面膜类化妆品微生物污染检测分析及监管建议

卜红宇 吕玲英 王昆鹏*

1 内蒙古自治区药品检验研究院 （内蒙古 呼和浩特 010020）

2 呼和浩特市检验检测中心 （内蒙古 呼和浩特 010020）

内容提要： 目的：发现内蒙古市场面膜类产品的卫生质量问题，提出质量控制解决方案及建议。方法：依托2022年化妆品国家监督抽检，随机抽取内蒙古市售面膜类化妆品30批次，依据《化妆品卫生规范》（2015年版）对面膜产品进行微生物指标检测，分析面膜类产品的卫生质量情况。结果：研究表明，17个厂家30批次面膜中有27批次面膜产品菌落总数均为＜10CFU/g，其余3批次面膜产品菌落总数为30～85CFU/g；霉菌和酵母菌总数均为＜10CFU/g；耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌均未检出，30批次面膜产品微生物指标均符合规定。但不同厂家面膜产品菌落总数差异大，存在微生物污染的风险，采用MALDI-TOF MS对菌落总数计数平板上生长微生物进行鉴定主要为芽孢杆菌属微生物。结论：生产厂家需要强化生产程序标准化管理，监督部门应对面膜类产品的生产销售加强监督管理。

随着人们对化妆品的需求日益增长，化妆品的安全性也成为政府监管部门及公众关注的焦点。国家监管部门扎实推进国家化妆品监督抽检工作，旨在监督、发现化妆品质量安全问题，并有针对性地提出质量控制方案建议，以提高化妆品质量。本文对2016年～2020年国家药品监督管理局及我国各省市自治区药监部门公布的不合格化妆品信息进行统计分析，不合格化妆品主要是烫（染）发类、防晒类、美白/祛斑类、面膜类、祛痘/抗粉刺类等5大类，其中面膜类的主要问题是检出糖皮质激素及微生物超标[1-3]。化妆品营养丰富，在生产加工、贮存运输等各环节均有可能受到微生物污染，从而导致化妆品腐败变质，严重影响化妆品的卫生质量与使用的安全性，对人们的健康造成危害[4,5]。所以微生物指标的控制是化妆品安全使用的重要保障。本试验依托2022年化妆品国家监督抽检，随机抽检内蒙古市售面膜类化妆品30批次，依据《化妆品卫生规范》（2015年版）对面膜产品微生物指标进行检测，以期发现内蒙古市场面膜类产品的卫生质量问题，提出质量控制解决方案及建议。

1.材料与方法

1.1 一般材料

试验起止时间：2022年7月～2022年10月。

试剂：卵磷脂吐温80营养琼脂（青岛海博）、虎红培养基（广东环凯）、双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基（上海诺狄）、伊红美蓝琼脂（青岛海博）、SCDLP液体培养基（广东环凯）、十六烷三甲基溴化铵琼脂（广东环凯）、Baird Parker培养基（青岛海博）、血琼脂平板（广东环凯）。

菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]、大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10104]（中国食品药品检定研究院）。

样品：随机抽取内蒙古市场面膜类化妆品30批次，来自17个生产厂家，其中A厂家4批次，B厂家2批次，C厂家1批次，D厂家2批次，E厂家1批次，F厂家1批次，G厂家3批次，H厂家1批次，I厂家4批次，J厂家1批次，K厂家1批次，L厂家1批次，M厂家1批次，N厂家1批次，O厂家2批次，P厂家3批次，Q厂家1批次。

仪器设备：Autof ms 2000全自动微生物质谱检测系统（安图生物），AC2-4SI型生物安全柜（Esco集团），PL602-S型电子天平（梅特勒托利多集团），MIR-554型培养箱（日本三洋公司），高压蒸汽灭菌柜（德国洁定有限公司），超低温保存箱（海尔集团），Easy MIX型均质器（生物梅里埃法国公司），移液器（德国艾本德科学公司）。

1.2 方法

依据《化妆品卫生规范》（2015年版）对面膜产品微生物指标进行检测和判定[6]。取样品10g，加90mL灭菌生理盐水，制成1:10检液。

1.2.1 菌落总数检查实验操作。取1:10检液2mL分别注入灭菌平皿中，每皿1mL，倾注卵磷脂吐温80营养琼脂培养基，连续3个稀释级，每个稀释级平行制备2个平皿，置36°C培养48h，观察结果并计数。

1.2.2 霉菌和酵母菌总数检查实验操作。取1:10检液2mL分别注入灭菌平皿中，每皿1mL，倾注虎红琼脂培养基，连续2个稀释级，每个稀释级平行制备2个平皿，置28°C培养5d，观察结果并计数。

1.2.3 耐热大肠菌群检验实验操作。取1:10样品稀释液10mL，加入10mL双倍乳糖胆盐（含中和剂）液体培养基，置44°C培养箱中进行培养，48h后观察结果，若发酵管产酸产气，则取培养物划线接种于伊红美蓝琼脂平板，置36°C培养24h，观察菌落形态或有无生长。

