外阴鳞癌组织中DCTN2和HOXB7水平表达及与预后的价值研究

高 翔，刘 萨，文亚兰，黄仲禄

（1.江油市人民医院妇产科，四川江油 621700；2.眉山市妇幼保健院妇科，四川眉山 620000）

外阴鳞癌是一类临床少见的妇科癌症，主要在60～80岁的绝经女性群体中发病，在女性生殖道癌症中的占比约为3%～5%，在外阴肿瘤中的占比高达90%以上，严重威胁着中老年女性的生命健康[1-2]。目前外阴鳞癌的发病原因与机制尚不明确，患者难以得到精准化、个体化的临床治疗，长期生存情况并不乐观，故探讨评估外阴鳞癌患者长期生存预后的影响因素并据此实施及早、有效的治疗措施非常必要[3]。动力蛋白激活蛋白(dynactin，DCTN)是由DCTN基因编码合成的微管马达蛋白，在肿瘤发生、进展、转移等过程中发挥着重要的作用[4]。DCTN2是其中的一个重要成员，其表达水平与皮肤恶性黑色素瘤患者的临床病理特征息息相关[5]。同源异型盒基因B7(homeobox gene 7，HOXB7)是一种转录因子，可通过与基因启动子结合调节基因的转录，参与癌细胞增殖、迁徙、浸润等历程[6]，在前列腺癌、结直肠癌等癌症中均异常表达[7-8]。但DCTN2和HOXB7的表达水平与外阴鳞癌患者的长期生存情况是否相关却鲜有报道。鉴于此，本研究特检测了外阴鳞癌患者癌组织DCTN2与HOXB7表达情况，并分析了其与外阴鳞癌患者五年生存情况的关系，以期为外阴鳞癌患者的长期预后评估与改善提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 经医院伦理委员会审批，选取江油市人民医院2008年1月～2017年12月收治的132例外阴鳞癌患者为研究对象，收集手术过程中切除的患者癌组织与癌旁健康组织(距离癌组织＞3cm)。年龄31～82 (62.25±12.19)岁；肿瘤直径≤2cm者28例，＞2cm者104例；FIGO分期：I期59例，II期22例，III期42例，IV期9例；有淋巴结转移51例，无淋巴结转移81例；分化程度：中高分化117例，低分化15例。纳入标准：①均满足《2017 NCCN外阴鳞癌临床实践指南(第一版)》[9]中外阴鳞癌的诊断标准，且均经术后病理检查确诊；②患者均为原发性外阴鳞癌，且无癌症发病史；③患者均进行手术治疗，且在手术治疗前未进行放化疗相关治疗；④临床资料完整；⑤患者或家属对本研究知情同意。排除标准：①未接受手术治疗的患者；②并发其他部位恶性肿瘤患者；③处于孕期或者哺乳期的女性；④并发严重的自身免疫疾病；⑤并发严重的心、肝、肾等脏器功能不全者。

1.2 仪器与试剂 免疫组织化学试剂盒(上海雅吉生物科技有限公司)，4ml/dl的多聚甲醛溶液[金克隆(北京)生物技术有限公司]，3ml/dl双氧水(广东恒健制药有限公司)，生物显微镜(绍兴万力仪器有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 组织样品收集与DCTN2，HOXB7表达检测：采用免疫组织化学法检测组织中DCTN2，HOXB7表达。收集术中切除的外阴鳞癌患者癌组织和癌旁健康组织并置于4ml/dl的多聚甲醛溶液中固定；使用石蜡将固定好的组织样品包覆，并制成厚度5μm切片，脱蜡、水化；加入3ml/dl双氧水溶液，37℃孵育20min阻断过氧化物酶，然后在高压锅中抗原修复，然后加入封闭液37℃封闭0.5h；加入一抗，4℃恒温箱孵育过夜，用磷酸缓冲液(PBS)冲洗干净；加入二抗37℃孵育0.5h，PBS冲洗干净；然后使用二氨基联苯胺(DAB)显色，采用苏木精复染20s，水洗干净，脱水、透明、封片，生物显微镜下观察。检测过程严格按照试剂盒说明书进行。

1.3.2 免疫组织化学法结果分析：DCTN2与HOXB7均定位于细胞浆内，阳性信号为黄色或棕褐色颗粒。显色强度评分：未着色记0分，淡黄色记1分，棕黄色记2分，棕褐色记3分。着色百分比评分：阳性细胞占比≤5%记0分；6%～25%记1分；26%～50%记2分；51%～75%记3分，≥76%记4分，以显色强度评分与着色百分比评分的乘积记为总积分，总积分≤4为阴性表达，总积分＞4为阳性表达。此过程由两位病理医生通过双盲法测评。

