宁夏某医院300 例肺炎病例病原谱分析

刘 翔， 杨丽娟， 沈 梅， 郝 琼， 郭邦成， 李 刚

（1.宁夏回族自治区疾病预防控制中心，银川 750004； 2.宁夏医科大学总医院，银川 750004）

肺炎是临床常见的一种下呼吸道感染性疾病，主要临床表现为呼吸急促、乏力、高热、咳嗽等症状，通常病情较重，严重危害人类健康，位居感染性疾病病死率之首，在人类总病死率中排第5～6 位[1]。引起肺炎的病原主要有细菌、病毒、支原体和衣原体等[2]。为了解宁夏银川地区某医院肺炎病例病原谱构成，本研究收集2019 年1 月至2020 年12 月宁夏医科大学总医院300 例住院肺炎病例的肺泡灌洗液进行检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 材料

2019 年1 月至2020 年12 月，收集在宁夏医科大学总医院就诊，有急性感染和呼吸道临床症状，且胸部X 线片提示肺部炎性改变，临床诊断为肺炎患者的支气管肺泡灌洗液样本300 份。

1.2 主要试剂和仪器

病毒总RNA/DNA 和细菌DNA 提取试剂盒购自德国凯杰公司，呼吸道病原体多重荧光PCR检测试剂盒购自北京卓诚惠生生物科技股份有限公司，荧光PCR 仪使用美国ABI 公司Q7 Pro和瑞士罗氏制药公司Roch 480Ⅱ。

1.3 方法

参照《发热呼吸道症候群病原学监测与检测技术》[3]中的病原种类，手工提取肺泡灌洗液样本总RNA 和DNA，采用荧光PCR 法对流感病毒、鼻病毒、冠状病毒、副流感病毒、偏肺病毒、博卡病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、肺炎克雷伯菌、百日咳鲍特菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、A 组乙型链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌共19 种病原体进行检测。实验过程设置内标、阳性对照和空白对照，检测结果CT 值＜35 且扩增曲线呈典型的S 形曲线判定为阳性，按照北京卓诚惠生生物科技股份有限公司产品说明书判定结果。

1.4 统计学方法

病例数据使用SPSS 21.0 软件进行统计学分析，样本阳性率用率（%）表示，图表制作均用Excel 2013 完成，对样本阳性率进行χ2检验。P≤0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病原谱

共检测300 份病例样本，检出15 种病原，阳性样本123 份，阳性率为41.00%，其中仅病毒感染样本29 份，阳性率为9.67%（29/300），占阳性样本的23.58%（29/123）；仅细菌感染样本68份，阳性率为22.67%（68/300），占阳性样本的55.28%（68/123）；细菌病毒合并感染样本26 份，阳性率为8.67%（26/300），占阳性样本的21.14%（26/123），各类病原阳性率差异有统计学意义（χ2=31.02，P＜0.01）。病毒感染病例以冠状病毒、鼻病毒、博卡病毒和腺病毒为主，共占病毒阳性病例的80%以上，呼吸道合胞病毒和肠道病毒未检出；细菌感染病例以肺炎支原体、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌为主，共占细菌阳性病例的85%以上，嗜肺军团菌和肺炎衣原体未检出，见图1。

图1 阳性样本分类病原谱分析

2.2 年度病原谱

123 例阳性样本中，2019 年74 例，阳性率59.68%（74/124），2020 年49 例，阳性率为27.84%（49/176），两年度间样本阳性率差异有统计学意义（χ2=30.481，P＜0.01）。2019 年感染病原以肺炎支原体、博卡病毒、冠状病毒和流感嗜血杆菌为主，2020 年感染病原以流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌和鼻病毒为主。肺炎支原体、博卡病毒、百日咳鲍特菌、流感病毒和偏肺病毒仅在2019 年检出，见图2。

图2 不同年度病原谱分析

2.3 年龄组病原谱

各年龄组中，细菌和病毒均有检出，且细菌感染均高于病毒感染。5 岁以下婴幼儿和5～15岁儿童阳性率较高，分别达到86.67%和88.89%，其余年龄组阳性样本检出率均在40%以下，各年龄组阳性样本检出率差异有统计学意义（χ2=45.235，P＜0.01）。从整体来看，65 岁以上老人病原谱最为多样，16～35 岁青少年和36～50 岁青壮年检出病原种类相对较少，肺炎支原体和流感嗜血杆菌在各年龄组均有检出，但肺炎支原体主要在15 岁及以下年龄组检出，阳性率达到71.43%（30/42），流感嗜血杆菌主要在36 岁及以上年龄组检出。肺炎链球菌除了16～35 岁年龄组，在其他年龄组均有检出，肺炎支原体和博卡病毒在5～15 岁年龄组占比较高，流感嗜血杆菌和冠状病毒在36 岁及以上年龄组占比较高，肺炎克雷伯菌和鼻病毒主要在51 岁及以上老年人群中检出，见图3。