1.2.4 铜绿假单胞菌检验实验操作。取1:10样品稀释液10mL，加入SCDLP液体培养基90mL，置36°C培养箱中进行培养，24h后用10μL接种环取培养物划线于十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板，置36°C培养箱进行培养，24h后观察菌落形态或有无生长。

1.2.5 金黄色葡萄球菌检验实验操作。取1:10 样品稀释液10mL，加入SCDLP 90mL，置36°C培养箱中进行培养，24h后用10μL接种环取培养物分别划线于BairdParker培养基平板和血平板，置36°C培养箱进行培养，48h后观察菌落形态或有无生长。

1.2.6 结果判定标准。菌落总数应＜1000CFU/g，霉菌和酵母菌总数应＜100CFU/g，耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌应不得检出。

1.3 MALDI-TOF MS鉴定

1.3.1 分离、纯化。卵磷脂吐温80营养琼脂上有菌落生长的，在菌落计数的基础上，进一步对生长菌落进行深入研究，对其进行微生物鉴定。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板和胰酪大豆胨琼脂培养基上，必要时进行二次纯化，置36°C培养24h。挑取分纯菌落，进行MALDI-TOF MS鉴定。

1.3.2 采用提取法鉴定。按照生产商提取试剂盒说明书（安图生物）进行操作，将待测微生物裂解后，上样于样品靶，放入质谱仪样品仓，进行MALDI-TOF MS鉴定。

2.结果

2.1 面膜类化妆品微生物污染检测结果

从表1可看出，17个厂家30批次面膜中有27批次面膜产品菌落总数均为＜10CFU/g，其余3批次面膜产品菌落总数为30～85CFU/g；霉菌和酵母菌总数均为＜10CFU/g；耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌及金黄色葡萄球菌均未检出，依据《化妆品卫生规范》（2015年版）标准规定进行判定，30批次面膜微生物指标均符合规定。然而不同厂家的菌落总数差异显著，其中A厂家2批次（A-2、A-4）和N厂家1批次面膜产品菌落总数分别为30CFU/g、45CFU/g及85CFU/g，其余厂家面膜类产品菌落总数均＜10CFU/g。这说明A厂家和N厂家产品存在微生物污染的情况，这提示该厂家生产环节中存在微生物污染风险点，需要强化生产程序标准化管理。

表1. 面膜微生物指标检测结果

2.2 计数平板生长菌落MALDI-TOF MS鉴定结果

MALDI-TOF MS是应用于微生物全细胞快速检测的技术，主要依据微生物特征蛋白指纹图谱分析，完成微生物的鉴定和分类。本试验采用MALDI-TOF MS对卵磷脂吐温80营养琼脂上生长的部分菌落进行分离纯化鉴定。从表2中可以看出，6株菌鉴定结果得分均＞9分（9.000～10.000分为种水平可信），其中有5株为芽孢杆菌，1株为海征微杆菌，芽孢杆菌占比83.3%。芽孢杆菌属（Bacillus），广泛分布在土壤、水、空气以及动物肠道等处，对外界有害因子抵抗力强，在有氧和无氧条件下都能存活。芽孢含水量低，含有耐热的小分子酶类及大量吡啶-2,6-二羧酸，且具有厚而致密的芽孢壁，所以芽孢属于高抗性微生物，对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性，是制药工业、食品加工业等行业常遇到顽固性微生物之一[7]。所以控制芽孢数量对控制生产车间环境污染有着重大意义。面膜类化妆品中芽孢杆菌的检出表明生产环节中存在芽孢污染，这可能是由于生产企业长期使用低效消毒剂；消毒剂使用比较单一，没有考虑消毒剂的轮换及消毒剂抑菌活性成分的异同；或者消毒计划里无杀芽孢的消毒剂。传统方式较难彻底杀灭芽孢，建议生产企业优化消毒方案，正确的选择能够杀灭芽孢的消毒剂，制定清洁和灭菌的标准操作规程并定期进行验证，以确定清洁和灭菌的有效性。

表2. 菌落总数计数平板生长菌落MALDI-TOF MS鉴定结果

3.讨论

微生物指标是评价化妆品卫生质量的重要指标。微生物污染反映了企业生产过程中存在质量控制风险点，包括原辅料的微生物控制、环境设备、操作人员的卫生情况、生产灭菌工艺及储存运输环境等生产各要素，生产企业应严格遵循《化妆品生产企业卫生规范》和《化妆品良好生产规范》，加强生产中微生物污染的监控。建议生产企业建立过程管理控制程序，在整个生产过程及储存过程中监测控制微生物的污染。生产企业应加强原料的验收管理和质量控制；加强库房、生产环境、设施设备的清洁消毒工作；工作人员要严格遵守卫生管理条例；生产过程关键控制点应增加消毒监测频次，并且关注芽孢的杀灭及控制，使微生物负载降至最低。另外，在化妆品标准方面，化妆品原料标准、产品安全性评价标准及产品有效性评价标准存在缺失、滞后等问题，应进一步加强相关标准体系建设，完善提升我国化妆品标准体系，促进化妆品质量提升。国家化妆品监管部门应进一步研究化妆品存在的安全风险问题，对风险较高的化妆品品类的生产及销售加强监督。