正交试验法优选麸炒山药炮制工艺

胡 雨，张丽君，高 波，郭志俊

（1.华润三九现代中药制药有限公司，广东 惠州 516000；2.安徽华润金蟾药业有限公司，安徽 淮北 235000）

山药为薯蓣科植物薯蓣（Dioscorea oppositaThunb.）的干燥根茎，是常见药食两用的补益类中药。山药的炮制方法主要有清炒、麸炒、土炒、米炒、蜜麸炒等［1，2］，其药用成分主要有多糖、尿囊素、甘露聚糖、山药碱、糖蛋白等［3-5］。其中，尿囊素作为山药的有效成分，具有生肌作用，能修复上皮组织，促进皮肤溃疡和伤口愈合，用于治疗胃及十二指肠溃疡［6］。因此，本研究以尿囊素含量［7，8］为主要指标，结合麸炒山药外观性状评价，运用正交试验设计优选麸炒山药炮制工艺［9-11］，以期对麸炒山药的规模化生产提供一定的技术参考。

1 材料与方法

1.1 试验仪器、药品和材料

Thermo U3000 型高效液相色谱仪［赛默飞世尔科技（中国）有限公司］；KQ-800 DE 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；XPE 26 型、MS204S 型电子天平（Mettler Toledo 公司）；中药炒药机（温州顶历医疗器械有限公司）。

尿囊素对照品（批号：111501-200202，纯度100%）购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。山药饮片（批号：2208001），购自河南省某公司，经鉴定是薯蓣科植物薯蓣的干燥根茎。

1.2 方法

1.2.1 尿囊素含量测定

1）色谱条件：色谱柱为ChromCore NH2（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（90∶10，体积比）；柱温为25 ℃；流速为1.0 mL/min；检测波长为224 nm；进样量为10 μL。

2）对照品溶液的制备。精密称取尿囊素对照品适量，加甲醇制成每1 mL 含尿囊素80 μg 的溶液，得到对照品溶液。

3）供试品溶液的制备。精密称定山药饮片粉末（过三号筛）1.0 g，置于具塞锥形瓶中，加入稀乙醇25 mL，称定重量，超声提取30 min，放至室温，再称定重量，用稀乙醇补足损失的重量，滤过，即得。

1.2.2 线性范围考察 精密称定尿囊素对照品适量，加甲醇制成每1 mL 中含尿囊素1.279 4 mg 的对照品母液，精密吸取母液5 mL 加甲醇定容至10 mL，依次等比稀释，得到7 份系列浓度的对照品溶液，进样测定并记录相应峰面积。

1.2.3 精密度试验 对同一份供试品溶液连续进样6 次，测定尿囊素峰面积，并计算尿囊素含量的RSD。1.2.4 重复性试验 精密称定同一批样品6 份，按供试品制备方法处理并进样测定，根据尿囊素峰面积，计算供试品质量分数和其RSD。

1.2.5 稳定性试验 对同一份供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h 进样测定，记录不同时间的尿囊素峰面积，并计算尿囊素含量的RSD。

1.2.6 加样回收率试验 对同一批已知含量的样品6 份（未扣水分含量，尿囊素的含量为7.93 mg/g）精密称定，每份0.5 g，另用甲醇配制成每1 mL 中含尿囊素0.387 5 mg 的对照品溶液，精密加入10 mL 该对照品溶液至每份供试品样品中，再按“1.2.1”中供试品溶液的制备方法处理样品，进行测定，计算回收率。

1.3 正交试验

1.3.1 麸炒山药炮制工艺正交试验设计 在麸炒山药前期预试验及文献［9，10］检索的基础上，拟选用L9（34）正交试验（表1）安排试验，考察麦麸用量（A）、炒制时间（B）、炒制温度（C）等因素，以麸炒山药炒制性状及尿囊素含量作为双评价指标，对麸炒山药的炮制工艺进行优选。

表1 正交试验因素和水平

1.3.2 麸炒山药饮片性状评分标准 《中华人民共和国药典》（2020 年版）［1］中关于麸炒山药的性状描述为切面黄白色或微黄色，偶见焦斑，略有焦香气；《全国中药炮制规范》［12］（1988 年版）描述为表面淡黄色，偶有焦斑，略具焦香气。本研究根据正交试验加工制备的麸炒山药炮制品，依照《中华人民共和国药典》（2020 年版）及《全国中药炮制规范》（1988 年版）对其进行性状评分。

