不同养殖地区乌苏里貉肉骨粉安全性能评价

2023-11-01谭展清李光玉刘可园赵海平邢宝瑞孙朝阳

饲料工业 2023年20期

■ 谭展清李光玉刘可园赵海平邢宝瑞孙朝阳胡肖崔凯

(青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109)

貉是我国重要的经济动物之一，其皮毛具有很高的经济价值。每年在貉取皮期会产生大量的屠体，其作为貉养殖的副产品并没有被充分利用，如果将貉屠体加工生产为肉骨粉，不但可以避免严重的资源浪费和环境污染，而且可以缓解我国动物源性蛋白质饲料紧缺的问题[1]。肉骨粉是指用畜禽屠宰后所剩的不宜人类食用的家畜躯体、骨、内脏等做原料，经加热、脱脂、干燥、粉碎制得的产品[2]，产品粗蛋白含量为50%～60%，且氨基酸组分较为平衡，价格较鱼粉便宜[3]。张亚飞[4]研究发现，将貂狐貉屠体按1∶2∶7 比例混合后，经上述高温高压工艺流程生产出的新鲜狐貉貂混合屠体肉骨粉粗蛋白含量为45.0%，粗脂肪含量为11.2%，钙含量为12.2%，总磷含量为6.0%，水分含量为8.5%，其营养成分含量符合《饲料用骨粉及肉骨粉》（GB/T 20193—2006）中的一级指标。本研究中的貉屠体肉骨粉与传统肉骨粉区别在于将貉完整屠体进行加工，除去正常生产过程中无法避免的少量杂质外，还混有少量毛、角、爪、粪便等物质。加工后的肉骨粉成品呈金黄色或黄褐色粉状，有肉香味，无腐败气味。肉骨粉是动物性蛋白饲料中一种重要原料，营养成分丰富，但由于原料和生产工艺差异较大，其营养成分也不尽相同[5]。大部分对毛皮动物胴体的处理是作为蛋白质饲料原料生产肉骨粉和宠物罐头（猫、狗粮）[6]。国内对毛皮动物胴体利用较少，2021年水貂、狐、貉取皮后的屠体约17.18万吨[7]，一些养殖户将毛皮动物屠体当作蛋白补充饲料使用，多采用高温水煮，绞碎，工艺简单、难以完全灭菌，质量无法保证。本研究以貉屠体为原料，采用湿法水解生产貉源肉骨粉，分析其营养价值，对其安全性进行评价，将毛皮动物屠体变废为宝的同时也为养殖户降低养殖成本，增加额外收入，减少对环境的污染，为貉源肉骨粉的生产和应用提供理论参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

材料：分别以潍坊、烟台、威海、菏泽、青岛、临沂、秦皇岛、唐山、沧州、衡水、吉林、松原、锦州、大连、哈尔滨、大庆、鸡西17个具有代表性的地市级的貉养殖地作为采样地区，随机从采样地区选取6月龄9 kg左右的貉各3 只，共51 只，取皮后的貉屠体作为试验样品，屠体冷冻保存无变质，于青岛农业大学单胃动物科学研究室利用烘箱、小型粉碎机等设备加工制成肉骨粉。

1.2 试验试剂及仪器

磺胺二甲基嘧啶（SMZ）、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺嘧啶、青霉素（Penicillin）、庆大霉素（Gen）、土霉素（Oxytetracycline）ELISA 试剂盒，以上所有试剂均购自江苏晶美生物技术有限公司；犬细小阳性血清（本实验室分离保存），Taq DNA 聚合酶、DL1000 Marker 为TaKaRa 产品；Agarosele le 琼脂糖、Gelstaim 10000×核酸染料均为Tran产品；DNA/RNA共提试剂盒为TianGEN产品。

