自制新型冠状病毒抗体检测质控品及其临床应用评价

丁玮洁，夷 峥，王雪亮，沈兴中，黄维纲（1.上海市临床检验中心，上海 200126，2.上海市实验医学研究院，上海 200126；.中国测试技术研究院，成都 610021）

新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）是一种由新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome corona virus 2，SARS-CoV-2）引起的急性呼吸道传染病，作为急性呼吸道性传染病已纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病[1]。人体在感染病毒后，通常会产生特异性抗体IgM和IgG，对其的检测方法具有稳定、便捷、快速的优点，适用于大规模筛查和病程监测[2-3]。SARS-CoV-2基因组至少编码4种结构蛋白：棘突蛋白（spike protein,S蛋白）、小包膜糖蛋白（envelope protein,E蛋白）、膜糖蛋白（membrance protein,M蛋白）以及核衣壳蛋白（nucleocapsid protein,N蛋白）。N蛋白和S蛋白是SARS-CoV-2检测的主要抗原位点[4]。截止2023年2月，国家药品监督管理局共批准23个生产厂家的34个SARS-CoV-2抗体检测试剂盒。采用的检测方法主要是胶体金法和化学发光法。在这23个生产厂家中，仅有4个厂家的试剂盒中包含有各自检测系统适用的SARS-CoV-2抗体检测质控品。对于这四个厂家质控品在其它系统中的适用性，并无研究文献报道。本研究的目的在于制备一种SARS-CoV-2抗体检测质控品，其可适用于各主流的化学发光和胶体金检测系统，且性能指标满足临床日常质量控制的要求。

文化和旅游是相互协调融合，密不可分的，文化结合旅游，使文化充满活力，旅游充满魅力。充分挖掘修水县特有的红色文化游、花灯文化游、山歌文化游、剪纸文化游，把特有的文化传承融入当地的旅游发展中去，促进当地文化产业与旅游的融合发展，推动了文化旅游的建设，形成修水特有的文化标识。

1 材料和方法

1.1 质控物 SARS-CoV-2抗体检测质控品和调查品按检测靶标抗体分为：SARS-CoV-2 IgM抗体、SARS-CoV-2 IgG抗体和SARS-CoV-2总抗体。分别加入等量抗SARS-CoV-2 NP单克隆抗体和抗SARS-CoV-2 刺突单克隆抗体的IgG或（和）IgM阳性质控物，用PBS（pH=7.4）缓冲液按比例稀释来制备相关质控品和调查品。

抗SARS-CoV-2 NP单克隆抗体（IgG和IgM阳性质控）和抗SARS-CoV-2 NP 刺突单克隆抗体（IgG和IgM 阳性质控）购自近岸蛋白质科技有限公司。

1.2 仪器与试剂 本研究所用SARS-CoV-2抗体检测试剂盒和检测系统详见表1。

1.3 方法

1.3.1 适用性评价：取3支质控品，每支重复检测2次。检测结果符合率为100%，则表明质控品适用于该检测系统。

1.3.2 均匀性评价

在1928年的“文学革命”论争中，后期创造社要重新定义文学的本质与无产阶级文学性质。辛克莱的“一切艺术皆是宣传”的文艺理论正合他们意，于是他们片面截取辛克莱的文艺观，并进行大肆宣传。李初梨在《怎样地建设革命文学》提出：“一切的艺术，都是宣传。”“无产阶级文学是：未完成他主体阶级的历史使命，不是观照的——表现的态度，而以无产阶级的阶级意识，产生出来的一种斗争的文学。”[18]忻启介在《无产阶级艺术论》中甚至宣称：“无产阶级的艺术，是有为无产阶级解放的宣传煽动的效果。宣传煽动的效果愈大，那么，这无产阶级艺术的价值愈高。”[19]此外，创造社的其他成员和太阳社成员也在大力宣扬文学的宣传性与阶级性。