1.3.3 随访：通过定期的门诊复检或电话随访外阴鳞癌患者术后五年生存情况，截止日期为2022年12月30日，随访结束时统计患者的生存情况。

1.4 统计学分析 统计学数据采用SPSS25.0软件分析；计数资料以n(%)表示，行χ2检验；通过Kaplan-Meier生存曲线分析外阴鳞癌患者癌组织DCTN2,HOXB7表达与五年生存率的关系；采用COX回归分析影响外阴鳞癌患者五年生存情况的危险因素，P＜0.05为差异有统计学意义。

图1 外阴鳞癌组织与癌旁健康组织DCTN2和HOXB7表达(50μm)

2 结果

2.1 外阴鳞癌组织与癌旁健康组织DCTN2，HOXB7表达水平比较 见图1。免疫组织化学法分析结果表明，外阴鳞癌组织中DCTN2阳性表达率低于癌旁健康组织中DCTN2阳性表达率[31.06%（41/132） vs 71.21%（94/132）]，而外阴鳞癌组织中HOXB7 阳性表达率高于癌旁健康组织中HOXB7阳性表达率[65.91%（87/132） vs 37.12%（49/132）]，差异具有统计学意义(χ2=42.583，21.899，均P＜0.05)。

2.2 外阴鳞癌组织DCTN2，HOXB7表达与临床病理特征的关系 见表2。外阴鳞癌患者癌组织DCTN2，HOXB7表达与患者年龄、肿瘤直径以及病灶位置均无关(均P＞0.05)，但与FIGO分期、淋巴结是否转移、淋巴结转移数量、分化程度和腹股沟淋巴结情况均相关(均P＜0.05)。

表2 外阴鳞癌DCTN2，HOXB7表达水平与临床病理特征的关系［n(%)］

2.3 外阴鳞癌患者癌组织DCTN2,HOXB7表达与五年生存情况的关系 见图2。132例外阴鳞癌患者五年后共有92例生存，40例死亡，五年生存率为69.70%(92/132)。其中DCTN2阳性表达患者生存率高于阴性表达患者(χ2=14.878，P＜0.001)；HOXB7阳性表达患者的生存率则低于阴性表达患者(χ2=14.824，P＜0.001)。

图2 癌组织DCTN2，HOXB7表达与外阴鳞癌患者五年生存情况的关系

2.4 COX回归分析外阴鳞癌患者五年生存情况的影响因素 见表3。单因素COX分析显示，FIGO分期、淋巴结转移、淋巴结转移数量、分化程度、腹股沟淋巴结、癌组织DCTN2,HOXB7表达情况均是外阴鳞癌患者五年后生存情况的影响因素(P＜0.05)；多因素COX回归分析结果表明，FIGO分期、淋巴结转移、淋巴结转移数量、分化程度、HOXB7表达均是导致外阴鳞癌患者五年死亡的危险因素(P＜0.05)，癌组织DCTN2阳性表达为保护因素(P＜0.05)。

表3 COX回归分析外阴鳞癌患者五年生存情况的影响因素

3 讨论

据报道，外阴鳞癌主要临床症状有外阴瘙痒、溃疡、肿痛、出血等，具有进展快、易转移、复发率高、预后差等特点，晚期患者的五年生存率仅为15%～60%[10-11]。近年来外阴鳞癌发病率逐渐增长，发病年龄也趋于年轻化，虽然治疗方式在不断的完善、逐渐的个性化，但患者术后并发症发生率依然偏高，长期生存率并未得到显著改善，故探讨外阴鳞癌预后相关因素并据此实施治疗具有重要临床意义[12-13]。

动力蛋白激活蛋白(DCTN)是一种多亚基蛋白，可通过与动力蛋白结合激发动力蛋白活性，影响自噬体积累，驱动细胞微管内物质的逆向转运，参与细胞有丝分裂与胞内中心体形成，维持细胞正常生理状态，其表达情况与多种肿瘤进展、癌细胞功能等密切相关[14-15]。DCTN2是DCTN家族成员之一，表达水平受到多种因素影响：受血管内皮生长因子调控；会在肿瘤相关的WNT通路与细胞凋亡通路中富集；表达水平与P37通路、肿瘤转移及细胞周期等过程相关。王乔琦等[16]发现皮肤癌组织中DCTN2表达量少于正常皮肤组织，皮肤黑色素瘤(SKCM)患者中DCTN2低表达，DCTN2表达与SKCM患者肿瘤分期相关。WANG等[17]表明结肠癌组织中DCTN2表达水平下降。本研究发现外阴鳞癌患者癌组织中DCTN2表达低于癌旁健康组织，与上述研究结果一致，提示DCTN2在外阴鳞癌患者中可能发挥抑癌作用。但边毅等[5]研究表明皮肤恶性黑色素瘤患者癌组织中DCTN2表达水平较健康组织上升，本研究与其报道结果不一致，可能是因为DCTN2在不同癌症中的作用机理不尽相同，而具体作用机制有待进一步探讨。