药品：浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、商品硫酸铜、甲醇。

仪器：全自动凯氏定氮仪（K1160 型，济南海能仪器股份有限公司），玻璃索氏抽提装置、紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司），荧光和可见光凝胶（以色列DNR 成像系统有限公司），PCR 仪（PCRtouch、杭州晶格科学仪器有限公司），SCI小型高速离心机（SCILOGEX 赛洛捷克，上海科雅生物科技有限公司），DYY-6D 型电泳仪（北京市六一仪器厂），连续波长酶标仪（Infinite M Nano 型，帝肯上海贸易有限公司），可调式旋涡混合器（上海嘉鹏科技有限公司），商用高压锅（佛山市川粤智能商厨有限公司），生化培养箱（天津市莱玻特瑞仪器仪器设备有限公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 样品处理

貉屠体肉骨粉制备：将貉屠体放入绞肉机中将其混匀绞碎2 次，将绞碎好的肉骨泥用纱布包好放入高压锅中100 ℃高压2 h，拿出纱布包放入螺旋榨油器过滤水分和油脂，将肉骨泥摊匀在的托盘上，放入65 ℃的烘箱中8 h 拿出，冷却2 h 自然回温，粉碎处理，装入自封袋做好标签，放入-16 ℃冰箱保存。

1.3.2 17个地区貉源肉骨粉常规营养成分分析

水分含量测定参照GB/T 6435—2014；粗蛋白（CP）含量测定参照GB/T 6432—2018；粗脂肪（EE）含量测定参照GB/T 6433—2006；粗灰分含量测定参照GB/T 6438—2007；钙（Ca）含量测定参照GB/T 6436—2018；总磷（P）含量测定参照GB/T 6437—2018。

1.3.3 17个地区貉源肉骨粉重金属测定

重金属的检测由中国农业科学院特产研究所质量标准与检测技术研究中心完成，铅、总砷、汞、镉、铬的测定采用ICP-MS 法，铅、总砷、镉、铬测定参照GB/T 5009.268—2016，汞的测定参照GB/T 5009.17—2021。

1.3.4 17个地区貉源肉骨粉药物残留测定

磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺嘧啶、青霉素、庆大霉素、土霉素含量的测定方法按照江苏晶美生物科技有限公司所提供的试剂盒说明书方法进行。

1.3.5 17个地区貉源肉骨粉犬细小病毒检测

犬细小病毒检测采用RT-PCR 扩增技术，按照DNA/RNA共提试剂盒说明书方法从17个地区貉源肉骨泥中提取犬细小病毒DNA，引物合成参照GeneID:28715659，应用Primer Premier 5.0计算机软件设计并合成1对特异性扩增引物，目的片段大小为286bp（CPV）。

反应体系（20 μL）：Taq DNA聚合酶10 μL，上下游引物各1 μL，cpv灭活病毒模板2 μL，加水至20 μL。

PCR反应程序：98 ℃ 3 min，98 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40 个循环；最后72 ℃，7 min，4 ℃保存。

1.4 数据统计与分析

试验数据Excel 2019 进行初步处理后，应用Spss 26版统计软件对试验数据进行单因素方差分析，Duncan’s多重比较分析差异显著性。P<0.01 为差异极显著，P<0.05 差异显著。试验结果以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 貉源肉骨粉常规营养成分分析

貉源肉骨粉常规营养成分分析结果见表1。由表1 可知，17 个地区貉源肉骨粉粗蛋白、粗灰分、总磷、钙、水分含量满足《饲料用骨粉及肉骨粉》（GB/T 20193—2006）对肉骨粉的要求，其中粗蛋白含量和粗灰分含量符合饲料用肉骨粉一等级肉骨粉的要求，除潍坊貉源肉骨粉外，其余16 个地区貉源肉骨粉的粗脂肪含量均高于国标，其中菏泽貉源肉骨粉粗脂肪含量高达22.99%。

表1 各地区貉源肉骨粉中常规营养指标分析结果（%）

表2 饲料用肉骨粉质量指标（%）

2.2 貉源肉骨粉药物残留检测

由表3 可见，本试检测貉源肉骨粉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、青霉素、土霉素、庆大霉素含量均低于表4《食品中兽药最大残留限量》（GB/T 31650—2019）所规定的含量。