2.4 调查品回报情况

2.3.2 反复冻融稳定性：质控品反复冻融0～15次的稳定性检验结果见表3。与第0次检出数据相比，检验结果的均P＞ 0.05，表明质控品反复冻融15次的差异无统计学意义，t值均小于t临界值[t0.05（n1+n2-2）t0.05（10）=2.228]，稳定性符合要求。

1.3.2.2 化学发光检测系统：取10支质控品，每支检测2次。参照CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》[5]中关于均匀性的单因素方差分析法评价。根据所得结果计算F值。给定显著性水平α=0.05，若计算的F值＜F临界值（α=0.05）[F0.05（9，10）=3.02]，则表明样品是均匀的。

将数据结果录入SPSS22.0数据库处理，以χ2检验计数资料，以例数百分比形式表示，以t检验计量资料，以±s形式表示，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

1.3.3 稳定性评价

1.3.3.1 开瓶稳定性：取3支质控品，分别在0，1，2，3，5，7，10，14天检测，每支检测2次，每次检测结束后放2～8℃保存。

1.3.3.2 反复冻融稳定性：取3支质控品，分别反复冻融0，3，7，15次的质控品，每支检测2次。

1.3.4.2 结果汇总：检测结果按阴性和阳性进行结果上报，以结果与“预期结果”的符合率性汇总。采用化学发光法检测的参评实验室，需同时上报检测结果的“S/Co”值，否则认为回报结果无效。

1.3.3.4 稳定性判断依据：参照CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》[5]关于稳定性的t检验法（二个平均值之间的一致性）评价。根据所得结果计算t值。给定显著性水平α=0.05，若计算的t值＜t临界值t0.05（n1+n2-2）t0.05（10）=2.228，则表明样品是稳定的。

2.2.1 胶体金检测系统：IgM抗体质控品、IgG抗体质控品、总抗体质控品均适用于胶体金检测系统（D），结果显示SARS-CoV-2抗体检测质控品在胶体金检测系统中的均匀性符合相关要求。

1.3.4 调查品下发及结果汇总

1.4 统计学分析 计量数据采用均数 ± 标准差（±s）表示，采用Microsoft Excel 2010软件进行统计分析。计数资料以率（%）表示。以P＜0.05为差异有统计学意义。

1.3.3.3 长期稳定性：在-20℃冻存质控品，在0，7，14，28，60，90，120，150，180天，各取3支质控品，每支检测2次。

综上所述，医护人员需要密切关注气管插管患者的病情，给与科学合理精心的护理，注意基础护理、气管插管之后的湿化，感染的预防，以及各种并发症的护理等等。同时需要关注患者的饮食，根据患者情况给与鼻饲、喂养和自理等，一切依照不同患者的情况选择不同的方案。应该遵循从流食到普食的原则。患者的心理状态作为新时代的医护人员液应关注，加强同患者的沟通，对于患者和亲属可给与一定适度的相关知识教育，对于其疑问应耐心科学的解答以及建立随访制度。如此多方面综合的给与患者关怀，减轻患者痛苦，减轻家庭社会负担，提高其生存率以及生存质量。

1.3.4.1 下发：随上海市临床检验中心2021年上半年度室间质量评价样品一同下发。

2 结果

2.1 适用性结果 IgM抗体质控品适用的检测系统有B，D，E，H，K，M，O和Q。IgG抗体质控品适用的检测系统有B，C，D，E，G，J，L，N和P。总抗体质控品适用的检测系统有A，D，F和I。SARS-CoV-2抗体检测质控品在上述检测系统中的结果符合率均为100%。

首先，“审执分离”已经逐渐成为民事诉讼理论界和实践层面的共识，“审判的归审判、执行的归执行”是审执分离改革的基本要求。[11]《民事诉讼法》及其司法解释对执行依据明确作出了具体的规范，提出了明确的要求，这实际上是对人民法院裁判文书的具体要求，而执行依据可执行性的欠缺属于审判权没有用尽，并不在执行权的管辖范围之内，依然属于审判权的范畴之内。因此，当执行依据出现不明确的情形时，仍然需要启动审判权，在审判权的权限范围之内加以解决。

