慢性鼻窦炎患者血清和鼻腔分泌物中分泌型卷曲相关蛋白5的表达水平及临床价值研究

裔 静，康苧心，卢海波，孙相波（南通大学第四附属医院耳鼻喉科，江苏盐城 224000）

慢性鼻窦炎（chronic rhinosinusitis，CRS）为细菌、病毒等引起的持续超过12周的鼻腔炎症，其特征为鼻黏膜充血、脓涕等[1]。CRS伴鼻息肉（CRS with nasal polyps，CRSwNP）为严重程度更高的一种CRS表型，在我国高发，且易复发[2]。CRSwNP与全身和局部炎症有关，具有高度异质性，分为嗜酸性粒细胞性CRSwNP（eosinophilic CRSwNP，ECRSwNP）和非嗜酸性粒细胞性CRSwNP（noneosinophilic CRSwNP，nECRSwNP）两种内在亚型，表现出不同的临床特征、严重程度，预后也不尽相同[3-4]。而早期诊断组织内在分型是设计个性化治疗方案、提高治疗效率、改善CRSwNP患者预后的重点。分泌型卷曲相关蛋白5（secretory frizzled-related protein 5，SFRP5）为脂肪细胞释放的抗炎因子，可通过降低白细胞介素（interleukin，IL）类表达，发挥抗炎作用[5]。廖正寿等[6]研究表明，SFRP5与抵抗气道炎症、提高肺功能密切相关，是评估呼吸道炎症疾病病情的有利指标。然而，尚未见关于SFRP5对CRSwNP内在分型诊断价值的相关报道。因此，本研究对比分析CRSwNP患者血清及鼻腔分泌物中SFRP5表达水平，探讨其与嗜酸性粒细胞水平的关系及对ECRSwNP的诊断价值，以期为临床CRSwNP患者的针对性治疗提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2020年7月～2022年6月在南通大学第四附属医院行手术治疗的123例CRSwNP患者，根据术中切除息肉组织的染色病理结果，分为ECRSwNP组（嗜酸性粒细胞占比＞10%，n=69）和nECRSwNP组（嗜酸性粒细胞占比≤10%，n=54）。ECRSwNP组：年龄34～50（44.52±5.83）岁，男性47例，女性22例，过敏性鼻炎史33例。nECRSwNP组：年龄35～52（45.14±6.04）岁，男性36例，女性18例，过敏性鼻炎史19例。另选取同期体检正常、无过敏性鼻炎史的健康者55例为对照组，年龄34～53（44.88±5.91）岁，男性30例，女性25例。三组年龄、性别比较，差异无统计学意义（F=2.770，χ2=0.170，P＞0.05）。本研究获得医院伦理委员会批准（批号：2020-K-014），所有检查均获取研究对象本人同意并书面确认。

CRSwNP患者纳入标准：①CRSwNP诊断符合中国慢性鼻窦炎诊断和治疗指南2018版相关标准[7]；②均行CT检查和功能性鼻内镜鼻窦手术；③临床资料齐全。排除标准：①并发糖尿病、高血压全身性疾病、传染性疾病或癌症；②并发真菌性鼻窦炎、囊性纤维化坏死性息肉者；③术前4周使用糖皮质激素者；④既往进行过鼻窦手术者。

1.2 仪器与试剂 人SFRP5酶联免疫吸附试剂盒（武汉默沙克生物科技有限公司，货号69-68957），台式低温离心机（Eppendorf公司，型号5418-R），自动酶标仪（Bio-Rad公司，型号iMark 1681130）。

1.3 方法

1.3.1 资料收集：从医院病例系统中收集一般资料进行分析。包括年龄、性别、过敏性鼻炎史、鼻呼气一氧化氮（fractional nasal nitric oxide，FnNO）、口呼出气一氧化氮（fractional exhaled nitric oxide，FeNO）、外周血嗜酸性粒细胞、免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）、辅助型T1（T helper 1，Th1）细胞、Th2细胞水平、Lund-Mackay CT评分及鼻腔鼻窦结局测试-22（sinonasal outcome test-22，Snot-22）评分。

1.3.2 血清、鼻腔分泌物SFRP5水平检测：取各研究对象空腹肘静脉血5 ml，室温下放置60 min，以800 r/min离心10 min，移取上清，存于-80℃备用。另外，在内窥镜辅助下，将1cm×2cm的滤纸条放在中鼻甲和鼻中隔之间的中鼻甲头部后方平面处，3min后，取出滤纸条，1 500 r/min离心30 min，移取鼻腔分泌物上清[8]，存于-80℃备用。采用人SFRP5酶联免疫吸附试剂盒（测定范围为0～100 ng/ml）检测血清、鼻腔分泌物SFRP5水平，具体操作严格根据试剂盒说明进行。

