早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞的变化及意义

朱由瑾，周向昭，吴远慧，温杰，高晓莉，冯冬梅

作者单位：河北北方学院附属第一医院皮肤科，河北 张家口075000

梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性性传播疾病，可侵犯全身各器官，导致病人出现硬下疳、腹股沟淋巴结肿大、皮肤丘疹或斑块、溃疡等多种症状或体征，并可引发骨骼梅毒、神经梅毒等，严重危害病人身心健康［1］。相关研究［2］报道，我国近年来梅毒的发病率仍居高不下，呈逐年上升趋势。但在临床上，有部分梅毒病人多年无明显临床表现，而梅毒血清试验反应阳性，呈现潜伏状态，称为潜伏梅毒，其难以被发现，对机体的影响更大。早期潜伏梅毒是指感染期限在2年以下的潜伏梅毒，因无临床症状且具有传染性，成为重要的传染源［3］。目前，已有研究［4］指出，T淋巴细胞介导的细胞免疫应答在梅毒病人的发病、疾病进展及转归中均发挥重要作用。另有研究［5］表明，梅毒血清固定病人外周血自然杀伤细胞（NK）水平低于体检健康人群，NK细胞功能失调与梅毒病情变化具有一定的关系。但关于早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的变化情况尚有待进一步探索。鉴于此，本研究特开展对照试验，分析T淋巴细胞亚群、NK细胞与早期潜伏梅毒发病的关系，为临床早期潜伏梅毒病人的诊治提供一定的理论参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年3月至2021年3月河北北方学院附属第一医院诊治的早期潜伏梅毒病人135例为观察组，另选取同期健康体检者116例为对照组。其中观察组男76例，女59例；年龄范围为24～57岁，年龄（35.19±5.87）岁；病程3个月至2年，病程（1.27±0.25）年。对照组男55例，女48例；年龄范围为21～59岁，年龄（34.52±6.13）岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。病人或其近亲属对研究方案签署知情同意书。

纳入标准：观察组均为经临床诊断的早期潜伏梅毒病人，无皮肤、黏膜、神经系统等临床症状，过去2年内非螺旋体试验、梅毒螺旋体试验均阳性，或有一期或二期梅毒史，或其性伴侣患有病程2年以内的一期、二期或潜伏梅毒；对照组均为体检健康者，无感染性疾病等，非螺旋体试验、梅毒螺旋体试验均阴性；均知情同意，且自愿参与。

排除标准：出现一期或二期梅毒临床症状或体征者；接受脑脊液检查而结果显示阳性者；自身免疫性疾病者；机体各系统及组织器官疾病者；近期急慢性期感染者；获得性免疫缺陷综合征；恶性肿瘤者；有精神疾患、无法配合研究者。

1.2 方法

1.2.1 外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞表达检测观察组于治疗前、对照组于体检时，抽取空腹静脉血4 mL，抗凝，离心，收集血清，采用流失细胞仪检测、并应用Canto自动软件计算外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK细胞绝对计数，并测算CD3+、CD4+、CD8+以及NK细胞占总淋巴细胞的百分比，并计算CD4+/CD8+，其中FACSC alibur流失细胞仪、相关试剂盒均购自美国BD公司，严格按照试剂盒说明书操作。

1.2.2 快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）初始滴度检测 所有病人均行RPR检测，抽取静脉血2 mL，分离血清，加入卡片上圆圈内，并设阴性、阳性对照，滴加RPR抗原，旋转摇动，观察结果；根据检测结果将病人分为RPR初始滴度≤1∶8组与＞1∶8组。

1.2.3 治疗方法 对经临床明确诊断的早期潜伏梅毒病人，均给予苄星青霉素治疗，肌内注射，240万单位/次，1次/周，共注射3次。

1.3 观察指标 （1）观察组与对照组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞检测结果比较（百分比与绝对计数）。（2）RPR初始滴度≤1∶8组与＞1∶8组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞检测结果比较。（3）早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞与RPR初始滴度的相关性。