2.2 均匀性结果

传统教学模式的出发点，在教学中忽视了学生的主体地位，没有很好地解决“学生如何去学”这一问题，导致学生在被动学完课程后仍不能熟练地综合应用课程的内容、原理和方法。学生主动性不足，必然导致学习效率不高。

2.2.2 化学发光检测系统：采用检测系统J评价IgM抗体质控品的均匀性，检测结果（S/Co）为397.67±23.83（F=0.77，P=0.74）。采用检测系统K评价IgG抗体质控品的均匀性，检测结果（S/Co）为2.80±0.23（F=0.38，P=0.76）。采用检测系统I评价总抗体质控品的均匀性，检测结果（S/Co）为36.09±0.50（F=0.55，P=0.91）。三种SARS-CoV-2抗体检质控品的P值均大于0.05，表明其检测结果的样本内和样本间的差异无统计学意义，F值均小于F临界值（F0.05（9，10）=3.02），均匀性符合要求。

另外，在地表圈定了1条石墨低品位矿体(M6)，位于II号矿化带南部，矿体呈脉状EW向展布，推测长度为196m，真厚度为4.69m，向西尖灭，固定碳品位为5.34%。

2.3 稳定性结果

2.3.1 开瓶稳定性：质控品开瓶14天内的稳定性检验结果见表2。与第0天检出数据相比，检验结果均P＞ 0.05，表明质控品开瓶14天内的差异无统计学意义，t值均小于t临界值t0.05（n1+n2-2）t0.05（10）=2.228，稳定性符合要求。

表2 SARS-CoV-2抗体检测质控品开瓶稳定性检验结果（±s）

开瓶时间（天）IgM抗体质控品IgG抗体质控品检验结果t值P值检验结果t值P值0 396.726±25.394//2.836±0.228//1 411.132±14.2741.2110.252.617±0.1801.8430.10 2 380.594±22.6461.1610.272.774±0.1600.5380.60 3 386.793±19.7350.7560.472.856±0.1420.1820.86 5 388.889±23.9210.5500.592.758±0.1580.6810.51 7 385.006±11.5241.0291.002.922±0.2300.6551.00 10385.016±22.1030.8520.412.662±0.1271.6310.13 14378.355±2.8951.7610.272.638±0.0861.9850.14

引起漩涡的因素复杂多样，但在进水流道前池水面产生的漩涡为水面漩涡，水面漩涡类型划分见文献[10]。考虑漩涡产生的最恶劣条件，本文对最低运行水位时的最大流量工况进行了模型漩涡测试。测试结果如图5所示。

表3 SARS-CoV-2抗体检测反复冻融稳定性检验结果（±s）

表3 SARS-CoV-2抗体检测反复冻融稳定性检验结果（±s）

IgM抗体质控品IgG抗体质控品检验结果t值P值检验结果t值P值0 396.726±25.394//2.674±0.121//3 396.472±11.3780.0220.982.625±0.0690.8600.41 7 395.011±20.7290.1280.902.634±0.3110.2960.77 15382.562±16.5931.1440.282.687±0.2270.1220.90反复冻融次数（次）

2.3.3 长期稳定性：质控品保存180天内的稳定性检验结果见表4。与第0天检出数据相比，检验结果的均P＞ 0.05，表明质控品长期保存180天的差异无统计学意义，t值均小于t临界值t0.05（n1+n2-2）t0.05（10）=2.228，稳定性符合要求。