1.4 统计学分析 统计学分析均在SPSS 25.0软件进行。计数资料以n（%）表示，行χ2检验；计量资料经检验符合正态分布，以均值±标准差（±s）表示，多组间行单因素方差分析，进一步组间比较行SNK-q检验；不符合正态分布的以中位数（四分位间距）[M（P25，P75）]表示，行Mann-WhitneyU检验或Kruskal-WallisH检验。Pearson法分析CRSwNP患者血清、鼻腔分泌物SFRP5水平与外周血嗜酸性粒细胞水平的相关性。多重线性回归分析CRSwNP患者外周血嗜酸性粒细胞水平的影响因素。受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析Th2细胞、鼻腔分泌物SFRP5水平及联合对ECRSwNP的诊断价值，曲线下面积（area under curve，AUC）比较行Z检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组临床资料比较 见表1。ECRSwNP组、nECRSwNP组IgE，Th1细胞、Th2细胞水平均高于对照组，差异具有统计学意义（q=20.175，5. 770；33.085，45. 085；34.398，9.391，均P＜0.05），ECRSwNP组IgE，Th2细胞水平高于nECRSwNP组，Th1细胞水平低于nECRSwNP组，差异具有统计学意义（q=13.986，24.320，14.622，均P＜0.05）。ECRSwNP组嗜酸性粒细胞水平高于nECRSwNP组和对照组，差异有统计学意义（H=8.966，10.071，均P＜0.05）。组间FnNO，FeNO，Lund-MackayCT评分和Snot-22评分比较，差异无统计学意义（U=1.526，1.402，1.073，0.923，均P＞0.05）。

表1 三组临床资料比较[±s,M(P25,P75)]

表1 三组临床资料比较[±s,M(P25,P75)]

项目对照组（n=55）nECRSwNP组（n=54）ECRSwNP组（n=69）H/F/UP嗜酸性粒细胞（×109/L）0.11（0.08，0.16）0.15（0.09，0.18）0.35（0.26，0.59）126.8250.000 IgE（IU/ml）107.51±19.20123.49±20.62160.23±21.25109.7610.000 FnNO（ppb）-228.5（171.25，281.25）211.00（161.50，254.00）1.5260.127 FeNO（ppb）-50.00（38.00，68.25）53.00（41.50，74.50）1.4020.161 Lund-MackayCT评分（分）-16.00（14.00，18.00）17.00（14.50，18.00）1.0730.283 Snot-22评分（分）-29.54（28.92，32.25）31.35（28.43，33.70）0.9230.356 Th1细胞（%）20.45±5.0656.83±7.2045.64±5.53539.0280.000 Th2细胞（%）4.31±0.817.05±1.4713.78±3.12320.6000.000

2.2 三组血清、鼻腔分泌物中SFRP5水平比较见表2。ECRSwNP组、nECRSwNP组血清、鼻腔分泌物中SFRP5水平低于对照组，差异有统计学意义（q=30.999，16. 419；38.699，16.942，均P＜0.05）；ECRSwNP组血清、鼻腔分泌物中SFRP5水平低于nECRSwNP组，差异有统计学意义（q=13.529，20.639，均P＜0.05）。

表2 三组血清、鼻腔分泌物中SFRP5水平比较（±s,ng/ml）

表2 三组血清、鼻腔分泌物中SFRP5水平比较（±s,ng/ml）

项目对照组（n=55）nECRSwNP组（n=54）ECRSwNP组（n=69）FP血清SFRP513.08±1.749.51±1.846.72±1.26241.1810.000鼻腔分泌物SFRP524.72±3.7317.64±3.099.46±2.45378.0740.000

2.3 CRSwNP患者血清、鼻腔分泌物中SFRP5与嗜酸性粒细胞水平的相关性 Pearson分析结果显示，CRSwNP患者血清、鼻腔分泌物中SFRP5与嗜酸性粒细胞水平呈负相关（r=-0.496，-0.601，均P＜0.05）。

2.4 影响CRSwNP患者嗜酸性粒细胞水平的多重线性回归分析 见表3。以嗜酸性粒细胞水平为因变量，以IgE，Th1细胞、Th2细胞、血清SFRP5和鼻腔分泌物SFRP5水平为自变量，行多重线性回归。结果显示，Th2细胞、鼻腔分泌物SFRP5水平为CRSwNP患者嗜酸性粒细胞水平的主要影响因素（均P＜0.05）。

表3 影响CRSwNP患者嗜酸性粒细胞水平的多重线性回归分析

2.5 Th2细胞、鼻腔分泌物SFRP5及联合检测对ECRSwNP的诊断价值 见图1。ROC曲线结果显示，Th2细胞水平、鼻腔分泌物SFRP5水平及二者联合诊断ECRSwNP的AUC分别为0.829（95%CI：0.749～0.909），0.841（95%CI：0.765～0.901）和0.905（95%CI：0.839～0.950），敏感度分别为79.7%，76.8%和92.8%，特异度分别为87.0%，87.0%和85.2%，联合检测的AUC高于单一指标的AUC，差异有统计学意义（Z=2.012，2.100，均P＜0.05）。Th2细胞水平、鼻腔分泌物SFRP5水平诊断截断值分别为9.60%，12.47 ng/ml。

