参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响

赵立昌,袁超,殷娜,计忠宁,相春波,曾菁蓉,李萍

(江阴市中医院肾病科,江苏 江阴 214400)

糖尿病肾病是糖尿病常见的并发症之一,其严重程度取决于糖尿病患者对血糖的控制情况[1]。糖尿病肾病患者往往伴随着氧化应激和内皮功能损伤表现,而氧化应激和内皮功能异常又可加重糖尿病肾病病情,两者密切相关,互相影响[2]。因此,寻找有效的治疗方案,防止或改善氧化应激和内皮功能损伤,对于糖尿病肾病治疗具有重要意义[3]。缬沙坦是目前糖尿病肾病的常用治疗药物,可以阻止肾素和血管紧张素Ⅱ的形成和作用,减轻高血压和肾小球毛细血管的收缩,实现对糖尿病肾病患者血管内皮功能的改善,并能减轻氧化应激损伤[4]。中医治病求本,单通过缬沙坦针对患者病症实现改善,难以从根源实现对机体平衡的调整。参麦地黄汤由《小儿药证直诀》中六味地黄丸加沙参、麦冬组成,具有养阴益气功效,前期研究显示,参麦地黄汤能够改善肾脏微循环,保护肾小球,改善糖代谢障碍,同时还能从根源调节免疫功能[5]。因此,本研究进一步研究参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激和内皮功能的影响,同时评估其对血清miR-133b、miR-135b的改变,以期为临床治疗糖尿病肾病提供参考及依据。

1 临床资料

1.1 一般资料

选取2017年1月至2020年10月于我院门诊就诊的90例糖尿病肾病患者为研究对象,依据随机数字表法将其分为对照组、观察组各45例。2组患者基线资料比较无显著差异(P>0.05),见表1。本研究经江阴市中医院伦理委员会审批通过(伦理批号:SR201600701)。

表1 2组患者一般资料比较

1.2 诊断标准

1.2.1 西医诊断标准 参照《糖尿病肾病诊断标准(2010)》[6]中关于糖尿病肾病的诊断标准:清晨空腹血糖(FPG)、餐后血糖水平均升高,FPG>7.1 mmol·L-1;出现肾功能损伤,表现为血清肌酐(SCr)、24 h尿蛋白量升高(<2 500 mg);6个月内尿白蛋白排泄率至少连续2次>20 μg·min-1。

1.2.2 中医辨证标准 参照《糖尿病中医防治指南》[7]、《糖尿病肾脏病中西医结合防治专家共识(2019 版)》[8]气阴两虚证辨证标准,主症:①水肿;②尿浊;③五心烦热;④神疲乏力;⑤咽干口燥。次症:①潮热盗汗;②纳差;③大便干燥;④形瘦多食。舌脉:舌质红,苔少或薄黄而干,脉细数。满足全部主症,及任意3项次症即可辨证。

1.2.3 纳入标准 ①符合糖尿病肾病诊断标准及气阴两虚证辨证标准;②年龄为18周岁以上;③属于早期肾脏病变[尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)≥30 mg·g-1];④对研究所用药物无过敏反应;⑤糖尿病病程≥10年;⑥可遵从医嘱用药;⑦签署知情同意书者。

1.2.4 排除标准 ①合并心脑血管疾病;②合并恶性肿瘤;③合并全身或局灶感染;④存在慢性肾小球肾炎、高血压肾病等;⑤存在消化系统溃疡;⑥妊娠期或哺乳期妇女;⑦存在严重精神疾病,合并认知功能障碍;⑧有视听功能障碍。

2 方法

2.1 治疗方法

对照组予缬沙坦分散片(鲁南贝特制药有限公司,生产批号:20160907,规格: 每片40 mg)口服,每日1次,每次80 mg。

观察组在治疗组基础上加予参麦地黄汤口服治疗,药物组成为北沙参15 g,熟地黄15 g,茯苓15 g,麦冬10 g,山萸肉10 g,山药10 g,泽泻10 g,牡丹皮6 g,由江阴市中医院中药房代煎,取汁300 mL,早晚各150 mL口服。

2组患者均治疗3个月。

2.2 观察指标及方法

2.2.1 临床疗效评价 参照《临床疾病诊断与疗效判断标准》[9]中的相关标准对其进行判定,显效:UACR和尿蛋白定量降至正常范围;有效:UACR或尿蛋白定量减少≥30%;无效:未达到上述标准。总有效率=(显效例数+有效例数)/总例数×100%。

2.2.2 中医证候积分比较 于治疗前后评估患者主症、次症积分,主症按重度(6分)、中度(4分)、轻度(2分)、无(0分)评分,次症无、轻、中、重度分别记 0、1、2、3 分。 积分越高,症状越严重。

2.2.3 血糖及肾功能检测 于治疗前后抽取2组患者空腹静脉血5 mL,3 000 r·min-1离心10 min后取血清,采用全自动生化分析仪(Beckman Coulter公司,型号:AU5800型)检测FPG、SCr、尿素氮(BUN)水平及UACR,试剂盒购自Beckman Coulter公司,货号C0008-50、C0101-41、C0006-14、C0009-10。