表4 SARS-CoV-2抗体检测质控品长期稳定性检验结果（±s）

表4 SARS-CoV-2抗体检测质控品长期稳定性检验结果（±s）

IgM抗体质控品IgG抗体质控品检验结果t值P值检验结果t值P值0 385.482±5.741//2.836±0.228//7 378.641±10.1431.4380.282.632±0.1731.7420.11 14381.415±6.5171.1470.382.624±0.1891.7480.11 28392.440±7.7341.7690.232.999±0.1111.5810.14 60377.847±9.8351.6420.252.956±0.0921.1960.26 90389.447±15.0870.6020.642.643±0.1181.8340.12 120376.912±17.8451.1200.402.649±0.0511.9500.15 150369.892±17.8451.2880.332.681±0.1781.3080.34 180372.661±26.0481.1770.372.838±0.0710.0240.98保存天数（天）

1.3.2.1 胶体金检测系统：取10支质控品，每支检测1次。检测结果符合率为100%，则表明样品均匀性符合要求。

2.4.1 参评实验室总体回报情况：按检测方法分别评价，胶体金检测系统有85家回报IgM和IgG抗体调查品结果，13家回报总抗体调查品结果。化学发光检测系统有12家回报IgM和IgG抗体调查品结果，10家回报总抗体调查品结果。在上述回报结果中，有8家同时回报IgM和IgG调查品在化学发光和胶体金检测系统中的结果，见表5。

表5 IgM抗体、IgG抗体调查品在胶体金和化学发光检测系统中的检验结果

2.4.2 结果评价与分析：IgM抗体调查品：胶体金检测系统中有B（44），D（7），E（32）和其它（2）共计4个检测系统，其中84家（98.82%）检测结果与预期结果一致，一家（检测系统：其它）检测结果与预期不一致。化学发光检测系统中有L（3），N（3），J（4），P（1）和其它（1）共计5个检测系统，其中10家（83.33%）检测结果与预期结果一致，2家（检测系统N）检测结果与预期不一致。

IgG抗体调查品：在胶体金检测系统中有B（44），D（7），E（32）和其它（2）共计4个检测系统，其中63家（74.12%）检测结果与预期结果一致，22家（检测系统B）检测结果与预期不一致。在化学发光检测系统中，有M（3），O（3），K（4），Q（1）和其它（1）共计5个检测系统，其中9家（75.00%）检测结果与预期结果一致，3家检测结果与预期不一致，分别为检测系统O（1家）和检测系统K（2家）。

总抗体调查品：在胶体金检测系统中，有A（8），B（2），F（2）和其他（1）共计4个检测系统。其中5家（46.15%）检测结果与预期结果一致。8家与检测结果不一致，分别为检测系统A（7家）和检测系统B（1家）。在化学发光检测系统中，有3家未上报化学发光值（S/CO值），结果回报无效。7家（100%，检测系统I）检测结果与预期结果一致。

IgM抗体调查品在化学发光检测系统N中有66.7%（2/3）的预期结果不符合率。IgG抗体调查品在胶体金检测系统B中有50%（22/44）的预期结果不符合率。总抗体调查品在胶体金检测系统A中有87.5%（7/8）的预期结果不符合率。为排除由人员操作、调查品本身、实验室环境造成的检测误差，对比同一实验室对同一调查品在不同检测系统中的回报结果。在回报结果中，同一参评实验室的同一调查品在不同检测系统中的检出结果不一致，也与预期结果不符。调查品在个别检测系统中出现“假阴性”的情况。进一步观察其在化学发光检测系统中的“S/Co值”，该数值小于1但接近于1，表明调查品浓度接近于该检测系统的最低检出限。因此，认为检测结果与预期结果的不一致与检测系统本身的最低检出限、灵敏度有关。

3 讨论

检测特异性抗体可明确患者是否“近期或既往感染过SARS-CoV-2”，有助于核酸检测阴性但临床上疑似患者的确诊。IgM抗体检测阳性往往表明患者最近暴露于SARS-CoV-2，而IgG抗体检测阳性表明患者2周前可能接触过病毒[6-8]。因此，自《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》起将抗体检测结果纳入确诊病例的诊断标准以及疑似病例的排除标准[9]。大量研究表明在新冠肺炎诊疗过程中，抗体检测可辅助弥补核酸检测的不足[10-11]。利用抗体检测可快速地对疑似患者进行筛查，且其检测结果可以作为推测患者病毒感染过程信息的依据[12]。因此，本研究旨在制备一种适用于各主流SARS-CoV-2抗体检测系统的质控品，其性能指标应符合临床质量控制要求。

