高危型HPV感染不孕症女性外周血T淋巴细胞亚群分布特征及辅助生殖临床结局

刘 莹 孟令虎

湖北省十堰市人民医院(湖北医药学院附属人民医院) 1 妇产科 2 神经外科 442000

近年来,不孕症在临床的发病率有升高的趋势,不仅属于女性身体上的疾病,也是全球范围内的一种社会学问题;受地域、种族等多种因素的影响,不孕症在各个地区的发病率不同,我国的患病率在15%左右[1]。人乳头瘤病毒(HPV)是一种球形DNA病毒,其具有诸多亚型,并根据其致病力大小分为低危型、高危型等,高危型HPV极易感染宫颈,数据显示大约70%的女性一生中至少会感染1次HPV,且大部分为一过性感染,感染后12～30个月可被自身免疫系统清除自行消退,而持续感染则是引发宫颈癌的重要因素[2]。有研究[3]表明,高危型HPV感染会导致机体免疫功能异常,是引起女性不孕的危险因素。近年来,临床进行了高危型HPV感染外周血细胞免疫功能的研究,分析了各T淋巴细胞亚群的检测水平,但是结果不完全一致,机体清除被HPV感染的细胞主要依赖于T淋巴细胞数量和功能,目前对合并不孕症的患者的该方面的研究还比较少。随着我国生育政策的开放以及高龄夫妇比例的升高,不孕症患者接受辅助生殖技术逐渐增多,可明显提高临床妊娠率[4]。本文主要探讨高危型HPV感染不孕症女性外周血T淋巴细胞亚群分布特征及应用辅助生殖技术(体外受精—胚胎移植)的临床效果和妊娠结局。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年5月—2022年10月我院收治的62例宫颈高危型HPV感染不孕症患者为试验组,同时选取50例HPV感染阴性不孕症患者为参照组,试验组患者根据感染的HPV类型分为HPV16型组(29例)、HPV18型组(21例)、其他(12例)。参照组患者年龄25～46岁,平均年龄(36.82±2.75)岁;不孕病程1～6年,平均不孕病程(4.53±1.32)年;体质量指数(BMI)19～25kg/m2,平均BMI(22.43±1.23)kg/m2。试验组患者年龄26～47岁,平均年龄(36.44±2.56)岁;不孕病程1～6年,平均不孕病程(4.48±1.29)年;高危型HPV感染类型:单一感染27例,合并解脲脲原体(UU)感染14例;BMI 18～26kg/m2,平均BMI(22.78±1.41)kg/m2。两组资料经比较,差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准:试验组符合《妇科肿瘤生殖医学》[5]中高危型HPV感染的相关诊断标准,且经实验室检查确诊者;已婚女性;有正常性生活没有妊娠≥1年;符合辅助生殖技术的指征者等。排除标准:生殖道急性炎症者;免疫缺陷型疾病者;患有其他性传播疾病者;合并其他类型的恶性肿瘤者;既往有宫颈病变史者;对本研究采用的药物有过敏史者等。

1.2 方法

1.2.1 外周血T淋巴细胞亚群水平检测:患者入院后均采集外周静脉血2ml,经离心机高速离心后,取上清液,置于-20℃保存备用;采用德国默克公司的试剂盒进行检测,并在美国Taomsun多功能流式细胞仪上检测两组患者血清中外周血T淋巴细胞亚群水平(主要包括CD3+、CD4+、CD8+、NK),并计算CD4+/CD8+比值。

1.2.2 辅助生殖:患者均接受我院体外受精—胚胎移植进行辅助生殖,随访观察妊娠结局。在月经第19～21天对垂体降调节,注射用醋酸曲普瑞林1.0～1.8mg,14d给予重组促卵泡素口注射液150～300U启动。当出现2个卵泡的卵泡径线超过18mm ,给予促性腺激素5 000～10 000U,34～36h后取卵。取卵4～6h授精,密切观察授精情况,并及时对胚胎质量评估,选择1～3个胚胎进行移植,临床妊娠的判定标准:胚胎移植14d后检测血绒毛膜促性腺激素(HCG)>25U/L,妊娠6～8周B超监测有妊娠囊;如果临床妊娠12周前失去胚胎则为早期自然流产。

1.3 观察指标 比较两组患者外周血T淋巴细胞亚群水平、B细胞百分比、NK细胞百分比及CD4+/CD8+分布特征;比较试验组不同HPV感染类型及妊娠成功、失败患者外周血T淋巴细胞亚群水平及B细胞、NK细胞百分比。

2 结果

2.1 两组患者T淋巴细胞亚群水平及B细胞、NK细胞百分比比较 试验组患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞百分比及CD4+/CD8+比值低于参照组,CD8+高于参照组(P<0.05),两组外周血B细胞百分比无明显差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组患者T淋巴细胞亚群水平及B细胞、NK细胞百分比比较

2.2 试验组不同类型患者T淋巴细胞亚群水平及B细胞、NK细胞百分比比较 HPV16、HPV18及感染HPV其他类型的患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值及B细胞、NK细胞百分比无明显差异(P>0.05)。见表2。

