贵州苗药柳叶菜与混淆品粉花月见草的生药鉴别研究

吴向莉, 丁 宁, 孙庆文, 王 爽, 李蒙禹

(贵州中医药大学, 贵阳 550002)

柳叶菜科(Onagraceae)植物柳叶菜(EpilobiumhirsutumL.)以花、根、全草入药。花具有清热消炎,调经止带,止痛。治疗牙痛,急性结膜炎,咽喉炎,月经不调,白带过多。根具有理气活血,止血。治疗闭经,胃痛,食滞饱胀。全草治疗骨折,跌打损伤,疔疮痈肿,外伤出血[1]。植物柳叶菜全草在民间常作为苗药使用,其苗药名为“莴俩料”(vobliaxlios贵州黔东南地区),俗名阳光草[2],别名水朝阳花、鸡脚参、水丁香等,叶含粉背蕨酸、蔗糖和黄酮类化合物,味淡、苦,性凉。花用于治疗月经过多、白带过多、急性结膜炎、骨折、跌打损伤、疮疖痈肿、牙痛、咽喉炎、火烫伤;根用于治疗闭经、胃痛、食滞饱胀。全草主治风热感冒、音哑、咽喉肿痛、肺热咳嗽、水肿、淋痛、湿热泻痢、风湿热痹、疮痈、毒虫咬伤[3]。在研究中发现,枊叶菜与同科柳叶菜科不同属植物粉花月见草(OenotheraroseaL.)植株形态特征相似。二者全体皆被柔毛,叶片形态、花冠等特征极为相似[4]。粉花月见草功效:强筋壮骨,祛风除湿。主治风湿病,筋骨疼痛[5]。粉花月见草药材的研究报道较少,刘绍华[6]研究表明,粉花月见草草籽油富含γ-亚麻酸,具有潜在的广谱抗真菌、抗细菌作用等。王芳等[7]通过抑菌圈法和最低抑菌浓度(MIC)法发现粉花月见草富含黄酮类化合物山奈酚,全草具有广谱抗真菌、抗细菌的作用。化学成分和药理研究表明,花粉月见草根入药具有消炎、降血压、降血糖、降血脂等功效[8-9]。粉花月见草不仅具有以上药用功效,还具有食疗和保健的价值[10]。柳叶菜和粉花月见草两种药材的功效及主治迥异,而植物形态特征相似,在临床上容易混淆,且目前未见关于二者的鉴别研究报道,因此,为鉴别二者所做的生药研究具有十分重要的意义。本研究结果可为柳叶菜和粉花月见草的临床鉴别使用提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

生物显微镜(型号:UB102i,厂家:重庆澳浦光电技术有限公司),YHG-500-BS远红外快速恒温干燥箱,粉碎机(型号:800Y,永康市铂欧五金制品有限公司)。电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司,101-1AB型);高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司,FW100);电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司,BSA224S);四孔电热恒温水浴锅(常州市华普达教学仪器有限公司,HH-4);超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司,科导SK8210LHC);三用紫外分析仪(上海市安亭电子仪器有限公司,ZF-2),硅胶G薄层色谱板(青岛海洋化工厂,规格50 mm、100 mm,批号:20180528)

槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院,批号100081-201403);山奈酚对照品(中国食品药品检定研究院,批号110861-200011)。

水合三氯乙醛、稀甘油、间苯三酚、浓盐酸、稀碘液、蒸馏水等,其他所用试剂均为分析纯。

1.2 材 料

柳叶菜采于贵阳市乌当区,经贵州中医药大学丁宁老师鉴定为柳叶菜科柳叶菜的新鲜全草。粉花月见草采于贵阳市花溪区,经贵州中医药大学孙庆文老师鉴定为柳叶菜科粉花月见草新鲜全草(图1、图2)。

注:1为植物小枝;2为花纵剖;3为根。

注:1为原植物;2为生境;3为根;4为花;5为花解剖。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

2.1.1方 法

性状鉴别法:在日光灯或明亮处对新鲜植株采用进行眼观、手摸、鼻闻及工具测量等方法,对柳叶菜和粉花月见草全草进行外观及性状上的鉴别及描述。

横切面制片法:对柳叶菜和粉花月见草的根、茎、叶分别用清水洗净后,置于烧杯或托盘中用清水分别浸泡不同时间(根为24 h、茎为3～6 h、叶为0.5～1 h),选取适宜的实验材料对其进行徒手切片,挑取薄而完整的材料置于载玻片上,先滴加浓盐酸进行解离,再滴加间苯三酚染色,最后滴加稀甘油后盖上盖玻片,制成临时装片后镜检。

