复方藤梨汤含药血清对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

武海博　梁燕　沈雷　范展　傅国惠

摘要：目的 探究復方藤梨汤含药血清对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响。方法 将24只雄性SD大鼠分为对照组和低、中、高剂量组[复方藤梨汤6、12、24 g/（kg·d）]，每组6只，制备含药血清处理人脑胶质瘤U251细胞。采用CCK-8法检测细胞活力，集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞术检测细胞周期分布与细胞凋亡，定量聚合酶链反应检测原癌基因C-myc、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）基因表达，Western blot法检测细胞凋亡蛋白［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8］以及β-连环蛋白（β-catenin）、上皮性黏附蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达。结果 选取体积分数10%的含药血清为最终剂量。与对照组比较，低、中、高剂量组细胞活力、克隆形成数、C-myc mRNA、CyclinD1 mRNA、Vimentin表达水平降低，处于S期细胞比例、Bax/Bcl-2比值、Caspase-3表达水平升高（P＜0.05）；低、高剂量组G1期细胞比例降低（P＜0.05）；中、高剂量组G2期细胞比例、β-catenin表达水平降低，Caspase-8和E-cadherin表达水平升高（P＜0.05）；高剂量组细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论 复方藤梨汤含药血清可促使人脑胶质瘤U251细胞阻滞于S期，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，通过调节β-catenin、E-cadherin和Vimentin表达抑制上皮间质转化。

关键词：神经胶质瘤；上皮-间质转化；细胞增殖；细胞凋亡；细胞增殖抑制药（中药）；复方藤梨汤含药血清；人脑胶质瘤U251细胞

中图分类号：R739.41文献标志码：ADOI：10.11958/20221840

Effects of Fufang Tengli Decoction drug-containing serum on proliferation， apoptosis and epithelial-mesenchymal transition of human glioma U251 cells

WU Haibo， LIANG Yan， SHEN Lei， FAN Zhan， FU Guohui

Department of Neurology， Nanyang Central Hospital， Nanyang 473000， China

Corresponding Author E-mail： fgh377818@sina.com

Abstract： Objective To explore effects of Fufang Tengli Decoction drug-containing serum on the proliferation， apoptosis and epithelial-mesenchymal transition （EMT） of human glioma U251 cells. Methods A total of 24 male SD rats were divided into the control group， the low-dose， medium-dose and high-dose Fufang Tengli Decoction groups [6， 12， 24 g/（kg·d）]， 6 rats in each group. After 10 d of continuous intragastric administration， blood samples was collected to prepare drug-containing serum， and human glioma U251 cells were treated for 24 h. The cells activity was detected by Cell Counting Kit-8. The cell cloning was detected by colony formation assay. The distribution of cells cycles and apoptosis were detected by flow cytometry. The expressions of proto-oncogene C-myc and cyclin D1 （CyclinD1） genes were detected by quantitative polymerase chain reaction. The expressions of B-cell lymphoma-2 （Bcl-2）， Bcl-2 associated X protein （Bax）， cysteine aspartase-3 （caspase-3）， caspase-8， β-catenin， epithelial cadherin （E-cadherin） and vimentin （Vimentin） were detected by Western blot assay. Results The drug-containing serum with 10% volume fraction was selected as the final dose. Compared with the control group， cells activity， number of clone formation and expression levels of C-myc， CyclinD1 mRNA and Vimentin were decreased， while numbers of cells in S phase and expression levels of Bax/Bcl-2 and Caspase-3 were increased in the low-dose， medium-dose and high-dose Fufang Tengli Decoction groups （P＜0.05）. The proportion of cells in G2 phase and expression level of β-catenin were decreased， while expression levels of Caspase-8 and E-cadherin were increased in the medium-dose and high-dose Fufang Tengli Decoction groups （P＜0.05）. Cell apoptosis rate was increased in the high-dose Fufang Tengli Decoction group （P＜0.05）. Conclusion Fufang Tengli Decoction drug-containing serum can block human glioma U251 cells in S phase， inhibit cell proliferation， induce apoptosis， regulate expressions of β-catenin， E-cadherin and Vimentin， and inhibit EMT.

