子宫内膜癌组织中TMIGD2，TIGIT的表达及其与临床病理特征的相关性研究

柴 静，张家弘，李梦雪（唐山市妇幼保健院妇科，河北唐山 063000）

子宫内膜癌（endometrial carcinoma）是一种位于子宫内膜上皮的恶性肿瘤，有子宫内膜样癌、浆液性癌、透明细胞癌、子宫癌肉瘤等几种组织学亚型，临床表现无特异性，导致大多数患者无法在早期确诊，进而发展到癌症中晚期，且预后容易复发，严重影响女性的生命安全[1-2]。因此，寻找与子宫内膜癌病理类型以及患者预后相关的生物标志物有助于临床尽早对患者进行治疗，保障患者的生命健康。免疫检查点是一类免疫细胞上具有抑制免疫活性的分子，能够诱导肿瘤特异性T细胞凋亡，减轻抗肿瘤免疫反应，促进肿瘤免疫耐受，在临床癌症治疗中具有重要作用[3-5]。跨膜和免疫球蛋白结构域2（transmembrane and immunoglobulin domain containing 2，TMIGD2）、T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域（T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain，TIGIT）作为免疫检查点，能够阻碍癌症中免疫循环，在口腔鳞状细胞癌、血液恶性肿瘤等肿瘤中发挥着关键作用[6-7]。但在子宫内膜癌病理类型以及患者预后分析中仍不明确，本研究通过检测子宫内膜癌患者组织中TMIGD2，TIGIT的表达情况，探讨与患者临床病理特征及预后的关系，以期为评估和治疗子宫内膜癌提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2016年1月～2018年1月唐山市妇幼保健院诊治的160例子宫内膜癌患者为研究对象，收集患者术中切除的癌组织及癌旁正常组织（距离癌组织＞5 cm）。患者平均年龄55.35±8.55岁；＜55岁79例，≥55岁81例；病理类型：子宫内膜样腺癌60例，透明细胞癌40例，浆液性癌35例，子宫癌肉瘤25例；未绝经70例，绝经90例；肿瘤直径：≤3 cm 95例，＞3 cm 65例；中高分化85例，低分化75例；FIGO分期：I+II期82例，III+IV期78例；发生淋巴结转移62例，未发生淋巴结转移98例；肌层浸润程度：浅表100例，深层60例。纳入标准:①子宫内膜癌患者经临床病理确诊，符合子宫内膜癌分期标准[8]；②患者入院前未进行过手术、放疗、化疗等治疗；③年龄＞18周岁，自愿签署同意书；④临床资料齐全。排除标准：①有其他部位恶性肿瘤者；②伴有心肝肾等重要内脏功能障碍者；③全身感染性疾病者；④处于妊娠状态者。本研究经医院伦理委员会批准。

表1 子宫内膜癌组织和癌旁正常组织TMIGD2，TIGIT表达比较[n（%）]

1.2 仪器与试剂 TMIGD2兔多抗（货号：13820-T16），TIGIT兔多抗（货号：50939-T16，北京义翘神州科技股份有限公司）；二抗羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗体（货号：WBB23204，上海经科化学科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学法检测子宫内膜癌组织和癌旁正常组织TMIGD2和TIGIT表达：将术中切除的子宫内膜癌组织和癌旁正常组织标本进行10g/dl甲醛固定，24h后进行常规切片5 μm，脱蜡。严格按照免疫组织化学法操作步骤，利用TMIGD2兔多抗、TIGIT兔多抗、二抗羊抗兔IgG对样本中TMIGD2和TIGIT表达进行检测。阳性细胞百分比及阳性细胞染色强度乘积为总评分，低表达：总评分≤4分，高表达：总评分＞4分。其中，①根据阳性细胞百分比进行评分，0%～5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分；②根据阳性细胞显色强度进行评分，0分为无着色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。

1.3.2 随访：主要以电话及门诊复查的方式对所有子宫内膜癌患者进行为期五年的随访，患者出现复发或癌因死亡时则随访结束，患者随访率为100%。生存时间为术后至患者出现复发或癌因死亡时间或最终随访截止时间。

1.4 统计学分析 SPSS 25.0对数据处理，计数资料以n（%）表示，行χ2检验；对子宫内膜癌组织TMIGD2与TIGIT表达的相关性进行Spearman法分析；Kaplan-Meier法分析子宫内膜癌组织TMIGD2，TIGIT表达与患者预后的关系；COX回归分析影响子宫内膜癌患者预后的因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TMIGD2，TIGIT在子宫内膜癌组织及癌旁正常组织中的表达情况及相关性 见表1。经两组间χ2检验，子宫内膜癌组织中TMIGD2（67.50%）和TIGIT（72.50%）高表达率均高于癌旁正常组织（21.25%，17.50%），差异具有统计学意义（χ2=69.327，97.778，均P＜0.01）。经Spearman法分析，子宫内膜癌组织中TMIGD2与TIGIT表达呈正相关（r=0.422，P＜0.01）。

2.2 子宫内膜癌组织中TMIGD2，TIGIT表达与临床病理特征的关系 见表2。经两组或多组间χ2检验，TMIGD2和TIGIT表达水平均与FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润程度有关；且FIGO分期为III+IV期、有淋巴结转移、深层肌层浸润的子宫内膜癌组织TMIGD2，TIGIT高表达率均高于FIGO分期为I+II期、无淋巴结转移、浅表肌层浸润子宫内膜癌组织TMIGD2，TIGIT的高表达率，差异具有统计学意义（χ2=6.565～20.323，均P＜0.05）。