表面制片法:取成熟柳叶菜和粉花月见草叶片用镊子分别撕取其叶片的上下表皮,选取清晰完整且较大的表皮于载玻片上,滴加适量蒸馏水制成临时装片镜检。

粉末制片法:将新鲜柳叶菜和粉花月见草全草阴干,或可剪成小段放入烘箱中加热烘干,烘干后用粉碎机粉碎,过60目筛,取过筛后的粉末于一旁备用,分别制水装片和透化片。

水装片法:取适量过筛药粉于载玻片上,滴加一定蒸馏水,盖片即得水装片;透化装片为取适量过筛药粉于载玻片上,而后滴加1滴水合氯醛,再将载玻片置于酒精灯上加热至水合氯醛微沸后,滴加一滴稀甘油,两者分别置于光学显微镜下镜检。

2.1.2显微鉴别法结果

柳叶菜和粉花月见草根横切面显微特征(图3);

注:图为放大400倍。下同。

柳叶菜和粉花月见草茎横切面显微特征(图4);

图4 柳叶菜(左)和粉花月见草(右)茎横切面显微组织特征

柳叶菜和粉花月见草叶横切面显微特征(图5);

图5 柳叶菜(左)和粉花月见草(右)叶横切面显微组织特征

柳叶菜和粉花月见草叶表皮显微特征(图6);

图6 柳叶菜(左)和粉花月见草(右)叶表皮显微特征

柳叶菜和粉花月见草粉末显微特征(图7)。

图7 柳叶菜(左)和粉花月见草(右)粉末特征

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1薄层色谱鉴别方法

点样量:5～10 μL。

薄层板:硅胶G薄层板。

展开剂:1) 甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(9∶3∶1)。

2) 三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶2∶1.5)。

3) 二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶3∶1.2)。

显色方式:上行法展开,取出后挥干展开剂,喷以1%三氯化铝溶液,置紫外光灯(365 nm)下检视。

2.2.2供试品的制备

精密称取已干燥粉碎的粉花月见草和柳叶菜各2.0 g,分别加甲醇25 mL,浸泡25 min,超声45 min过滤。滤液蒸干后,加水溶解并定容于20 mL容量瓶中,用石油醚萃取2次,每次10 mL,弃去石油醚液。选择水液,加稀盐酸10 mL,水浴锅水浴60 min后取出,迅速用流水冷却,用乙酸乙酯萃取2次,每次10 mL,弃去水液,合并乙酸乙酯溶液,蒸干,残渣加5 mL甲醇溶解之后,用0.45 μm的微孔滤膜过滤,即得粉花月见草和柳叶菜供试品溶液。

2.2.3对照品的制备

分别取槲皮素、山奈酚对照品适量加甲醇溶解,分别制成每1 mL含0.3 mg的对照品溶液,备用。

2.2.4展开方法

按2020年版《中华人民共和国药典》(四部)通则0502薄层色谱法[11],吸取粉花月见草、柳叶菜供试品溶液、槲皮素对照品、山奈酚对照品溶液各5～10 μL,分别点样于同一硅胶G薄层板上,以3种不同展开系统展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,于紫外灯(365 nm)下检视。

2.2.5薄层色谱鉴别结果

系统1:甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(9∶3∶1);系统2:三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶2∶1.5);系统3:二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶3∶1.2)(图8)。

3 讨 论

3.1 原植物、性状、显微鉴别

通过对二者的鉴别研究发现柳叶菜原植物花瓣宽倒心形,叶披针状椭圆形至狭叶倒卵形,基部近楔形;茎横切面表皮外有单细胞非腺毛壁厚顶端不尖,中柱鞘纤维紧密连接成环状。叶横切面中叶肉组织含草酸钙方晶;全草粉末有晶鞘纤维含方形,花粉粒表面略光滑。粉花月见草叶片披针形或长圆形,基部呈细羽状裂,叶缘齿突状,花瓣宽倒卵形,雄蕊8枚排成平面;茎横切面表皮有多细胞非腺毛,其壁厚具有疣状突起。中柱鞘纤维断续连接;叶横切面上下表皮有多细胞非腺毛,顶端尖壁厚具有疣状突起;全草粉末无晶鞘纤维和方晶,花粉粒表面具有疣状突起。以上可以作为二者的显微鉴别要点(见表1)。

3.2 薄层色谱鉴别

本研究对比3种不同展开剂(甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸=9∶3∶1、三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸=6∶2∶1.5及二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸=6∶3∶1.2)对粉花月见草和柳叶菜在相同提取方法下制备的供试品进行了薄层色谱鉴别考察其结果相同,确定粉花月见草中含有山奈酚,柳叶菜含有山奈酚及槲皮素,因此,可以作为粉花月见草和柳叶菜的鉴别依据。