1.4 统计学方法 数据分析采用SPSS 24.0软件，计量资料以表示，组间比较采用独立样本t检验；T淋巴细胞亚群、NK细胞与RPR初始滴度的相关性采用Spearman秩相关性分析法；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞检测结果比较 观察组外周血CD3+、CD8+绝对计数及所占比例与对照组比较均差异无统计学意义（P＞0.05），外周血CD4+绝对计数及所占比例、CD4+/CD8+所占比例均高于对照组（P＜0.05），NK细胞绝对计数及所占比例均低于对照组（P＜0.05）。见表1，2。

表1 观察组与对照组外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）绝对计数/（个/微升，）

组别对照组观察组t值P值例数116 135 CD3+1 316.52±259.84 1 379.94±263.07 1.92 0.057 CD4+679.84±159.33 765.41±164.29 4.17＜0.001 CD8+563.72±141.23 598.75±148.35 1.91 0.058 NK 351.27±63.28 331.62±64.59 2.43 0.016

表2 观察组与对照组外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）百分比/

表2 观察组与对照组外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）百分比/

组别对照组观察组t值P值例数116 135 CD3+/%64.85±12.95 67.79±10.76 1.96 0.051 CD4+/%29.73±5.84 37.36±7.26 9.07＜0.001 CD8+/%28.09±5.61 29.51±5.92 1.94 0.053 CD4+/CD8+1.06±0.21 1.27±0.25 7.14＜0.001 NK/%17.46±3.34 16.59±3.29 2.07 0.039

2.2 RPR初始滴度≤1∶8组与＞1∶8组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞检测结果比较 根据RPR检测结果，135例早期梅毒潜伏病人中RPR初始滴度≤1∶8者有61例，＞1∶8者有74例。RPR初始滴度≤1∶8组外周血CD3+、CD4+、CD8+绝对计数及所占比例均低于RPR初始滴度＞1∶8组（P＜0.05），且CD4+/CD8+所占比例低于RPR初始滴度＞1∶8组（P＜0.05），NK细胞绝对计数及所占比例均高于RPR初始滴度＞1∶8组（P＜0.05）。见表3，4。

表3 早期潜伏梅毒不同RPR初始滴度组外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）绝对计数/（个/微升，）

表3 早期潜伏梅毒不同RPR初始滴度组外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）绝对计数/（个/微升，）

组别≤1∶8滴度组＞1∶8滴度组t值P值例数61 74 CD3+1 325.79±273.48 1 424.58±264.91 2.12 0.035 CD4+715.84±145.32 806.27±131.06 3.80＜0.001 CD8+571.03±132.46 621.60±138.53 2.15 0.033 NK 345.75±68.42 319.97±60.14 2.33 0.021

表4 早期潜伏梅毒不同RPR初始滴度组外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）百分比/

表4 早期潜伏梅毒不同RPR初始滴度组外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）百分比/

组别≤1∶8滴度组＞1∶8滴度组t值P值例数61 74 CD3+/%66.01±9.48 69.28±8.63 2.10 0.038 CD4+/%34.25±6.17 39.92±7.34 4.80＜0.001 CD8+/%28.46±5.35 30.38±5.74 1.99 0.048 CD4+/CD8+1.20±0.23 1.31±0.26 2.58 0.011 NK/%17.32±3.45 15.99±3.16 2.34 0.021

2.3 早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞与RPR初始滴度的相关性 经Spearman秩相关性分析显示，早期潜伏梅毒病人外周血CD3+、CD4+、CD8+绝对计数与百分比均与RPR初始滴度呈正相关（P＜0.05），CD4+/CD8+比值与RPR初始滴度呈正相关（P＜0.05），NK细胞绝对计数、百分比均与RPR初始滴度呈负相关（P＜0.05）。见表5，6。

表5 早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）绝对计数与RPR初始滴度的相关性

表6 早期潜伏梅毒病人外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞（NK）百分比与RPR初始滴度的相关性

3 讨论

梅毒主要通过性接触传播，好发于多个性伴侣、男同性恋、无保护性交等人群，临床表现多种多样，亦可无症状而长期处于潜伏状态［6-7］。潜伏梅毒不易被发现，可对机体状态与心理健康造成严重影响，危害性极大［8］。梅毒发病机制复杂，已有研究［9］证实细胞免疫调节与该病的发生发展关系密切。外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞是机体免疫应答中的重要反应指标，在机体的整个免疫状态中举足轻重。为了解外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞在早期潜伏梅毒病人发病中的作用，本研究就此展开探讨。

CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均是T淋巴细胞亚群重要参数，可对机体细胞免疫状态进行良好地反应。CD3+细胞属于成熟的T淋巴细胞，可代表淋巴细胞亚群，主要执行机体细胞免疫功能，反映特异性免疫应答状态；CD4+细胞属于辅助性T细胞，具有免疫调节能力与特殊杀伤功能；多数CD8+细胞属于抑制性T细胞，部分属于毒性T淋巴细胞，可通过介导抗病毒性感染等细胞免疫反应而抑制机体免疫反应。正常情况下，CD4+、CD8+细胞相对稳定，维持机体免疫功能。相关研究［10］指出，T淋巴细胞免疫可抑制梅毒螺旋体，以保护机体避免感染。有研究［11］表明，兔感染梅毒后，CD3+细胞逐渐上升，在第18 d时达到最高峰，表现为睾丸炎，而随着症状的缓解逐渐下降到一个相对低水平，但数天后，再次持续上升，此推测可能在人体感染梅毒后亦可出现上述CD3+细胞变化情况。本研究中观察组病人外周血CD3+细胞绝对计数与百分比与健康人群无明显差异，可能是因此类病人属于早期无症状感染。CD4+细胞在机体抗梅毒螺旋体感染过程中具有重要作用，其可分泌白细胞介素-2、抗肿瘤因子等多种细胞因子，激活细胞迟发型超敏反应，从而发挥抗梅毒免疫［12］。而在抗梅毒螺旋体感染的免疫中，CD8+细胞在抑制机体免疫反应的同时亦可抑制梅毒螺旋体抗体生成，避免造成梅毒螺旋体扩散与潜伏［13］。本研究中观察组外周血CD4+绝对计数及所占比例、CD4+/CD8+所占比例均较对照组高，而CD8+绝对计数及所占比例与对照组相当，此与屈晓威［14］等研究结果相一致，提示早期潜伏梅毒病人可能存在一定的细胞免疫力增强情况，利于消除梅毒螺旋体。NK细胞是参与机体免疫调节的重要免疫细胞，可识别靶细胞与杀伤介质而非特异性杀伤病毒感染细胞，在清除梅毒螺旋体方面起着重要作用。本研究中观察组外周血NK细胞绝对计数及所占比例较对照组低，可能是因早期潜伏梅毒病人机体的防御功能受到一定的损伤，吞噬及杀伤梅毒螺旋体的功能降低，清除梅毒螺旋体的作用减弱，则引发机体被梅毒螺旋体感染［15］。相关研究［16］报道，梅毒血清固定病人NK细胞较健康者低，此与本研究结果基本符合。

本研究结果还发现，外周血CD3+、CD4+、CD8+绝对计数与所占比例以及CD4+/CD8+所占比例在RPR初始滴度≤1∶8的早期潜伏梅毒病人中较RPR初始滴度＞1∶8者低，而NK细胞绝对计数及所占比例在RPR初始滴度≤1∶8者中较RPR初始滴度＞1∶8者高，且经Spearman秩相关性分析，早期潜伏梅毒病人外周血CD3+、CD4+、CD8+绝对计数和百分比以及CD4+/CD8+比值均与RPR初始滴度呈正相关，而NK细胞绝对计数、百分比均与RPR初始滴度呈负相关，提示外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞变化情况可能与早期潜伏梅毒滴度存在一定的关系。早期潜伏梅毒滴度越高，则病人机体防御功能损坏越明显，NK细胞下降，刺激机体自身产生更强的细胞免疫应答能力以抵抗梅毒螺旋体感染，相关研究［17］显示，甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）滴度＜1∶8的梅毒病人CD3+、CD4+、CD8+细胞均低于TRUST≥1∶8病人，而NK细胞高于TRUST≥1∶8病人，此与本研究结果基本符合，进一步表明外周血T淋巴亚群、NK细胞的检测对早期潜伏梅毒滴度评估有积极临床意义。

综上，与健康人群相比，早期梅毒潜伏病人外周血CD4+、CD4+/CD8+升高，NK细胞降低，而CD3+、CD8+细胞无明显改变，但外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞变化均与早期潜伏梅毒滴度存在一定的关系，推测此可能参与了早期潜伏梅毒的发病过程。