Key words： glioma; epithelial-mesenchymal transition; cell proliferation; apoptosis; cell proliferation inhibitors （TCD）; Fufang Tengli Decoction; human glioma U251 cells

膠质母细胞瘤（glioblastoma，GBM）是最常见的神经系统原发性恶性肿瘤，发病部位呈多样性，会破坏功能区，致残、致死率高于其他脑部疾病，严重影响患者预后［1-2］。替莫唑胺、贝伐单抗等常用的抗胶质母细胞瘤药物毒副作用较大，会损伤正常脑组织，且长时间使用易形成耐药性［3］。因此，寻找新型抗GBM药物成为其治疗领域的研究热点。目前，中医药已广泛用于GBM的治疗，具有多靶点、多途径、多功效的优势［4］。中医认为，机体升降失衡，致清阳不升、浊阴不降，阻塞清窍，日久成积致瘤［5］。复方藤梨汤系用于GBM、胃癌、肝癌等恶性肿瘤治疗的经验方，全方具有燥湿化痰、软坚散结、益气通络的功效［6］。然而，目前有关其抗癌抑瘤的作用机制、治疗靶点等尚不明确。本研究采用复方藤梨汤含药血清体外干预人胶质瘤U251细胞，观察胶质瘤细胞增殖、凋亡及上皮间质转化能力的变化，以期为中医药抗GBM提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

SPF级雄性SD大鼠24只，体质量180～220 g，6～8周龄，购自湖南斯莱克景达实验动物公司，动物生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004。人脑胶质瘤细胞株U251购自中国科学院分子细胞科学卓越创新中心。复方藤梨汤组分购自中国北京同仁堂（集团）有限公司；细胞计数试剂盒8（CCK-8）购自江苏凯基生物科技股份有限公司；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒、细胞周期染色试剂盒购自杭州联科生物技术股份有限公司；Trizol试剂、超纯总RNA提取试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司；定量聚合酶链反应（qPCR）试剂盒购自南京诺唯赞生物科技有限公司；2×SYBR Green PCR Master Mix购自厦门生命互联科技有限公司；兔源抗B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8、β-连环蛋白（β-catenin）、上皮性黏附蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）抗体购自英国Abcam公司；鼠源抗3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）购自武汉博士德生物工程有限公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（H+L）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。NovoCyte?流式细胞仪（NovoCyte 2060R）购自艾森生物（杭州）有限公司；荧光PCR仪（CFX ConnectTM 实时）购自伯乐生命医学产品（上海）有限公司。

1.2 大鼠含药血清制备

藤梨根30 g、黄芪30 g、鳖甲20 g、冬凌20 g及当归20 g，加入600 mL水熬制复方藤梨汤，浓缩成含生药3 g/mL汤剂。参照文献［6］，60 kg成人每日复方藤梨汤用药量120 g，即2 g/（kg·d），换算成大鼠用药剂量为12 g/（kg·d）［7］，分别以0.5、1、2倍设定大鼠低、中、高剂量为6、12、24 g/（kg·d）。将大鼠于20～26 ℃、相对湿度50%～60%的条件下适应性喂养1周。采用随机数表法将大鼠分为对照组和低、中、高剂量组，每组6只。低、中、高剂量组分别给予6、12、24 g/（kg·d）复方藤梨汤灌胃，对照组大鼠给予15 mL/（kg·d）生理盐水灌胃，每次为标准计算剂量的一半，充分模拟人体服药习惯，不禁食，每日2次，连续灌胃10 d。于第10天灌胃后60 min腹腔注射10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉处死大鼠，腹主动脉采血5 mL，3 000 r/min离心30 min后保留上层血清制备含药血清，合并同组血清置于56 ℃水浴30 min灭活补体，用0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，置于-20 ℃冰箱备用。