图1 Th2细胞、鼻腔分泌物SFRP5及二者联合诊断ECRSwNP的ROC曲线

3 讨论

鼻黏膜的持续性慢性炎症是导致慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者鼻息肉形成的主要病理原因，该过程涉及多种炎症信号传递和介质释放[9-10]。随着对CRSwNP病理机制的深入研究，学者发现CRSwNP内在分型与病情严重程度密切相关。因此，寻找有效的内在分型诊断标志物，有利于指导临床治疗和控制病情，从而改善患者转归。目前，基于息肉组织显微镜下嗜酸性粒细胞比例的分型方式被广泛认可[11]，然而鼻内镜下息肉组织的采集为侵入性检查，推广价值较低。因此，寻找能辅助区分CRSwNP内在分型的便捷指标具有积极意义。

CRSwNP常伴随鼻塞、嗅觉退化等持续性症状，临床依据嗜酸性粒细胞在鼻黏膜中的浸润程度，将其分为ECRSwNP和nECRSwNP两种内在亚型。ECRSwNP属于一种Th2细胞相关的炎症疾病，其临床特征包括：严重程度较高，对常规治疗反应差，嗅觉功能损伤严重和息肉复发率更高[12]。Th2细胞在ECRSwNP疾病进展中起重要作用，可能通过释放IL-4和IL-13等，促进嗜酸性粒细胞大量成熟、入血，并向鼻黏膜局部趋化、聚集，进一步释放多种炎性因子，正向推进炎症病变[13-14]。有团队已在ECRSwNP患者中观察到Th2细胞、嗜酸性粒细胞水平的升高[13]。本研究中，我们通过比较ECRSwNP组与nECRSwNP组Th1，Th2细胞水平，发现ECRSwNP和nECRSwNP患者均存在外周血Th1/Th2细胞失衡，且ECRSwNP患者存在Th2偏移严重，提示Th2细胞水平可能对判断CRSwNP内在分型有一定意义。

SFRP5为SFRP家族的成员，不仅可通过抑制氧化代谢促进脂肪细胞肥大，还可调节机体炎症和代谢功能障碍[15]。SFRP5为Wnt5A通路的内源性抑制剂，在肥胖症、多囊卵巢综合征、组织学绒毛膜羊膜炎等[16-18]多种炎症性疾病中呈降低趋势。本研究中ECRSwNP患者血清及鼻腔分泌物中SFRP5水平低于nECRSwNP患者，与以上研究[16-18]基本一致，提示SFRP5的表达水平对判断CRSwNP患者内在分型有一定参考价值。分析可能原因，SFRP5可抑制Wnt介导的巨噬细胞活化，减少IL-13等炎性因子的产生，抵抗炎症的发生、进展[19]，SFRP5水平缺乏可能减弱甚至解除其对Wnt信号的抑制作用，使得巨噬细胞释放大量炎性因子，促进炎症作用，加重嗜酸性粒细胞浸润，推进CRSwNP患者病情进展。嗜酸性粒细胞水平是区分CRSwNP内在分型的重要依据，其与CRSwNP严重程度密切相关[20]。活化的嗜酸性粒细胞会释放多种颗粒蛋白和炎症因子，刺激鼻上皮细胞死亡，导致疾病发生、进展[21]；另外，嗜酸性粒细胞还会表达组织因子，促进纤维蛋白沉积，促进鼻息肉的形成[22]。本研究多重线性回归分析显示，在调整IgE，Th2细胞等混杂因素后，鼻腔分泌物SFRP5水平仍为CRSwNP患者嗜酸性粒细胞水平的主要影响因素，而血清SFRP5水平不是CRSwNP患者嗜酸性粒细胞水平的主要影响因素。可能由于鼻腔分泌物通过鼻腔填塞的方式获取，主要包括浆液腺体细胞、免疫细胞、杯状细胞、鼻黏液、血浆等的混合物，更能反映鼻黏膜组织及鼻腔微环境炎症状态[23]。另外，考虑到Th2细胞亦为嗜酸性粒细胞水平的主要影响因素，因此，评价了二者对ECRSwNP的诊断价值。结果显示，鼻腔分泌物SFRP5和Th2细胞水平联合检测相较于单一指标，能更有效地诊断ECRSwNP，敏感度也更高。因此，通过联合检测Th2细胞和鼻腔分泌物SFRP5水平，有利于尽早发现疑似ECRSwNP的患者，并建议这类患者进行鼻黏膜组织检测，从而明确分型，给予个体化治疗。

综上所述，ECRSwNP患者血清及鼻腔分泌物SFRP5表达水平较低，Th2细胞水平较高，鼻腔分泌物SFRP5和Th2细胞水平联合检测对于诊断ECRSwNP有较高价值。此外，本研究所选取的外周血和鼻腔分泌物样本检测具有获取容易、检测快速敏捷、无侵入性且性价比高等优势，临床推广性强。因此，鼻腔分泌物SFRP5和Th2细胞可作为临床辅助诊断指标，有助于临床医师快速识别ECRSwNP，并给予针对性治疗。然而目前关于SFRP5在CRSwNP疾病内在分型中的具体机制等研究尚不十分明确，需在未来深入探讨，以获得更多研究数据支持。