云南地区反复输血的地中海贫血儿童细胞免疫和体液免疫状态的研究*

金晓红 陈蕊 王淑霞 刘建香 高立兰 吕孟兴 屈柯暄

(昆明市儿童医院 昆明市卫健委技术中心 云南省儿童健康与疾病临床医学研究中心， 云南 昆明 650228)

地中海贫血又称海洋性贫血，是全球分布最广、累积人数最多的常染色体遗传病[1]。 云南西南部及当地少数民族是地中海贫血疾病的高发区，发病率高达37.45% ～50.41%[2]。 临床上根据患者贫血的严重程度分为轻型、中间型及重型β 珠蛋白生成障碍性贫血，其中重型β 珠蛋白生成障碍性贫血患儿(β-thalassemiamajor，TM)需要靠定期输血维持患儿生命[3]。

输血是1 种高风险医疗行为，输注400 mL 的血液，相当于1 次器官移植的免疫风险。 由于血液成分的复杂性，及儿童在生理生化和免疫血液学方面的特点，输入的血液成分在发挥治疗作用的同时，也易引起不同程度的免疫反应，长期异体输血反复刺激患儿免疫系统[4]。 为了解云南地区反复输血地中海贫血儿童体内细胞免疫和体液免疫状态水平的变化，本研究比较了反复输血地贫儿童、未输血地贫儿童和健康体检儿童淋巴细胞亚群(CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋、CD19＋、CD16＋56＋)和血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE)及铁蛋白之间的差异，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 观察组 选取2020 年1 月—2022 年10 月期间，在本院诊断为地中海贫血，定期接受≥1 次输血治疗的儿童48例，排除同时确诊为其它疾病的儿童2 例，最终入组46 例，其中男性26 例，女性20 例，年龄(4.78±3.21)岁。 地中海贫血的诊断标准参照文献[5]。 每次红细胞输注量为0.5 ～3 U，平均输血间隔时间为(30.29±10.12) d，见表1。 本研究经本院伦理审查委员会审批通过(2020-03-140-K01)。

表1 研究对象分组情况 (%)

1.1.2 分组 对照1 组:选取同时间段内，诊断为地中海贫血未进行输血治疗的儿童43 例，排除同时确诊为其他疾病的儿童3 例，最终入组40 例，其中男性21 例，女性19 例，年龄(3.61±2.73)岁。 地中海贫血的诊断标准同上。 对照2组:选取同时间段内，健康体检儿童46 例，其中男性25 例，女性21 例，年龄(4.15±2.80)岁，见表1。

1.2 仪器与试剂 流式细胞分析仪(美国BD 公司，FACSCantoⅡ)；全自动生化分析仪(日本株式会社日立高新技术，Hitachi7600-120)；全自动生化免疫分析仪(德国罗氏，Roche cobas E602)。 淋巴细胞亚群(美国BD 公司，批号89173、32055、28777)；IgG、IgA、IgM(北京世纪沃德生物，批号分别为:R36220101、R36220101、R37220101)；IgE(北京九强生物，批号22-0302)；铁蛋白(德国罗氏，批号:60022901)。

1.3 方法

1.3.1 淋巴细胞亚群 采集EDTA-K2抗凝静脉血2 mL，用流式细胞仪法进行定量检测。

1.3.2 血清免疫球蛋白 采集非抗凝静脉血3 mL，应用全自动生化分析仪，通过免疫比浊法进行IgG、IgA、IgM 定量检测；应用全自动生化分析仪，通过胶乳免疫比浊法进行IgE定量检测。

1.3.3 铁蛋白 采集非抗凝静脉血3 mL，应用全自动生化免疫分析仪通过化学发光法进行定量检测。

1.4 统计学分析 使用GraphPad Prism 9.5 和SPSS 27.0 对研究数据进行统计分析和图形绘制。 各统计指标均以(¯x±s)表示，各组间比较采用成组设计的t检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 淋巴细胞亚群检测结果比较 观察组CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋比例低于对照1 组和2 组，CD16＋/CD56＋比例低于对照2 组，CD8＋高于对照1 组和2 组，CD19＋比例高于对照2 组，差异有统计学意义(P＜0.05)；CD19＋、CD16＋/CD56＋与对照1 组之间差异无统计学意义(P＞0.05)，2 对照组之间所有检测指标均无差异(P＞0.05)，见图1。

2.2 血清免疫球蛋白和铁蛋白检测 观察组IgG、铁蛋白高于对照1 组和2 组，IgA 高于高于对照2 组，P＜0.05；2 对照组之间，P＞0.05；IgM、IgE3 组间比较，P＞0.05，见图2。

图2 132 例入组病例IgG、IgA、IgM、IgE、铁蛋白检测结果

2.3 观察组、对照1 组和2 组淋巴细胞亚群和血清免疫球蛋白差异结果汇总 见图3。

图3 淋巴细胞亚群和血清免疫球蛋白差异结果汇总

3 讨论

云南省是地中海贫血的高发区。 除了骨髓移植，输血是重型地中海贫血儿童生存的唯一选择。 输血能有效改善地中海贫血患儿的贫血症状和生存质量[1]。 但是，长期异体输血反复刺激患儿免疫系统，导致患儿细胞免疫和体液免疫发生一系列未知的变化。