1.3 细胞培养

配制含有10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素的DMEM培养基，重悬U251细胞，置于5% CO2、37 ℃培养箱中培养，待细胞贴满瓶底后添加0.25%胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞进行后续实验。

1.4 CCK-8法检测细胞活力

将细胞以5 000个/孔接种于96孔板，培养24 h后更换培养基体积分数为5%、10%、20%的各组含药血清，继续培养24 h，再添加10 μL/孔CCK-8试剂，避光培养2 h，于450 nm波长处检测各孔光密度（OD）值，细胞活力=实验孔OD值/对照孔OD值×100%。取细胞活力均在50%以上且差异最明显的给药体积分数进行后续克隆形成能力、细胞凋亡等实验。

1.5 集落形成实验

将细胞以100个/孔接种于6孔板，培养14 d，去除培养基，95%乙醇固定，滴加0.1%结晶紫并于4 ℃下静置染色过夜，次日取出复温45 min，光镜下计数克隆形成数（每个克隆数含有50个以上细胞，直径0.3～1.0 mm）。

1.6 流式细胞术检测细胞周期分布与细胞凋亡率

取各组细胞3×106个，以预冷PBS重悬，800 r/min离心5 min后留取底部细胞，并添加DNA Staining solution和Permeabilization solution染液涡旋混匀，37 ℃孵育40 min，800 r/min离心5 min后再添加PBS重悬细胞，上流式细胞仪检测细胞周期分布。取各组细胞3×106个，预冷1×Binding Buffer重悬细胞，再分别加入Annexin V-FITC和PI染料混匀，室温避光孵育10 min，再添加1×Binding Buffer至500 μL混匀，上流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。

1.7 qPCR检测细胞中相关基因mRNA水平

收集各组细胞，添加Trizol提取RNA，根据逆转录试剂盒合成cDNA，以cDNA为模板，构建qPCR体系（20 μL）：2×SYBR Green PCR Master Mix 10 μL，cDNA模板1 μL，上、下游引物各0.4 μL，去RNA酶水8.2 μL。反应条件：预变性95 ℃ 10 min；变性95 ℃ 10 s，退火52.3 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 30 s，共40个循环。原癌基因C-myc：上游5'-GACAGCAGCTCGCCCAAGT-3'，下游5'-CTCCAGCAGAAGGTGATCCAG-3'，产物大小254 bp；细胞周期蛋白D1（CyclinD1）：上游5'-CCCACTGGTACGATACGC-3'，下游5'-AGCCTGGGAAACACCC-3'，产物大小169 bp；GAPDH引物：上游5'-AAATCCCATCACCATCTTCCAG-3'，下游5'-TGAGTCCTTCCAGGATACCAAA-3'，产物大小320 bp。以GAPDH为内参基因，采用2-ΔΔCt法分析C-myc、CyclinD1 mRNA的相对表达水平。

1.8 Western blot法检测细胞中相关蛋白表达

收集各组细胞，于冰上裂解30 min，以12 000 r/min离心10 min后吸取上清液即为总蛋白。经BCA试剂盒测定浓度，置于100 ℃水浴变性5 min，各组取50 μg变形蛋白上样，行SDS-PAGE电泳1.5 h，湿法转膜至PVDF膜。5%脱脂奶粉室温封闭2 h，分别加入一抗Bcl-2、Bax、Caspase-3（均1∶1 500）和Caspase-8、β-catenin、E-cadherin、Vimentin、GAPDH（均1∶1 000），4 ℃孵育过夜，再置于二抗（1∶4 000）溶液室温孵育1 h，最后滴加ECL曝光液，曝光显影。应用Image J 1.7.0软件分析各蛋白条带，以目的蛋白灰度值与内参GAPDH灰度值比值为目的蛋白相对表达量。

1.9 统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD-t法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组细胞活力比较