表3 各地区貉源肉骨粉中药物残留指标分析结果（ng/kg）

表4 食品中兽药最大残留限量（ng/kg）

2.3 貉源肉骨粉重金属检测

貉源肉骨粉药物残留检测结果见表5，由表5 可知，本试验测得貉源肉骨粉中重金属元素含量，铅、镉、总砷、铬和汞均低于《饲料卫生标准》（GB/T 13078—2017）规定的限量值（见表6），如果将貉源肉骨粉应用到饲料中，不会引起铅、砷、汞、镉、铬等重金属元素的安全问题。

表6 貉源肉骨粉重金属限量值（μg/kg）

2.4 貉源肉骨泥犬细小病毒检测

PCR 扩增结果阳性对照组在1.0%的琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像仪下可观察到大小约为286 bp貉细小病毒VP2基因的部分片段的片段，其余17个地区貉源肉骨泥均没有扩增出任何片段，说明这17 个貉源肉骨泥中并无犬细小病毒。

图1 PCR凝胶成像图

3 讨论

3.1 貉源肉骨粉的营养价值

由表1 的各地区貉源肉骨粉中常规营养指标分析结果中得知，17个地区的貉源肉骨粉粗蛋白含量均满足《饲料用骨粉及肉骨粉》（GB/T 20193—2006）对肉骨粉的要求，貉源肉骨粉的粗脂肪含量除了潍坊地区，其余地区均高于12%，分析原因可能是貉屠体的脂肪约占活体的19.96%[8]，由于貉源肉骨粉的制作过程是将整貉屠体进行加工，在处理过程中只是对屠体表面的脂肪进行简单地剔除，其次由于实验室条件有限，后续对高压水解后的肉骨泥处理采用螺旋榨油器，人工进行去油脂，实验室加工肉骨粉少了工业上高速离心，甩出油脂的步骤。本研究中菏泽貉源肉骨粉的粗脂肪含量最高，远高于国标，除了生产工艺问题，各貉养殖地区间也存在由于饲喂条件不同，菏泽貉子屠体相对肥胖的原因。张锐[9]在河北昌黎县随机选取当地水貂、狐、貉胴体按2∶7∶1 混合加工肉骨粉检测其常规营养成分，其粗蛋白、粗脂肪、钙、磷含量分别40.0%、15.2%、12.2%、6.0%，其中造成脂肪含量超标的关键原因是在实验室条件下生产肉骨粉，生产工艺问题导致脂肪含量高于肉骨粉国标之外，其余指标均符合饲料用肉骨粉国家质量标准。张亚飞[4]采用高温高压水解、固液分离等工厂化生产狐貉貂混合屠体加工成的肉骨粉中主要营养成分：粗蛋白含量为45.0%、粗脂肪含量为11.2%、钙含量为12.2%、总磷含量为6.0%、水分为8.5%，生产出的肉骨粉粗脂肪含量符合饲料用骨粉及肉骨粉国标要求说明在工厂化生产的条件下，通过脱脂工艺可解决粗脂肪含量超标问题，其余粗灰分、水分、钙、总磷含量均符合国标要求，毛皮动物加工成的混合肉骨粉从营养成分指标上是合格的。张锐[9]研究发现貉的平均屠宰率为61.99%，貉胴体的净肉率为59.79%，且貉胴体中蛋白质、油脂、钙磷含量较高，含有大量微量元素，是非常优质的动物源产品，也进一步说明了貉源肉骨粉屠体加工成肉骨粉可作为备选的优质蛋白质饲料原料。我国饲用蛋白资源严重匮乏以及大宗非粮蛋白资源利用率极低，制约了我国畜牧业现代化进程[10]。如能将貉源肉骨粉合理使用，大力发展蛋白饲料替代饲料中豆粕用量，可促进我国饲料和养殖业可持续发展。