表2 试验组不同类型患者T淋巴细胞亚群水平及B细胞、NK细胞百分比比较

2.3 两组患者CD4+/CD8+分布特征比较 试验组CD4+/CD8+比值在1.0～2.0正常范围的比例明显低于参照组,<1.0、>2.0的患者占比高于参照组(χ2=13.353,P=0.001<0.05)。见表3。

表3 两组患者CD4+/CD8+分布特征比较

2.4 试验组妊娠成功和失败患者T淋巴细胞水平及B细胞、NK细胞百分比较 对试验组随访统计显示,妊娠成功30例(48.39%),妊娠失败32例(51.61%),失败组患者外周血CD3+、CD4+、B细胞、CD4+/CD8+比值及B细胞、NK细胞百分比低于成功组,CD8+高于成功组(P<0.05)。见表4。

表4 试验组妊娠成功和失败患者T淋巴细胞亚群水平及B细胞、NK细胞百分比比较

3 讨论

女性不孕症的发病与免疫因素和生殖道感染密切相关[6]。HPV可通过性接触、病毒污染物传染等途径传播,进而诱发一系列病症,持续感染可破坏宫颈上皮细胞,使机体免疫应答发生紊乱,而机体免疫功能在清除HPV的过程中发挥了重要的作用,因此关注高危型HPV感染不孕症女性的机体免疫功能变化情况,对于预防患者疾病发展为宫颈癌,及时进行有效的干预,提升女性机体免疫功能,早期清除病毒,改善妊娠结局意义重大[7-8]。

机体免疫功能稳定的重要基础是淋巴细胞亚群间的平衡,正常机体免疫功能可发挥免疫监视功能,当机体免疫功能减弱时,对各种有害物质的监视清扫作用减弱,诱发HPV感染,其中T淋巴细胞是细胞免疫的主要效应细胞,目前衡量机体免疫状态的重要指标主要有CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞亚群[9-10]。其中CD3+能够识别特异性抗原,形成的信号传递到T细胞内部;CD4+在免疫调节中发挥了关键的作用,能够分化Th类细胞因子,和抗原提呈细胞进行结合;CD8+能识别外来病毒,CD4+/CD8+能直观反映感染程度和机体的免疫力水平,其比值下降提示T细胞免疫功能出现障碍,免疫系统发生紊乱。NK细胞是杀伤靶细胞,经过淋巴因子作用后杀伤力更强。

机体免疫环境复杂多样,免疫细胞、HPV感染,以及局部微环境均存在相互调节、制约和影响,HPV感染后可导致不孕症女性机体T淋巴细胞活化增殖[11]。本文中,试验组患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞百分比及CD4+/CD8+比值低于参照组,CD8+高于参照组(P<0.05)。表明与HPV感染阴性不孕症患者比较,高危型HPV感染不孕症患者存在免疫功能低下或免疫系统受损等现象,患者机体T淋巴细胞亚群水平参与高危型HPV感染的发生和发展过程。

高危型HPV感染以HPV16、18、52、58为主,本文进一步对不同感染类型不孕症患者的T淋巴细胞比例分析可见,感染HPV16、HPV18及其他类型的患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值及B细胞、NK细胞百分比无明显差异(P>0.05)。试验组CD4+/CD8+比值在1.0～2.0正常范围的比例明显低于参照组,<1.0、>2.0的患者占比高于参照组(P<0.05)。提示高危型HPV感染不孕症女性的机体免疫功能紊乱和异常现象更为明显和突出,机体自身清除HPV的能力降低,患者携带HPV的时间可能会更久,也会进一步影响患者的妊娠结局。

妊娠的建立和维持与机体免疫平衡关系密切,免疫细胞分布的些微变化能够影响宿主清理HPV;高危型HPV感染患者免疫平衡打破,更容易感染生殖道支原体、衣原体、真菌等,引起输卵管炎症、损伤和瘢痕的改变,从而导致输卵管性不孕的发生,另外当免疫功能发生异常时,可会因为产生抗精子抗体而影响妊娠结局[12-13]。本文结果显示,失败组患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值及B细胞、NK细胞百分比低于成功组,CD8+高于成功组(P<0.05)。该结果也进一步证实上述结论,表明高危型HPV感染不孕症女性的机体免疫功能与期妊娠不良结局密切相关。流产和免疫因素有关,由于妊娠失败患者由于其免疫系统功能障碍,难以将体内HPV自行清除,使得患者辅助生殖时易造成着床失败,导致妊娠率降低[14-15]。

综上所述,高危型HPV感染不孕患者外周血T淋巴细胞亚群明显降低,存在免疫功能紊乱状态,但与HPV感染类型无关,辅助生殖妊娠失败的患者免疫功能紊乱状态较成功的患者更为严重。在临床工作中,应密切关注高危型HPV感染不孕症患者的宫颈局部免疫抑制微环境,初步判定患者的HPV转归情况,并制定个性化的治疗和随访方案,提升临床对高危HPV感染不孕症的患者的临床管理。