5%体积分数低、中、高剂量组细胞活力分别为（89.79±3.44）%、（81.74±4.01）%、（79.93±3.73）%；10%体积分数低、中、高剂量组细胞活力分别为（80.81±6.51）%、（64.93±6.46）%、（59.78±3.05）%；20%体积分数低、中、高剂量组细胞活力分别为（59.07±6.68）%、（49.00±1.50）%、（38.19±5.03）%。10%体积分数低、中、高剂量组细胞活力均在50%以上，且差异明显，选择10%体积分数的含药血清作为最终剂量；与对照组细胞活力（100.00±0.00）%比较，低、中、高剂量组细胞活力依次降低（n=3，F=42.127，P＜0.001）。

2.2 各组细胞克隆形成能力比较

对照组和低、中、高剂量组细胞克隆形成数分别为（37.33±3.51）、（26.67±6.11）、（23.33±4.51）及（16.00±2.65）个，与对照组比较，低、中、高剂量组克隆形成数依次减少（n=3，F=12.254，P＜0.05），见图1。

2.3 各组细胞周期分布情况和C-myc、CyclinD1 mRNA相对表达水平比较

与对照组比较，低、中、高剂量组细胞处于S期比例增多，C-myc和CyclinD1 mRNA相对表达水平降低，低、高剂量组G1期比例降低，而中、高剂量组G2期细胞比例降低（P＜0.05）；与低剂量组比较，高剂量组处于S期细胞比例升高，C-myc mRNA相对表达水平降低，中、高剂量组G2期细胞比例和CyclinD1 mRNA相对表达水平均降低（P＜0.05）；与中剂量组比较，高剂量组S期细胞比例升高，G1期细胞比例降低（P＜0.05），见图2，表1、2。

2.4 各组细胞凋亡率及凋亡相關蛋白表达水平比较

与对照组比较，高剂量组细胞凋亡率升高，低、中、高剂量组细胞中Bax/Bcl-2比值和Caspase-3表达水平升高，中、高剂量组Caspase-8表达水平升高（P＜0.05）；与低剂量组比较，高剂量组细胞凋亡率和Caspase-3、Caspase-8表达水平升高，中、高剂量组细胞中Bax/Bcl-2升高（P＜0.05）；与中剂量组比较，高剂量组细胞凋亡率和Caspase-3、Caspase-8表达水平升高，见表3，图3、4。

2.5 各组细胞上皮间质转化标记物表达水平比较

与对照组比较，中、高剂量组β-catenin表达水平均降低，E-cadherin表达水平均升高，低、中、高剂量组Vimentin表达水平均降低（P＜0.05）；低、中、高剂量组β-catenin表达水平依次降低，高剂量组E-cadherin表达水平较低、中剂量组升高（P＜0.05）；中、高剂量组Vimentin表达水平较低剂量组降低（P＜0.05），见表4、图5。

3 讨论

复方藤梨汤方中黄芪、当归是气血双补的经典组合，鳖甲散结逐瘀，冬凌草、藤梨根清解热毒，全方攻补兼施，具有扶正祛邪，抗癌抑瘤的功效［8-9］。曹刘荐等［10］选取结直肠化疗患者为研究对象，在mFLFOX6化疗方案基础上加服复方藤梨汤治疗，发现患者生存质量明显提高，而且复方藤梨汤还可促进机体免疫功能提升，发挥减毒作用。本研究结果显示，复方藤梨汤含药血清处理后的U251细胞活力和克隆形成能力较对照组明显降低，表明复方藤梨汤含药血清可抑制U251细胞增殖。通过流式细胞术检测细胞周期分布显示，复方藤梨汤含药血清可诱导细胞大量停滞于S期，G2期细胞比例明显减少，提示复方藤梨汤阻滞了正常细胞周期发展。C-myc和CyclinD1在细胞周期中发挥重要调控作用，其中原癌基因C-myc在细胞周期紊乱细胞和大量肿瘤细胞中过表达，是细胞周期发展的必需信号；CyclinD1作为细胞周期蛋白，主要调控G1/S期，促进细胞生长［11-12］。本研究发现，复方藤梨汤含药血清处理后的细胞中C-myc、CyclinD1 mRNA相对表达水平较对照组降低，提示复方藤梨汤含药血清可能通过下调C-myc、CyclinD1基因表达，阻断细胞进入G2期，降低细胞增殖能力。