表2 子宫内膜癌组织中TMIGD2，TIGIT表达与临床病理特征的关系[n（%）]

2.3 子宫内膜癌组织中TMIGD2和TIGIT表达与患者预后的关系 见图1，2。五年随访结果显示，160例子宫内膜癌患者中有85例生存，75例死亡，总生存率为53.13%。TMIGD2低表达组生存43例（82.69%），高表达组生存42例（38.89%）；TIGIT低表达组生存38例（86.36%），高表达组生存47例（40.52%）。Kaplan-Meier生存曲线分析表明，TMIGD2，TIGTT低表达组患者生存率均高于高表达组，差异具有统计学意义（χ2=27.045，26.925，均P＜0.01）。

图1 子宫内膜癌组织中TMIGD2表达与患者5年生存率的关系

图2 子宫内膜癌组织中TIGIT表达与患者5年生存率的关系

2.4 COX回归分析影响子宫内膜癌患者预后的因素 见表3。以子宫内膜癌患者是否死亡为因变量，以FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润程度、TMIGD2，TIGIT为自变量进行COX回归分析。单因素分析表明，FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润程度、TMIGD2，TIGIT表达是影响患者预后的因素；多因素COX回归分析表明，FIGO分期（95%CI：1.071～6.838）、TMIGD2（95%CI：1.097～1.574），TIGIT（95%CI：1.106～16.869）是子宫内膜癌患者预后的危险因素（均P＜0.05）。

表3 COX回归分析影响子宫内膜癌患者预后的因素

3 讨论

子宫内膜癌主要表现为绝经后出血，多发于中老年女性，发病率逐渐增长，且死亡率居高不下，严重危害女性的健康[9-10]。研究发现，肿瘤免疫微环境在肿瘤发生发展中扮演重要角色，子宫内膜癌细胞和肿瘤微环境可以调节免疫反应，造成免疫失调，逃避免疫应答[11-12]，一些免疫检查点如T细胞活化的V结构域Ig抑制因子、淋巴细胞活化基因-3、程序性死亡配体1等[13-15]能够抑制T细胞功能，造成子宫内膜癌逃脱免疫攻击，在患者治疗和预后评估中发挥重要作用。因此，寻找有助于评估子宫内膜癌患者病理特征及预后的生物标志物，及时加以干预，以便在临床医疗中对患者进行及时的治疗。

免疫细胞可通过识别和消除癌细胞产生肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原，而肿瘤通过多种免疫逃逸机制能够逃避免疫介导的识别。跨膜和免疫球蛋白结构域2（TMIGD2）是一种跨膜蛋白，由幼稚T细胞、自然杀伤细胞和记忆T细胞表达，在活化的T细胞中丢失，与人类内源性逆转录病毒-H长末端重复序列结合蛋白2结合，影响细胞间相互作用、细胞迁移和血管生成，帮助肿瘤细胞逃逸免疫，促进肿瘤的发展[16]。T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域（TIGIT）作为T细胞功能负调节因子，在活化T细胞和自然杀伤细胞亚群上表达受限，能够诱导免疫抑制，参与抑制性受体的调控网络，在多种肿瘤中异常表达，在调节慢性病毒感染和癌症的适应性免疫和先天免疫方面发挥着关键作用[17]。本研究发现，TMIGD2和TIGIT与子宫内膜癌具有一定的关系，与FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润程度有关。子宫内膜癌组织中TMIGD2与TIGIT表达呈正相关。提示TMIGD2与TIGIT之间可通过调控关系参与免疫抑制作用，影响免疫功能，对子宫内膜癌的发生发展产生影响。GUO等[18]研究发现，TMIGD2过度表达可以激活JAK/STAT信号通路，抑制T细胞增殖和活化，促进肝细胞癌细胞的免疫耐受。符圆圆等[19]研究发现，卵巢癌组织中TMIGD2高表达与FIGO分期、淋巴结转移有关，对患者预后具有一定的预测作用。WU等[20]研究发现，TIGIT参与头颈部鳞状细胞癌中髓系衍生抑制细胞免疫抑制，造成浸润T细胞的耗竭，影响患者总体生存率。吴洁琼等[21]研究发现，TIGIT与肺癌的恶性程度有关，通过抑制免疫功能改变肿瘤微环境，对患者预后生存情况产生影响。本研究进一步分析了160例子宫内膜癌患者五年随访资料发现，TMIGD2，TIGIT与患者预后具有密切的关系，TMIGD2和TIGIT低表达组患者生存率显著高于高表达组，且MIGD2和TIGIT是影响患者预后的危险因素。推测高水平的TMIGD2和TIGIT能够参与免疫调控，抑制T细胞增殖，诱导免疫抑制，改变肿瘤微环境，靶向肿瘤微环境中的多条免疫抑制通路，造成免疫沉默，导致肿瘤细胞逃避凋亡，促进子宫内膜癌细胞增殖和迁移，影响患者预后。

综上，子宫内膜癌组织中TMIGD2和TIGIT均高表达，与临床病理特征及预后有密切联系。检测二者表达在医生对患者临床评估、预后改善中具有较大的帮助，但仍需大规模数据对免疫检查点TMIGD2和TIGIT表达与子宫内膜癌患者病理类型及预后的关系进行进一步验证。