注射用美罗培南含量测定不确定度评定

李娜,李惠,陈倩倩,王娜,邬丽琴,潘竟海,赵亚男

(巴彦淖尔市产品质量计量检测中心, 内蒙古 巴彦淖尔 015000)

任何测量都存在不确定度,测量不确定度是被测量客观值在某一量值范围内的一个评定[1]。任何检验结果都会在真值附近偏离,不确定度直接反映出检验结果的可靠性。不确定度量值越小检测结果越接近于真值。不确定度表征合理的赋予被测量值的分散性由多个分量组成,测量结果为被测量值的最佳估计[2]。是目前社会上普遍认可和建议使用的药品质量评价手段[3]。在药品检验过程中存在很多测量过程,而测量结果的准确性直接决定着药品质量的品质。当需要根据药品分析检验结果做出决策判断时,检测结果的可靠性是非常关键的。药品检验是药品监管工作的重要技术支持,检测结果对药品监管的公正性有直接的影响。药品检验机构使用经典误差理论方法计算检测结果误差的方法,有一定的局限性,因此药品检测结果不确定度开始逐步运用于药学领域[4]。不确定度评定对客观评价药品质量可靠性非常重要。不确定度评定在我国药品检测中的认识和应用是从实验室认证认可起步的。2003年中国实验室认可委员会对认可实验室提出不确定度测量方面的相关要求[5],推动了不确定度评定在药品检验工作中的应用。随后一些科研院所将不确定度评定引入到药品研究和药品标准制定的过程中。经过多年的应用积累,不确定度评定现如今已经进入到药品分析的日常工作。目前不确定度在药品质量分析评价方面应用非常广泛,药品质量评价人员将不确定度评定作为药品质量分析的重要工作内容。总之,不确定度评定既可以对药品检验过程进行分析,确定药品检验的关键影响因素,可以有效地提高药品检测结果的准确性及权威性[6-9],又可以为不同实验室、检验方法、检验仪器之间的数据认可提供统一的标尺[10]。 美罗培南是一种可以抑制细胞壁形成的具有抗菌作用的广谱碳青霉素烯类抗生素[11-12]。1994年,美罗培南以商品名“Mepem®”在意大利上市,1999年在中国境内上市,商品名为“美 平”(规格0.5 g)。2020年,深圳市海滨制药有限公司生产的注射用美罗培南在国内首家通过仿制药质量与疗效的一致性评价[13]。注射用美罗培南为美罗培南和无水碳酸钠按处方比例无菌分装制成,临床多用于治疗混合感染和严重感染[14]。

据国家药品监督管理局数据查询可知,目前国内注射用美罗培南批准文号27个。本文依据国家药品监督管理局标准YBH 12332020 、CNAS-GL006—2019《化学分析中不确定度的评估指南》[15]、JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》[16]分析评定注射用美罗培南含量测定不确定度,以提高注射剂含量测定的准确性,强化药品生产质量,为药品监管工作提供强有力的技术性支撑。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

e26958高效液相色谱仪、梅特勒CPA224S电子天平。美罗培南对照品(批号130506-202004,纯度86.8%)。注射用美罗培南;色谱纯乙腈;优级纯磷酸;分析纯三乙胺;娃哈哈纯净水。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent C18(5 μm,4.6 mm×250 mm) ;以0.1%三乙胺溶液-乙腈(体积比为93.5∶6.5)为流动相;检测器:二极管阵列检测器;检测波长为220 nm; 进样量10 μL;柱温: 30 ℃;流速:1.0 mL·min-1。

1.2.2 测定方法

供试品溶液 取本品10瓶,分别加适量水溶解,用流动相溶解并定量稀释至100 mL量瓶中,摇匀。精密量取5 mL置50 mL量瓶中,制成每1 mL中含美罗培南(按C17H25N3O5S计)0.5 mg的溶液,作为供试品溶液。对照品溶液 另取美罗培南对照品适量置25 mL量瓶中,加流动相溶解并定量稀释至刻度,制成每1 mL中含美罗培南0.5 mg的溶液。

1.3 测量模型

依据国家药品监督管理局标准YBH12332020的规定,按照高效液相色谱法测定注射用美罗培南含量的数学模型如下:

(1)

X:供试品标示百分含量,%;AX:供试品的峰面积;AR:对照品的峰面积;MR:对照品取样量g;VX1:供试品第一次稀释体积mL;VX2:供试品第二次稀释体积mL;VR:对照品稀释体积mL;B:规格(0.5g/瓶);PR:对照品纯度;V量:供试品溶液量取体积。

都市生态的内涵十分丰富，除了自然生态之外，还涉及到了都市的人文生态，因此都市生态不仅关系着城市居民的生活环境质量，同时也影响着其精神层面的发展[1]。通常情况下，我们会将都市生态分为两个部分，其中自然生态即是指城市环境，人文生态则是指一些历史遗留的古建筑和非物质文化遗产。当前阶段的市政工程管理存在明显的片面性，普遍存在重视自然生态保护，忽视人文生态保护的情况，对文化遗产的继承发展造成了严重的阻碍。

由高效液相色谱法测定注射用美罗培南含量测定的数学模型可知,方法的重复性,供试品的峰面积AX,对照品的峰面积AR,对照品取样量MR,供试品稀释体积VX,对照品稀释体积VR等是不确定度的主要来源。