3.2 貉源肉骨粉药物残留的评价

目前在貉养殖生产中使用可产生残留的药物添加剂主要有：β-内酰胺类、四环素类、大环内酰类、氨基糖苷类、磺胺类、微量元素等[11]。这些药物残留会对貉产生变态反应和毒性反应，还会使细菌产生耐药性，还可以产生致病菌交叉感染等[12]。养殖户在貉养殖过程中可能存在不规范使用药物的情况，造成畜产品中残留超标，从而危害畜体健康，通过粪、尿可直接进入土壤和水体，导致土壤中微生物对抗生素的抗性水平增加。研究发现抗菌药物能从饲料向畜禽粪便迁移，在猪、鸡的饲料中添加药物后，在畜禽的粪便中发现了药物的残留；对粪便进行堆肥发酵成为有机肥后，部分药物被降解，但仍有一些药物继续残留[13]。说明部分药物会通过由畜禽粪便堆肥制作有机肥的过程进入环境土壤的残留迁移途径，可能会导致药物残留恶性循环。目前针对饲料兽药残留量在猪肉、禽类身上的研究相对较多，但对于貉源肉骨粉的兽药残留量较少，本文选取在貉养殖过程中最常用的几种药物进行兽药残留检测，17个地区貉源肉骨粉药物残留量检测结果含量均远远低于《食品中兽药最大残留限量》（GB/T 31650—2019）所规定的含量，为促进貉源肉骨粉的开发和安全使用提供理论依据。

3.3 貉源肉骨粉重金属残留量的评价

饲料污染问题中所说的重金属元素实际上主要指汞（Hg）、镉（Cd）、铅（Pb）以及砷（As）等生物毒性显著的元素[14]。随着对动物所需微量元素的重视，动物所必需的元素（如铜、锌等）可能存在在饲料中被超量添加的情况，使得这些元素变成饲料中重金属污染源。重金属污染物不同于有机污染物，它们不易分解，可以在饲料和环境中长期残留，当其随饲料进入动物体内后一般不会被分解，而是蓄积在动物机体的某些器官（如肝脏和肾脏等）中，进入畜禽机体会导致受害畜禽生长发育缓慢，生长性能下降，患病甚至中毒死亡。同时，貉是食肉动物，当选择价格较低的饲料时，其重金属含量可能超标，会造成粪便中重金属含量增加，从而对土壤、作物、水体甚至人类生存构成威胁[15]。研究发现国产饲料级肉粉存在重金属污染问题，饲料是重金属进入动物体内的主要途径之一，国产饲料级肉粉重金属污染严重，可能是因为肉粉中动物内脏和皮毛重金属含量高，有效控制貉子养殖过程中含重金属类产品的使用量，是貉源肉骨粉生产和使用的前提条件，因此，对貉源肉骨粉的重金属检测是必要的。本文测得貉源肉骨粉中重金属元素含量表5 所示，貉源肉骨粉中的总砷、铅和铬汞和镉均低于限量值，不会引起重金属饲料安全问题。

3.4 貉源肉骨泥中犬细小病毒

貉细小病毒引起貉的细小病毒性肠炎是一种急性、烈性、高度接触性病毒性传染病，以病貉呕吐、剧烈腹泻、高发病率和高死亡率为主要特征，是危害貉养殖业发展的重要传染病之一[16]。貉细小病毒性肠炎常由犬细小病毒、水貂细小病毒或者狐狸细小病毒引起，最常见为犬细小病毒，犬细小病毒病的病原为细小病毒科细小病毒属的犬细小病毒，该病毒无囊膜，犬细小病毒对外界环境抵抗能力极强，病毒在pH 3～11 时稳定，能耐受65 ℃加热30 min 仍保持感染活性，低温长期存放对犬细小病毒的感染活性无明显影响[17]。本试验中对貉源肉骨泥犬细小病毒的检测结果均无犬细小病毒的存在，后续肉骨泥的加工过程中100 ℃高压2 h，进一步确保貉源肉骨粉的安全性。