2 结果与分析

2.1 供试溶液的色谱

对照品溶液和供试品溶液的色谱见图1。由图1 可知，供试品麸炒山药的高效液相色谱中，尿囊素的出峰时间为10.963 min，与尿囊素对照品的出峰时间10.990 min 相当，表明麸炒山药中含有尿囊素。

图1 麸炒山药对照品溶液和供试品溶液的色谱

2.2 线性范围考察结果

将峰面积作为纵坐标（Y），将对照品进样质量作为横坐标（X），进行线性回归分析，得到回归方程为Y=3.258 5X+0.260 8，r=0.999 9；线性范围为0.199 9～12.794 0 μg，表明线性关系良好。

2.3 供试品精密度试验结果

供试品精密度试验结果表明，尿囊素峰面积的RSD为0.21%，说明该方法仪器精密度良好。

2.4 重复性试验结果

根据尿囊素峰面积计算样品的质量分数为7.93 mg/g，RSD为0.67%，表明该方法重复性良好。

2.5 稳定性试验结果

稳定性试验结果表明，尿囊素含量的RSD为0.43%，表明供试品溶液在24 h 内（样品盘25 ℃）稳定，可以满足测定需要。

2.6 加样回收率试验结果

加样回收率试验结果表明，尿囊素的加样回收率为96.78%（n=6），该方法回收率良好。

2.7 麸炒山药正交试验综合评分标准

为客观评价麸炒山药炮制品的质量，本研究以有效成分尿囊素含量及麸炒山药炮制品的外观性状为评价指标，采用综合评分法进行评定。拟定尿囊素含量指标权重系数为0.7，而饮片外观性状作为中药饮片的传统质量评价标准，是评价炮制饮片质量优劣的关键因素，故将其作为评价指标，拟定权重系数为0.3。综合评分=尿囊素含量评分+饮片外观性状评分［13］。正交试验及直观分析结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 麸炒山药工艺正交试验及直观分析结果（n=3）

表3 综合评分方差分析

由直观分析结果可知，各因素对麸炒山药炮制工艺的影响从大到小顺序依次为C、B、A；方差分析结果表明，炒制温度（C）对麸炒山药炮制工艺具有显著影响，麦麸用量（A）、炒制时间（B）对麸炒山药炮制工艺则无显著影响。故从直观分析及方差分析结果可知，麸炒山药的最佳炮制工艺为A3B1C1，即取山药片量15.0%的麦麸撒入180 ℃的炒药设备中，待麦麸冒烟时，向炒药机内投入300 g 山药片，炒制10 min，取出晾凉，筛去麸皮即可。

2.8 验证性试验

取山药片样品适量，按照上述优选的麸炒山药最佳炮制工艺，平行制备3 份样品（S1、S2、S3），观察记录麸炒山药饮片的性状，并对制备样品中的尿囊素含量进行测定，结果见表4。

表4 麸炒山药验证试验结果

由表4 结果可知，采用上述优选出的麸炒山药炮制工艺，所制备的样品性状及尿囊素含量均较稳定，表明该麸炒山药炮制工艺稳定可行。即确定麸炒山药最佳炮制工艺为取山药饮片量15.0%的麦麸撒入180 ℃的炒药设备中，待麦麸冒烟时，向炒药机内投入300 g 山药饮片，炒制10 min，取出晾凉，筛去麸皮即可。

3 讨论

本研究设计以麦麸用量、炒制时间和炒制温度为正交试验考察因素。中药饮片的外观性状则是传统评价指标，也是较为关键的饮片质量评价指标，其与山药有效化学成分尿囊素含量指标相结合，共同评价麸炒山药饮片质量，更具科学性和客观性。故本研究以尿囊素含量和麸炒山药饮片外观性状2 个指标作为正交试验的评价标准，优选麸炒山药炮制工艺，选择指标与文献［10，14］评价指标一致。

研究结果显示，炒制温度对麸炒山药尿囊素含量及饮片外观性状影响较大，而麦麸用量、炒制时间2 个因素则对麸炒山药饮片质量无显著影响。继而对正交试验优选出的麸炒山药炮制工艺进行验证，所制备出的3 批饮片质量稳定，表明该工艺稳定可行，重现性良好，可为麸炒山药的工业化生产提供一定的技术参考。