细胞凋亡机制缺陷是肿瘤细胞异常增殖的主要原因，将凋亡调节分子作为抗肿瘤药物筛选靶点已应用于临床，如酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼可靶向凋亡信号转导的Bcl-2家族成员，发挥杀伤慢性髓系白血病细胞的作用［13-14］。细胞凋亡主要涉及Bcl-2和Caspase这2个进化保守的蛋白家族。细胞应激状态下，抗凋亡因子Bcl-2被拮抗，解除对促凋亡因子Bax的抑制，促进细胞色素C释放入胞浆，形成凋亡复合体，活化Caspase-9，进一步激活下游Caspase-3、Caspase-8，促进细胞凋亡［15-16］。藤梨根是复方藤梨汤的抗癌主药。杨誉佳等［17］研究显示，藤梨根提取物可增强Bax、Caspase-3表达，促进人宫颈癌Hela细胞的凋亡。本研究发现，与对照组比较，低、中、高剂量组细胞中Bax/Bcl-2比值和Caspase-3表达水平升高，中、高剂量组Caspase-8表达水平升高，提示复方藤梨汤含药血清可能通过促进Bax/Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8表达，诱导细胞凋亡。

脑实质内浸润生长是弥漫性神经胶质瘤的典型特征，上皮-间质细胞转化在此过程中起关键作用，肿瘤细胞通过降低细胞间黏附作用，获得间质细胞表型，增强细胞侵袭、迁移能力，促进新生血管的生成，以应对微环境信号［18-20］。E-cadherin是细胞黏附分子，可结合多功能蛋白β-catenin，参与黏合带的形成，导致Wnt/β-catenin信号通路活性降低，抑制肿瘤细胞的侵袭与迁移［21］。Vimentin则是间质细胞标志物，其表达升高是上皮间质转化发生的重要信号［22］。吴幸冬等［23］研究表明，黄芪可调节上皮标志物E-cadherin的表达，影响肿瘤细胞迁移。本研究发现，复方藤梨汤含药血清可上调E-cadherin，下调β-catenin、Vimentin表达，从而抑制细胞上皮间质转化的发生。

综上所述，复方藤梨汤含药血清可促使人脑胶质瘤U251细胞阻滞于S期，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，并调节β-catenin、E-cadherin和Vimentin表达，抑制上皮间质转化。本研究为复方藤梨汤应用于人脑胶质瘤的治疗提供了参考依据，但该复方汤剂的抗癌作用机制仍有待深入分析，各指标间的剂量作用效果并不完全一致，考虑为含药血清干预时间尚短所致，后续将延长实验时间深入分析不同剂量含药血清对细胞增殖、凋亡及上皮间质转化相关基因表达的影响。

参考文献

［1］ BAGLEY S J，KOTHARI S，RAHMAN R，et al. Glioblastoma clinical trials：current landscape and opportunities for improvement［J］. Clin Cancer Res，2022，28（4）：594-602. doi：10.1158/1078-0432.CCR-21-2750.

［2］ DE BIASE G，GARCIA D P，BOHNEN A，et al. Perioperative management of patients with glioblastoma［J］. Neurosurg Clin N Am，2021，32（1）：1-8. doi：10.1016/j.nec.2020.09.005.

［3］ LE RHUN E，PREUSSER M，ROTH P，et al. Molecular targeted therapy of glioblastoma［J］. Cancer Treat Rev，2019，80：101896. doi：10.1016/j.ctrv.2019.101896.