图3 不同年龄组病原谱分析

2.4 混合感染病原谱

123 份阳性样本中，仅细菌或病毒单一感染84 例，混合感染病例39 例。混合感染病例中，2种病原感染30 例，3 种病原感染8 例，4 种病原感染1 例，其中细菌病毒合并感染和细菌间混合感染病例占97.44%（38/39），病毒间混合感染仅占2.56%（1/39）。2 种病原感染的病例中检出的病原以肺炎支原体、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、博卡病毒和冠状病毒为主；3 种及以上病原感染的病例中检出的病原以流感嗜血杆菌、鼻病毒、肺炎链球菌和肺炎支原体为主，见图4。

图4 阳性样本混合感染病原谱分析

3 讨论

目前，国内多数研究仅作细菌或病毒单一种类病原的感染调查和病原谱研究[4-8]，或者仅作儿童、老人的肺炎病例病原谱[9-10]，检测病原种类和年龄组覆盖不全，不能完整反映肺炎病例感染的真实病原谱情况，宁夏地区也未见呼吸道病原谱相关的研究和报道。本研究对300 份肺炎病例的肺泡灌洗液样本同时进行了常见引起肺炎的共19 种细菌和病毒的病原检测，覆盖了绝大部分引起呼吸道感染的病原，样本总阳性率为41%，检出最多的病原是肺炎支原体，与石鑫等[11]在黑龙江省的研究结果一致。此次研究中，有177 例病例未检出明确感染源，占总病例数的59.00%，分析可能有以下原因：一是，阴性病例中存在非感染性原因引发的肺炎病例；二是，受目前国内呼吸道多重病原检测方法和试剂的限制，此次研究未涵盖所有引起肺炎的病原；三是，住院病历显示大多使用抗生素和抗病毒药物治疗，致使患者体内病原感染量降低，受核酸提取试剂盒效率和检测方法、试剂盒灵敏度的限制，出现假阴性结果。

从整体病原谱来看，细菌性病原感染高于病毒性感染，单一病原感染高于多病原合并感染，细菌感染病例以肺炎支原体、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌为主，病毒感染病例以冠状病毒、鼻病毒、博卡病毒和腺病毒为主，各类病原阳性率差异有统计学意义。上述结果说明，下呼吸道感染的肺炎病例主要感染源是细菌，这与黎孟枫等[3]的结论（上呼吸道感染70%～80%由病毒感染引起，下呼吸道感染多由细菌引起）一致。

从年龄分布来看，各年龄组阳性病例中，细菌构成比均高于病毒，5 岁以下婴幼儿和5～15岁儿童阳性率较高，感染的主要病原体是肺炎支原体。其次为65 岁以上老人，病原谱呈现多样化，各病原检出情况差异无统计学意义。研究结果表明，肺炎支原体更容易诱发15 岁及以下儿童和婴幼儿肺炎；中老年人群由于机体免疫力衰退，对各类病原均易感。

从年度分布来看，2019 年感染病原体以肺炎支原体、博卡病毒、冠状病毒和流感嗜血杆菌为主，2020 年感染病原以流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌和鼻病毒为主，年度间阳性率差异有统计学意义。所有肺炎支原体阳性病例均分布于2019 年，结合2019—2020 年各年度病例数和年龄病原谱分布数据分析发现，肺炎支原体主要从学龄儿童中检出，而2020 年15 岁及以下病例仅有5 例，均未检出肺炎支原体。由此推断，学龄儿童可能既是肺炎支原体的易感人群，也是主要的传染源。2019 年和2020 年采取的防控措施是肺炎支原体感染差异明显的直接原因。

从混合感染来看，混合感染病例大多数伴有细菌感染，其中细菌病毒合并感染和细菌间混合感染病例占比超过97%，病毒间混合感染仅占2.56%，在2 种病原、3 种病原、4 种病原感染的病例中，肺炎支原体、流感嗜血杆菌和肺炎链球菌占比较高。

综上所述，本次研究从病原类别、年度、年龄组和多重感染4 个方面系统阐述了宁夏医科大学总医院肺炎感染病原谱分布情况，均是以细菌感染为主、病毒感染为辅，提示在肺炎住院患者的临床治疗过程中，可以优先考虑抗生素治疗方案，同时做好院内感染的防控，避免交叉感染，以提升临床治愈效果，减轻患者疾病负担。

本研究中，采用荧光PCR 方法对同一样本进行了19 种病原的检测，受检测试剂费用和项目经费的限制，未收集2019 年1 月至2020 年12月该院所有住院的肺炎病例进行检测，但所检测项目覆盖了大部分引起肺炎的病原，结果对临床肺炎病例诊治有一定的帮助。