2 不确定度评定

2.1 对照品的不确定度

2.1.1 对照品称量的相对不确定度urel(MR)

天平允差和天平示值变动是美罗培南对照品称量过程中的不确定度来源。由MR代表美罗培南对照品的取样量,采用B类方法对其进行评定。

天平允差不确定度u1(MR)和天平示值变动引起的不确定度u2(MR):通过查看电子天平检定证书可知,MS205DU天平检定证书示值最大允差为±0.000 05 g,假设计算标准不确定度时采用的是矩形分布。天平重复性误差为±0.000 1 g,计算标准不确定度时假设采用的是矩形分布则:

(2)

(3)

(4)

美罗培南对照品平行称量2份,因此,对照品称量分别引入的相对不确定度为:

(5)

(6)

(7)

2.1.2 对照品定容体积相对不确定度urel(VR)

容量瓶校准和温度变化对对照品溶液体积VR的不确定度产生影响,假设采用B类方法对其进行评定。容量瓶体积:25 mL容量瓶(A级)最大容量误差为±0.03 mL,计算标准不确定度时假设是三角形分布:

(8)

(9)

容量瓶体积和温度效应两个分量引起的对照品体积相对不确定度

(10)

色谱峰测定重复性体现了高效液相色谱仪对测定结果不确定度的影响。实验中对两份美罗培南对照品分别进样3针,2针共计进样5针,按峰面积计。由于对照品重复性测量次数较少,因此采用A类极差法方法对其进行评定[14]。美罗培南对照品1重复进样2针峰面积4 505 590和4 521 719,平均峰面积4 513 654,极差16 129。对照品2重复进样3针峰面积为4 563 481,4 577 231,4 586 035,平均峰面积4 575 582,极差22 554。

对照品1重复进样引起的相对不确定度urel(AR1):

(11)

(12)

(14)

(15)

2.2 供试品不确定度

2.2.1 供试品稀释体积VX相对不确定度urel1(VX)和urel2(VX)

容量瓶校准和温度变化对对照品溶液体积VR的不确定度产生影响,采用B类方法对其进行评定。供试品定容到100 mL量瓶中产生的相对不确定度用ur1(VX)表示,精密量取5 mL到50 mL量瓶中产生的相对不确定度用ur2(VX)表示。

容量瓶体积:100 ml容量瓶(A级)和50 mL容量瓶(A级)最大容量误差分别为±0.1 mL和±0.05 mL,计算标准不确定度时假设是三角形分布,则:

(16)

(17)

温度效应:容量瓶的体积膨胀远小于液体的体积膨胀,因此忽略液体的体积膨胀对不确定的影响。实验室的温度波动范围在±2 ℃之间,水的膨胀系数为2.1×10-4/℃,100 mL和50 mL容量瓶计算标准不确定度时假设是矩形分布,则:

(18)

(19)

(20)

(21)

2.2.2 供试品量取体积V量相对不确定度urel1(V量)

同理,由上述供试品稀释体分析可知,5 mL移液管体积和温度分别引入的不确定度为:

(22)

(23)

(24)

2.3 测量方法重复性相对不确定度urel(rep)

取注射用美罗培南10瓶,制成试品溶液测定含量,测得结果为97.89%,100.20%,97.36%,98.95%,100.10%,96.43%,99.26%,101.88%,98.03%,96.43%。由上述测量结果可知平均含量为98.65%,标准偏差为1.76。

(25)

2.4 合成相对标准不确定度

(26)

2.5 扩展不确定度

假设为正态分布时,概率p为0.95时k=2,则注射用美罗培南含量测定扩展不确定度

(27)

3 结果

根据上述不确定度分析结果可知,注射用美罗培南含量测定结果为98.65%±1.61% ,第二项为U95之值。由上述不确定度分析结果可知,对照品称量、供试品溶液精密量取体积和对照品峰面积对此次含量测定结果存在较大的影响。提示测量仪器的精密度、灵敏度、检验人员称量规范性等仪器和检验操作细节是影响检验结果的关键因素。建议开展药品检验前需确保检验仪器检定校准的合格性,加强对检验过程中涉及的精密仪器的日常维护保养工作,确保药品检验过程中检验仪器的最佳工作状态。药品检验工作中优先选择高精密度的电子称量天平或者通过增加对照品取用量、减少对照品和供试品溶液的稀释步骤的方式来提高对照品称量和供试品溶液制备的准确度。建议在开展药品分析检验的过程中尽量选用高纯度的标准品、使用精密的定容量具(A级或允差较小的器具)开展实验并注重控制实验环境条件。同时通过药品检验机构需不断地通过开展内外部培训不断提高药品检验人员专业素质,强化药品检验人员的实验操作技能。尽可能减少检验过程中对不确定度影响贡献大的实验因素,提高药品检验结果的准确性和可靠性。药品质量分析不确定度的评定有助于药品检验人员清晰地了解药品检验过程中的不同影响因子。并利用不确定度评定结果和来源分析有针对性地制定实验室内部质量控制计划,保障和提升实验室的检验能力和水平。尤其是当药品检验结果接近药品限度边缘时,有助于检验结果进行分析研判保障。同时还可以为药品质量标准的制修订提供合理的科学依据。