不同地区、不同民族人群的Hcy水平。

总之，四川西部地区表观健康藏族成年人群Hcy水平受性别、年龄和地域等因素影响，本研究建立了适宜该人群的Hcy参考区间，以期为心脑血管疾病的辅助诊断、预后评估等提供更为精准的实验室数据。