2.2.4 氧化应激指标检测 于治疗前后抽取2组患者空腹静脉血5 mL,3 000 r·min-1离心10 min后取血清,置于-80 ℃冰箱中储存,采用ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平,试剂盒选购自南京建成生物工程研究所,货号:55204、55641。

2.2.5 血管内皮功能指标检测 于治疗前、后空腹状态取静脉血3 mL,3 000 r·min-1离心10 min后取血清,用ELISA法检测可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及内皮素-1(ET-1)水平,试剂盒选购自南京建成生物工程研究所,货号:56432、54432。

2.2.6 血清miR-133b、miR-135b水平检测 于治疗前后空腹状态取静脉血4 mL,3 000 r·min-1离心15 min后取血清置于无菌EP管中,qPCR法检测样本血清miR-133b、miR-135b表达量。应用SYBR qPCR Mix在Applied Biosystems公司的Prism 7000型荧光定量PCR系统上进行PCR反应。反应条件为95 ℃下10 min,随后进入40个循环:94 ℃下30 s,58 ℃下30 s,72 ℃下 1 min。miR-133b引物序列为:上游5′-CGCTCAGTGCATCACAGAA-3′,下游5′-CTCGCTTCCGCAGCACA-3′;miR-135b引物序列为:上游5′-GGCCTGAGCCTTCAGGGGCT-3′,下游5′-CGCGTAGGCGATTGGGGATCG-3′。

2.3 统计学方法

采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析,计数资料用频数(%)表示,进行2检验;符合正态分布的计量资料用表示,采用t检验,以P<0.01为差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 2组患者临床疗效比较

结果见表2。

表2 2组患者临床疗效比较(n=45)

3.2 2组患者治疗前后中医证候积分比较

结果见表3。

表3 2组患者治疗前后中医证候积分比较

3.3 2组治疗前后患者血糖及肾功能比较

结果见表4。

表4 2组患者治疗前后血糖及肾功能比较

3.4 2组患者氧化应激指标比较

结果见表5。

表5 2组患者治疗前后氧化应激指标比较

3.5 2组患者治疗前后血管内皮功能指标比较

结果见表6。

表6 2组患者治疗前后血管内皮功能指标比较

3.6 2组患者治疗前后血清miR-133b、miR-135b水平比较

结果见表7。

表7 2组患者治疗前后血清miR-133b、miR-135b水平比较

4 讨论

糖尿病肾病是指由于长期血糖控制不良而导致的肾脏损伤和功能障碍,是糖尿病患者最常见的并发症之一。通常表现为肾小球滤过率降低、蛋白尿、高血压等症状,严重时可能导致肾功能衰竭。糖尿病肾病成因较为复杂,其中糖尿病引起的炎症反应和氧化应激会加速肾脏纤维化和损伤,使糖尿病肾病进展加剧。糖尿病肾病会造成肾脏的结构和功能异常,肾小球滤过率下降,无法及时清除体内多余废物和液体,导致水肿、严重的肾功能衰竭等问题[10]。临床治疗糖尿病肾病主要采取保守干预与药物治疗,如控制血糖、血压、限制蛋白质摄入,口服降糖药、利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂等。近年来,随着中西医结合治疗理念的发展,中西医结合用药在糖尿病治疗中应用频率上升[11]。

糖尿病肾病可归属于中医“水肿”范畴,病因多归于脾胃虚弱、气血不足、阴阳失衡等,临床以气阴亏虚证居多。参麦地黄汤由六味地黄丸改良而来,方中北沙参养阴益气、益胃生津,麦冬润肺止咳、滋补肺阴,熟地黄益肾滋阴,共为君药;山茱萸补肾涩精,山药补益脾阴固肾,共为臣药;泽泻利湿泄浊,茯苓淡渗健脾除湿,助山药之健运脾胃,与泽泻共泄肾浊,而为使药;牡丹皮清泄虚热,为佐药,诸药合用共奏养阴益气之效。本研究结果显示,缬沙坦联合参麦地黄汤治疗后临床总有效率达97.78%,显著高于对照组的82.22%,且FPG、SCr、BUN、UACR水平更低,说明联合治疗方式疗效更好,对患者血糖、肾功能改善程度更明显。

糖尿病肾病患者中,氧化应激反应的增加可能导致机体自由基生成增多,内皮细胞通透性增加,炎症反应加重,最终致使肾脏细胞受到严重损伤,因此,研究治疗方案对氧化应激的改善十分有意义。miR-133b、miR-135b被认为是一种促炎型miRNA,可以刺激肾小球系膜细胞产生炎症因子并导致纤维化[12]。本研究结果显示,治疗后2组患者SOD水平升高,MDA、sICAM-1、ET-1、miR-133b、miR-135b均明显下降,且观察组显著优于对照组,提示参麦地黄汤联合缬沙坦可有效改善患者机体氧化应激、血管内皮功能及炎症水平。

综上所述,参麦地黄汤联合缬沙坦可改善糖尿病肾病患者血糖、肾功能以及氧化应激、血管内皮功能,降低血清miR-133b、miR-135b水平。但本次研究纳入样本量偏少,且为单中心研究,未来还需开展大样本、多中心研究以进一步研究参麦地黄汤防治糖尿病肾病的内在机制。