白薇黑斑病室内药剂敏感性测定研究

郭子旭，宗 琪，杨翰麒，汪恩道，高 锋

（吉林农业科技学院，吉林 吉林 132101）

白薇（Cynanchum atratum Bunge）为萝藦科（Asclepiadaceae）、鹅绒藤属（Cunanchum Linn.）多年生草本药用植物，广泛分布于日本、韩国和中国等多个亚洲国家。其中，我国大部分地区均有分布。以其根及根茎入药，清热散肿，生肌止痛，可用于治肾炎、水肿、支气管炎及风湿性腰腿疼等症，具有较高的药用价值和经济价值。近几年来，随着白薇市场需求的大幅度增加，野生资源日渐枯竭，东北辽吉地区开始进行人工归圃栽培，种植面积和年限逐年增加，由于白薇为新型种植药材，所以，白薇的一些病害鉴定及防治还未见系统报道。2020—2021年对辽吉地区的白薇人工种植基地调查发现，白薇黑斑病发生程度较为严重，表现为叶片、茎秆及果实产生褐色至黑色病斑，严重时导致整株枯死，对白薇的产量和品质产生了严重的影响，造成了巨大的经济损失。目前，各白薇种植基地的工作人员对防治白薇黑斑病的药剂选择还没有明确的认知，也没有系统化的防治措施。本项目将对8种药剂进行实验室内筛选试验，得出防治白薇黑斑病效果较佳的药剂，为白薇黑斑病的化学防治提供一定的理论及基础，并为后续的田间药剂筛选试验提供翔实的参考结果，以确保白薇人工种植的经济效益及社会效益。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌源

白薇黑斑病病原菌（由吉林农业科技学院B楼病理实验室分离并保存在4℃冰箱中）。

1.1.2 供试试剂

参加试验试剂详见表1-1。

表1-1 参试杀菌剂及生产厂商

1.2 试验方法

1.2.1 含药培养基的制备

根据每种供试杀菌剂的有效成分，首先需要计算好配制所需浓度杀菌剂的药剂用量，在精度为0.001 g的电子天平上称取计算所需的药量并溶于无菌水中，充分溶解后用灭菌的移液器移入灭菌培养皿，然后，将灭菌后冷却至45~50℃左右的PDA培养基倒入含药培养皿中，轻轻振荡，使药液培养基充分混合。最后，采用平板生长速率法测定杀菌剂对病菌的抑制效果，预实验中，8种杀菌剂均设置一个浓度，在预备试验的基础上每种杀菌剂设计5个处理，分别为：70%甲基托布津 WP 稀释成500、1000、1500、2000、2500倍液；10%苯醚甲环唑 ME稀释成500、1000、1500、2000、2500 倍液；43%戊唑醇SC 稀释成1500、2000、2500、3000、3500倍液；75%百菌清 WP 稀释成500、1000、1500、2000、2500倍液；75%多菌灵 WP 稀释成500、1000、1500、2000、2500倍液；50%福美双 WP稀释成500、1000、1500、2000、2500倍液；70%代森锰锌WP稀释成500、1000、1500、2000、2500倍液；12.5%烯唑醇WP稀释成500、1000、1500、2000、2500倍液，此外以无菌水作为空白对照。

1.2.2 菌饼接种

试验在超净工作台内进行，将供试药剂用紫外灯照射2~3h除菌后，在无菌条件下，挑选无污染的经过PDA培养基上培养活化5d后的供试菌种用直径为5 mm、已经灭菌的圆形打孔器打取菌饼，用接种针接种到不同浓度的含药培养基中央，最后，再将接种好的培养皿倒放入25℃恒温培养箱中培养。

2 结果与分析

2.1 供试药剂对白薇黑斑病病原菌的相对抑制率

由表2-1可知：70%甲基托布津、10%苯醚甲环唑、75%百菌清、75%多菌灵、50%福美双、70%代森锰锌、12.5%烯唑醇、43%戊唑醇在稀释倍数为500~2500倍液时，对白薇黑斑病菌的相对抑制率分别为5.65%~48.39%、60.81%~74.52%、9.83%~35.65%、65.00%~70.16%、34.35%~65.32%、23.23%~45.97%、51.94%~69.03%、44.35%~65.06%。通过与对照组相比较，8种不同杀菌剂以及不同浓度的同一种杀菌剂对白薇黑斑病菌的生长都有着不同程度的抑制作用，其中，对菌落生长的抑制作用、抑菌效果最好的为200 mg/L的苯醚甲环唑，其相对抑制率为74.52%，其次为1400 mg/L的多菌灵和250 mg/L的烯唑醇，这两种相对抑制率分别为70.16%、69.03%；相比之下，浓度为280 mg/L的甲基托布津、300 mg/L的百菌清抑制率就较小，其抑制率分别为5.65%、9.83%.虽然不同药剂的不同浓度以及同一种药剂的不同浓度的抑制率差别各不相同，但是，同一种药剂的不同浓度的抑制率都是随着药剂浓度的增加而增大。

