蜂蜜中百里香酚含量的检测

2023-11-10谢思瑶刘仁清蒋小良李天宝周伟光

山西大同大学学报(自然科学版) 2023年5期

谢思瑶，刘仁清，蒋小良，李天宝，周伟光

（1.江门海关技术中心，广东江门 529000；2.佛山海关综合技术中心，广东佛山 528500；3.阳江海关综合技术服务中心，广东阳江 529500）

百里香酚为无色结晶粉末，具有抗菌、抗氧化、防蛀等特性，天然存在于唇形科植物百里香草、牛至草、麝香草等中，主要用于制香料、药物、指示剂、防腐剂[1-3]。在养蜂领域，使用农药造成的药物残留及蜂螨耐药性问题逐渐显现，植物源性抗螨产物因易于获得、毒性小，逐渐被关注和研究，张静、梁伟博、吴子毅等都对百里香酚杀灭蜂螨进行了研究，并收到了良好的效果[4-11]。2013年欧盟批准将百里香酚作为植物保护产品投放市场；2016 年加拿大批准登记百里香酚作为防控蜂巢瓦螨销售和使用；2020 年欧盟批准柠檬酸、山梨酸、百里香酚和香草醛制备物作为饲料添加剂；2022 年美国豁免百里香酚的残留限量。随着百里香酚的使用范围扩大和使用量增加，我们应关注其带来的负面影响，提前进行监测和研究检测方法，保证蜂蜜产量和质量，促进蜂蜜产业健康发展。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

安捷伦三重四级杆气相色谱质谱联用仪（安捷伦科技有限公司；Agilent 8890），分析天平（德国赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；TE214S），超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司；SCQ-5201B），高速离心机（德国西格玛公司；Sigma 3K15），固相萃取柱（天津博纳艾杰尔科技有限公司；Agela cleanert PEP），全自动氮吹仪（上海屹尧仪器科技发展有限公司；N1），有机相针式滤膜（尚腾科技（广州）有限公司；0.22 μm）。

百里香酚标准物质（北京曼哈格科技有限公司；纯度≽98%），正己烷（上海麦克林生化科技有限公司；色谱纯），水(自制；一级)。

2 实验方法

2.1 试样的制备及保存

无结晶的样品，搅拌均匀即可；有结晶的样品，在密闭条件下，于60 ℃以下的水浴中振荡，待样品全部融化后搅拌均匀，并迅速冷却至室温。以500 g作为试样，制备好的试样置于干净的样品瓶中，做好标记，于干燥阴凉的环境中密封保存。

2.2 标准溶液的配制

以正己烷为溶剂配制标准储备溶液，浓度为1 g/L，于4 ℃储存，配制标准工作溶液时将标准储备溶液进行逐级稀释，稀释后浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0、50.0 μg/L，用于绘制标准工作曲线。

2.3 样品前处理

称取2.000 g 试样，置于50 mL 带盖离心管内，加入10 mL 水，2 勺复合盐，于超声波清洗机中超声提取5 min，再加10 mL 正己烷，继续超声提取10 min，再以8 000 r/min 的速率离心5 min，取上清液过PEP柱，收集洗脱液，40 ℃氮气吹至近干，用正己烷定容至1 mL，摇匀。定容液过0.22 μm滤膜后收集于样品瓶中待测。

2.4 色谱条件

气相色谱条件：色谱柱为VF-1701ms（15 m ×250 μm ×0.25 μm），进样口温度为250 ℃，载气为高纯氦气（99.999%），载气流量为1.7 mL/min，进样方式为不分流进样，进样量1 μL，升温程序为初始温度40 ℃，保持1 min，以40 ℃/min的速率升到120 ℃，再以5 ℃/min 的速率升到240 ℃，再以20 ℃/min 的速率升到300 ℃，保持5 min。

质谱条件为离子源温度280 ℃，电子能量70 eV，扫描方式为SCAN和MRM。

3 结果与分析

3.1 质谱分析条件的选择

首先用SCAN 方式对百里香酚标物进行扫描（m/z:50～500），得到的谱图通过谱库检索确定前级离子（m/z135）及保留时间为7.41 min，再进行产物离子扫描，依次设置碰撞能为10 eV，20 eV，30 eV，40 eV，通过比较不同碰撞能下产生的子离子强度确定对应的子离子，然后进行MRM 扫描，确定最佳碰撞能。前级离子TIC 图与离子质谱图见图1-图5，具体分析参数详见表1。