同源异型盒基因B7(HOXB7)是HOX家族中的B簇基因，位于17号染色体上，能特异性识别、结合基因启动子区域诱导合成起始复合体，促进基因转录水平上调，可调控癌细胞释放相关细胞因子促进肿瘤迁徙、转移[18-19]。于亮等[20-21]发现非小细胞肺癌、宫颈癌患者HOXB7表达水平均明显上升。刘英等[22]研究表明，HOXB7基因会通过调控结直肠癌患者Wnt/β-catenin信号通路参与癌组织侵袭与迁移的分子机制，表达水平上升会提升癌细胞运动与浸润能力，促进肿瘤进展。本研究结果与上述报道一致，证实HOXB7在外阴鳞癌中发挥促癌功效。但BESSA等[23]发现三阴性乳腺癌患者中HOXB7过表达反而会使癌细胞侵袭性降低，发挥抑癌功效，本研究与其报道结果不符，可能是HOXB7同时具备促癌与抑癌的生物性能，但在不同肿瘤细胞中的作用机制不同。

研究发现，DCTN2和HOXB7的表达在外阴鳞状细胞癌组织中与患者的年龄、肿瘤的直径和病灶的位置并无关联，这提示可能并未影响到这两个基因的表达。然而，DCTN2和HOXB7的表达与国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期、淋巴结转移情况、淋巴结转移数量、肿瘤分化程度和腹股沟淋巴结状况有显著关联，可能这些因素对DCTN2和HOXB7的表达有直接或间接影响。此外，在外阴鳞状细胞癌组织中，DCTN2阳性表达率较低，而HOXB7阳性表达率较高，这反映了DCTN2和HOXB7在肿瘤发生和发展中起着不同的作用。

这些结果表明外阴鳞状细胞癌的发展可能与DCTN2和HOXB7的表达水平有关，这与一些临床因素（如FIGO分期、淋巴结转移等）密切相关。这一发现揭示DCTN2和HOXB7作为潜在治疗靶点或诊断标志物的可能性。此外，DCTN2和HOXB7在外阴鳞状细胞癌中的不同表达可能代表它们在肿瘤中的不同作用，具体而言，DCTN2可能发挥抑制作用，而HOXB7可能具有促进作用。

外阴鳞癌患者癌组织DCTN2与HOXB7表达均与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移、淋巴结转移数量、分化程度和腹股沟淋巴结情况相关，提示二者均参与外阴鳞癌发生与进展，有望作为鉴别外阴鳞癌临床病理特征的生物指标[24]。DCTN2阳性表达外阴鳞癌患者五年生存率高于阴性表达患者，HOXB7阳性表达患者五年生存率低于阴性表达患者。且COX多因素回归分析显示，FIGO分期、淋巴结转移、淋巴结转移数量、低分化程度和HOXB7表达均是导致外阴鳞癌患者五年死亡的危险因素，癌组织DCTN2表达为保护因素，提示癌组织DCTN2与HOXB7表达情况均可作为评估外阴鳞癌患者长期生存情况的临床指标，应加大对DCTN2低表达、HOXB7高表达外阴鳞癌患者的关注度，制定更合理、高效、个性化的治疗方案，以降低患者死亡率，改善患者预后。

然而研究也存在一些限制。样本来源仅限于外阴鳞状细胞癌患者，因此这些结果无法适用于其他类型的外阴癌或其他部位的肿瘤。由于我们的样本数量相对较小，可能存在结果的偏差和误差，因此需进一步的研究以验证和扩大样本规模；此外，由于研究仅为横断面研究，无法确定DCTN2和HOXB7在外阴鳞状细胞癌的发生和发展过程中的具体作用，这需要后续的纵向研究进一步探讨。最后，在分析数据时未能考虑到其他可能影响DCTN2和HOXB7表达的临床和病理特征，这可能对探索DCTN2和HOXB7与外阴鳞状细胞癌预后关系的结果产生影响。

综上所述，外阴鳞癌组织中DCTN2异常低表达和HOXB7异常高表达，二者表达量均与外阴鳞癌临床病理特征和长期生存情况相关，可作为外阴鳞癌预后评估的参考依据。