表2-1 8种药剂不同浓度对白薇黑斑病病原菌的抑制率

2.2 供试药剂对白薇黑斑病病原菌的EC50值比较

由表2-2可知：70%甲基托布津、10%苯醚甲环唑、7 5%百菌清、7 5%多菌灵、5 0%福美双、7 0%代森锰锌、1 2.5%烯唑醇、4 3%戊唑醇对白薇黑斑病菌的EC50值分别为1368、14、2451、4、448、1899、39 mg/L和138 mg/L。测定结果表明，白薇黑斑病菌对各种药剂均表现敏感，其中白薇黑斑病菌对药剂多菌灵最为敏感，其EC50值为4 mg/L；其次为苯醚甲环唑，其EC50值为14 mg/L。白薇黑斑病菌对药剂百菌清最不敏感，其EC50值为2451 mg/L。

表2-2 8 种药剂对白薇黑斑病菌的毒力回归方程和EC50值

2.3 供试药剂对白薇黑斑病病原菌菌丝生长影响的差异显著性分析

由表2-3可知：在试验所用的8种杀菌剂中，药剂浓度为200 mg/L的苯醚甲环唑对白薇黑斑病菌的抑制率最好，其抑制率为74.52%。百菌清对白薇黑斑病菌的抑制率最低。苯醚甲环唑与戊唑醇对白薇黑斑病病原菌抑制效果差异不显著，多菌灵与烯唑醇对白薇黑斑病病原菌抑制效果差异性显著，其余各药剂对白薇黑斑病病原菌抑制效果之间差异性极显著。

表2-3 不同药剂对白薇黑斑病病原菌菌丝生长影响的差异显著性分析

3 结论与讨论

本试验研究了8种不同杀菌剂的不同浓度对白薇黑斑病菌相对抑制率的比较以及算出8种杀菌剂对白薇黑斑病菌的EC50值。

从不同药剂的不同浓度对该种病菌的抑制作用来看，其结果表明：70%甲基托布津、10%苯醚甲环唑、75%百菌清、75%多菌灵、50%福美双、70%代森锰锌、12.5%烯唑醇、43%戊唑醇在稀释倍数为500~4500倍液时，对白薇黑斑病菌的相对抑制率分别为5.65%~48.39%、60.81%~74.52%、9.83%~35.65%、65.00%~70.16%、34.35%~65.32%、23.23%~45.97%、51.94%~69.03%、44.35%~65.06%。其中，浓度为200 mg/L的苯醚甲环唑对白薇黑斑病菌的抑制率最高，其抑制率为74.52%，而抑制率最小浓度为280 mg/L的甲基托布津，其抑制率为5.65%，由此可见浓度为200 mg/L苯醚甲环唑对白薇黑斑病菌的抑制率是浓度为280 mg/L的百菌清13.19倍。

从8 种杀菌剂对白薇黑斑病菌的致死中浓度来看，其结果表明：白薇黑斑病菌对各种药剂均表现敏感，8 种杀菌剂对白薇黑斑病菌都有一定的抑制作用，并且不同药剂的不同浓度对该种病菌的抑制作用也有一定差异。7 0%甲基托布津、10%苯醚甲环唑、75%百菌清、75%多菌灵、50%福美双、7 0%代森锰锌、1 2.5%烯唑醇、4 3%戊唑醇对白薇黑斑病菌的EC50值分别为1368、14、2451、4、448、1899、39 mg/L和138 mg/L。其中白薇黑斑病菌对药剂多菌灵最为敏感，其EC50值为4 mg/L，而白薇黑斑病菌最不敏感的药剂是代森锰锌，其EC50值为2451 mg/L，是戊唑醇药剂浓度的612.75倍。

从差异显著性分析来看，各药剂间效果差异显著。在所试的8种药剂中，药剂浓度为200 mg/L的苯醚甲环唑对白薇黑斑病菌的抑制率最好，其抑制率为74.52%。百菌清对白薇黑斑病菌的抑制率最低。综合来看，200 mg/L的苯醚甲环唑对白薇黑斑病病原菌的抑制效果最好，其次为286.7 mg/L的戊唑醇和1400 mg/L的多菌灵。