细胞免疫是机体免疫重要的组成部分，外周血淋巴细胞亚群包括T 淋巴细胞(T 细胞)、B 淋巴细胞(B 细胞)和自然杀伤细胞(NK 细胞)等[6]。 正常情况下，各淋巴细胞亚群(包括T 细胞、B 细胞、NK 细胞等)在一定数量和比例范围内，维持着机体的正常免疫功能。 当淋巴细胞亚群的数量及比例发生异常改变时，机体会产生一系列病理变化和免疫功能障碍[7]。 因此，进行淋巴细胞亚群分析，分析反复输血地中海贫血儿童的淋巴细胞亚群，对了解其免疫功能水平有重要意义。

CD3＋、CD4＋、CD8＋是T 淋巴细胞的免疫标志，在细胞免疫中发挥主要作用。 CD8＋T 细胞可特异性杀伤靶细胞，主要参与抗胞内感染[8]。 CD4＋/CD8＋比值的稳定和平衡是机体发挥正常免疫功能的关键因素[7]。 本研究结果显示，反复输血的地中海贫血儿童CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋比例明显低于对照1 组和2 组，CD8＋比例明显高于对照1 组和2 组，差异有统计学意义，与文献[9-11]报道一致，说明反复输血的地中海贫血儿童体内辅助性T 细胞明显降低，抑制性T 细胞明显升高；同时，T 淋巴细胞亚群比例失调，机体细胞免疫功能受到影响。 CDl9＋是B 淋巴细胞检测的特异性标志。 本研究结果显示，反复输血的地中海贫血儿童CD19＋比例明显高于健康体检儿童，与文献[9-11]报道一致。 该结论说明，反复输血的地中海贫血儿童长期接受异体血液的刺激，导致B 淋巴细胞增殖分化增强。

CD16＋和CD56＋是NK 细胞相对特异性的标志。 NK 细胞可以分泌多种细胞因子，并具有细胞毒杀伤功能，可以早期识别并清除病毒感染细胞，同时也是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁[12-13]。 NK 细胞功能障碍可能导致人类自身免疫的发生[14]。 本研究结果显示，反复输血的地中海贫血患儿CD16＋/CD56＋比例明显降低，与对照2 组比较，差异有统计学意义。 NK 细胞的减少，说明反复输血的地中海贫血儿童对机体防御功能降低，免疫能力下降。

体液免疫是人体最重要的免疫机制之一，以浆细胞产生具有抗体活性或与抗体化学结构类似的免疫球蛋白。 免疫球蛋白广泛存在于人体血清中，可分为IgM、IgA、IgG、IgE 和IgD 五大类。 本次研究中，反复输血的地中海贫血儿童IgG、IgA 明显升高，与对照1 组和对照2 组比较，差异有统计学意义。 IgG 是血清中免疫球蛋白的主要成分，也是最重要的抗感染分子。 持续反复输血的地中海贫血儿童长期反复被外来抗原刺激，导致机体免疫系统功能紊乱，Monia 等[15]研究显示，长期输血的地中海贫血儿童，IgG 性质红细胞抗体有高达6.5%的发病率，IgG 性质抗体可以加速红细胞的溶血破坏，也可导致临床上显著的溶血，导致威胁生命的溶血性输血不良反应，并加重疾病的病程。 而IgM、IgE 在本次研究中，3 组检测结果均无差异，与文献[16]报道一致。 IgM 作为血管内抗感染的主要抗体，在机体免疫防御尤其是早期防御具有至关重要作用[17]。 建议反复输血的地中海贫血儿童每次输血均筛选与其抗原分型一致的血液进行配血，以减少反复输血暴露多重抗原的机会。

铁是合成血红素的必需原料，是人体的常见的微量元素之一，对人体免疫系统具有调节功能。 本研究结果显示，反复输血的地中海贫血儿童铁蛋白明显升高，存在着铁超负荷的状况，与对照1 组和对照2 组比较，差异有统计学意义。严重的铁超载是地中海贫血患者严重感染的危险因素[18]，可能会导致进行性器官衰竭、同种异体免疫和感染风险增加。 有文献[19]报道指出，由于机体内铁超负荷可能增加感染的可能性，加速免疫系统的老化，影响T 细胞增殖、分化等进程，诱导T 细胞的凋亡，造成T 细胞及其各亚群的数量发生改变[20]。

综上所述，反复输血的地中海贫血儿童由于长期受到异体血液同种抗体刺激和各种外来病原体的侵入危害，导致体内T 淋巴细胞亚群比例失调、B 淋巴细胞比例升高、NK 细胞比例降低，细胞免疫功能紊乱；在体液免疫方面，IgG、IgA 升高，使机体长期处于免疫应激状态。 同时，反复输血造成患儿体内铁蛋白超负荷。 而本研究的40 例未输血地中海贫血儿童，虽携带了地贫基因，但机体未接受到外来抗原及病原体的刺激，免疫功能暂未受到影响。

以上结果提示临床，针对反复输血的地中海贫血儿童，加强细胞免疫及体液免疫水平的监测，及时了解患儿免疫功能状态，同时严格掌握输血指征，尽量选择与患者ABO、Rh和MNS 血型对应抗原阴性的血液进行输注，以减少迟发性溶血性输血反应的发生[21]，保障输血安全和生命安全，提高地中海贫血儿童的生存质量。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。