［4］ 张悦，刘爱迪，范旭东，等. 中药靶向递送系统治疗脑胶质瘤研究进展［J］. 中草药，2021，52（17）：5358-5368. ZHANG Y，LIU A D，FAN X D，et al. Research progress of Chinese materia medica targeted delivery system in the treatment of glioma［J］. Chin Tradit Herb Drugs，2021，52（17）：5358-5368. doi：10.7501/j.issn.0253-2670.2021.17.028.

［5］ 滕舒慧，周梦婕，于冰清，等. 中药活性成分抗脑胶质瘤的作用机制及相应新剂型研究进展［J］. 中国药房，2021，32（23）：2934-2940. TENG S H，ZHOU M J，YU B Q，et al. Action mechanism of TCM active components against glioma and research progress of the corresponding new formulation［J］. China Pharm，2021，32（23）：2934-2940. doi：10.6039/j.issn.1001-0408.2021.23.21.

［6］ 何本求，劉莉，张芳，等. 复方藤梨汤对结直肠癌术后化疗不良反应及临床疗效的观察［J］. 中医临床研究，2021，13（19）：13-15. HE B Q，LIU L，ZHANG F，et al. Observation on clinical effcacy of the Fufang Tengli decoction on postoperative chemotherapy for colorectal cancer and adverse reaction［J］. Clin J Chin Med，2021，13（19）：13-15. doi：10.3969/j.issn.1674-7860.2021.19.003.

［7］ 陈奇. 中药药理研究方法学［M］. 3版. 北京：人民卫生出版社，2011：1261-1264. CHEN Q. Research methodology of TCM pharmacology［M］. 3rd ed. Beijing：People's Medical Publishing House，2011：1261-1264.

［8］ 李军，唐东昕，王镜辉，等. 基于数据挖掘分析国医大师刘尚义治疗卵巢癌用药特点与规律［J］. 辽宁中医杂志，2020，47（4）：42-46. LI J，TANG D X，WANG J H，et al. Medication characteristics and rules in the treatment of ovarian cancer based on data mining analysis by TCM master Liu Shangyi［J］. Liaoning J Tradit Chin Med，2020，47（4）：42-46. doi：10.13192/j.issn.1000-1719.2020.04.011.

［9］ 甘椿椿，金湛，魏晓鹏，等. 藤梨根化学成分及其体外抗肿瘤转移活性［J］. 中成药，2021，43（2）：403-407. GAN C C，JIN Z，WEI X P，et al.Chemical constituents from Actinidia chinensis and their antitumor metastatic activity in vitro［J］. Chin Tradit Pat Med，2021，43（2）：403-407. doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2021.02.020.

［10］ 曹劉荐，赖象权，何本求，等. 复方藤梨汤对结直肠癌术后化疗患者生存质量及免疫功能的影响［J］. 中华肿瘤防治杂志，2020，27（S1）：104-105. CAO L J，LAI X Q，HE B Q，et al. Effects of Fufang Tengli decoction on quality of life and immune function in patients with colorectal cancer undergoing postoperative chemotherappy［J］. Chin J Cancer Prev Treat，2020，27（S1）：104-105.

［11］ ZHANG G，ZHU Q，FU G，et al. TRIP13 promotes the cell proliferation，migration and invasion of glioblastoma through the FBXW7/c-MYC axis［J］. Br J Cancer，2019，21（12）：1069-1078. doi：10.1038/s41416-019-0633-0.

［12］ DEHGHANI-SOLTANI S，EFTEKHAR-VAGHEFI S H，BABAEE A，et al. Pulsed and discontinuous electromagnetic field exposure decreases temozolomide resistance in glioblastoma by modulating the expression of O6-methylguanine-DNA methyltransferase，Cyclin-D1，and p53［J］. Cancer Biother Radiopharm，2021，36（7）：579-587. doi：10.1089/cbr.2020.3851.

［13］ SIGHEL D，NOTARANGELO M，AIBARA S，et al. Inhibition of mitochondrial translation suppresses glioblastoma stem cell growth［J］. Cell Rep，2021，35（4）：109024. doi：10.1016/j.celrep.2021.109024.