3.产品品质逐步提升。全市水产品养殖无公害产地认定面积近万亩、产品认证16个，有机食品认证1个，注册“雁荡湖”“楚泉”“神鳌”牌产品商标3个。创建省、部级健康养殖示范场达到10家，创建宜昌市水产品标准化养殖示范基地12家。

胶体金法和化学发光法是目前主流的SARSCoV-2抗体检测方法。胶体金法具有无需任何仪器设备直接进行检测并观察结果的优点，化学发光法具有高通量、自动化、可定量、灵敏度高等优点。闫琦等[13]认为胶体金法和化学发光法两种检测方法具有一致性，均可用于SARS-CoV-2核酸检测阴性疑似病例的补充检查。稳定性是评价质控物的关键指标之一。本研究中结果证实自制质控品在-20℃的条件下，可稳定保存180天，开瓶后可在2～8℃稳定保存14天，且可反复冻融15次，这表明其稳定性良好。依据SARS-CoV-2结构特性，在质控品制备时分别加入S型和N型蛋白抗体，以提高其检出率。LIU等[14]评估了两种基于不同抗原N蛋白、S蛋白的ELISA试剂盒COVID-19的检测结果，结果发现214例确诊新冠肺炎患者使用S蛋白抗原的试剂盒阳性率均高于N蛋白，建议联合二者检测提高检出率。本研究结果显示自制质控品适用性良好，可通用于17种SARS-CoV-2抗体检测系统。此外，其均匀性也较为良好。以上结果均表明自制质控品性能指标符合临床质量控制要求。

对于定性项目而言，其阳性质控物一般采用弱阳性标本，阴性质控物一般采用不含被测物质的生物材料或阴性标本，以监测试剂灵敏度和特异度。在开展SARS-CoV-2抗体检测项目时，选择合适的质控品浓度就显得尤为重要，特别是在弱阳质控品浓度的选择上。本研究采用稀释SARS-CoV-2抗体的方法制备SARS-CoV-2抗体检测调查品，用以评价各检测系统的自身性能指标，寻找合适的质控品浓度。回报结果显示无“假阳性”情况出现，在个别检测系统中出现了“假阴性”问题。相关文献报道包被抗原[15-16]、体外重组蛋白表达系统[17]、检测方法设计原理（双抗原夹心法、间接法、捕获法等）[18]都会对检测试剂盒的灵敏度、特异度产生影响。此外，实际检测结果与预期结果不符还可能与调查品的保存和运输、人员操作和仪器校准等因素有关[19]。

质量控制是保证检测结果准确可比的必要手段，质控品是其中一个重要环节[20]。有效的质量控制活动能确保检测结果的可靠性，将SARS-CoV-2抗体检测质控品应用于室内质量控制和室间质量评价中，有利于得到准确且可靠的检测结果，可有效提高实验室SARS-CoV-2抗体检测水平。今后我们还将通过加入蛋白稳定剂和防腐剂等来实现进一步延长SARS-CoV-2抗体检测质控品的稳定性的目的，从而更好地应用于相关项目的质量保证中。此外，本研究也为其它抗体类检测项目的质控品制备提供了参考借鉴，预期将在相关项目的质量保证中发挥重要作用。

初夏，初三毕业班开家长会，张盈盈着一身被她改良的薄料紧身唐装昂扬地走进教室，那衣服布料上花团锦簇，分外耀眼。蒲琳的座位在教室中间，张盈盈往那儿一坐，周围都成了绿叶。蒲琳都能听到同学们嘁嘁喳喳的议论，和那些绿叶们心里的嫉妒和嘲讽。