［14］ KANTARJIAN H M，HUGHES T P，LARSON R A，et al. Long-term outcomes with frontline nilotinib versus imatinib in newly diagnosed chronic myeloid leukemia in chronic phase：ENESTnd 10-year analysis［J］. Leukemia，2021，35（2）：440-453. doi：10.1038/s41375-020-01111-2.

［15］ GOLLA C，BILAL M，DWUCET A，et al. Photodynamic therapy combined with Bcl-2/Bcl-xL inhibition increases the Noxa/Mcl-1 ratio independent of Usp9X and synergistically enhances apoptosis in glioblastoma［J］. Cancers （Basel），2021，13（16）：4123. doi：10.3390/cancers13164123.

［16］ ASHFAQUE A，HANIF F，SIMJEE S U，et al. Opuntiol inhibits growth and induces apoptosis in human glioblastoma cells by upregulating active Caspase 3 expression［J］. Asian Pac J Cancer Prev，2021，22（11）：3607-3613. doi：10.31557/APJCP.2021.22.11.3607.

［17］ 杨誉佳，陆远富，安强，等. 藤梨根提取物对宫颈癌的抑制作用［J］. 中华中医药学刊，2019，37（7）：1710-1714. YANG Y J，LU Y F，AN Q，et al. Inhibition of Actinidia Arguta extract on cervical cancer［J］. Chin Arch Tradit Chin Med，2019，37（7）：1710-1714.

［18］ SU X，YANG Y，GUO C，et al. NOX4-derived ROS mediates TGF-β1-Induced metabolic reprogramming during epithelial-mesenchymal transition through the PI3K/AKT/HIF-1α pathway in glioblastoma［J］. Oxid Med Cell Longev，2021，2021：5549047. doi：10.1155/2021/5549047.

［19］ 詹雯静，梁铭杰，刘媛，等. STAT3抑制剂及烟酰胺联合用药对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及机制研究［J］. 天津医药，2022，50（7）：686-692. ZHAN W J，LIANG M J，LIU Y，et al. Effects and mechanism of STAT3 inhibitor and nicotinamide combination on the inhibiting proliferation of hepatocarcinoma HepG2 cells［J］. Tianjin Med J，2022，50（7）：686-692. doi：10.11958/20212609.

［20］ DJEDIAI S，GONZALEZ SUAREZ N，EL CHEIKH-HUSSEIN L，et al. MT1-MMP cooperates with TGF-β receptor-mediated signaling to trigger SNAIL and induce epithelial-to-mesenchymal-like transition in U87 glioblastoma cell［J］. Int J Mol Sci，2021，22（23）：13006. doi：10.3390/ijms222313006.

［21］ BABU D，MUDIRAJ A，YADAV N，et al. Rabeprazole has efficacy per se and reduces resistance to temozolomide in glioma via EMT inhibition［J］. Cell Oncol （Dordr），2021，44（4）：889-905. doi：10.1007/s13402-021-00609-w.

［22］ LIU F，XU X H，LI C Y，et al. Rapid tumor recurrence in a novel murine GBM surgical model is associated with Akt/PD-L1/vimentin signaling［J］. Biochem Biophys Res Commun，2021，569：1-9. doi：10.1016/j.bbrc.2021.06.072.

［23］ 吳幸冬，唐德才. 黄芪配伍莪术对小鼠结肠癌细胞CT26黏附和迁移能力的影响［J］. 中医杂志，2020，61（13）：1176-1183. WU X D，TANG D C. Effects of compatibility of Radix Astragali seu Hedysa and Rhizoma Curcumae on adhesion and migration ability of colon cancer cell CT26 in mice［J］. J Tradit Chin Med，2020，61（13）：1176-1183. doi：10.13288/j.11-2166/r.2020.13.014.

（2022-11-09收稿 2023-02-05修回）

（本文编辑 陆荣展）