HPLC 法测定参蒲益智缓释胶囊中β-细辛醚含量*

谢海龙，董晏含，孟怡彤，朱艳华

（1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江珍宝岛药业股份有限公司，黑龙江 虎林 158400）

石菖蒲主要有效成分为β-细辛醚和α-细辛醚，属于挥发油类成分[1]。具有“开心孔，通九窍，久服轻身，不忘不迷或延年[2]”之功效。现代药理学研究显示，其主要挥发油成分具有镇静、抗惊厥、抗糖尿病[3]、细胞保护、降血脂、支气管扩张[4]、抗炎[5]、止泻、抗溃疡和镇痛等功用[6]。本课题组选用石菖蒲配伍人参为主药制备了参蒲益智缓释胶囊，对治疗认知障碍类疾病尤其是血管性认知障碍（VCI）[7]有确切疗效。

本文应用高效液相色谱（HPLC）对参蒲益智缓释胶囊中β-细辛醚的含量进行测定，为后续临床研究提供质量监控基础。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与药品

BT25S 型电子分析天平（德国Sartorius 公司）；KQ5200DB 型数控超声波清洗器（永泰超声仪器有限公司）；A2010 型岛津液相色谱仪（日本岛津公司）。

β-细辛醚标准品（B30631 源叶生物）；吐温-80（AR 天津市光复精细化工厂）；参蒲益智缓释胶囊（实验室自制）；甲醇（色谱纯DIKMA 公司）；H3PO4（色谱纯 科密欧化学试剂有限公司）。

1.2 β-细辛醚分析方法的建立

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil GOLD（C18柱，250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶0.1%磷酸水溶液（65∶35）；检测波长：257nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10 μL。

1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取β-细辛醚对照品4.00mg，先用适量0.5%的吐温-80 溶液超声溶解，再定容至10mL 容量瓶内，摇匀，配制成浓度为400.00μg·mL-1的β-细辛醚标准储备液。然后精密吸取1mL 上述β-细辛醚标准储备液，用0.5%的吐温-80 溶液定容至10mL 容量瓶内，摇匀，配制成浓度为40.00 μg·mL-1β-细辛醚对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液的制备 取5 粒缓释胶囊，每粒胶囊约0.50g，倾出内容物，混匀，取适量颗粒并精密称定1.50g（约含188μL 石菖蒲挥发油），先加入适量0.5%的吐温-80 溶液使其超声溶解，再用0.5%的吐温-80 溶液定容于10mL 容量瓶内，摇匀滤过，作为供试品溶液。

1.2.4 空白溶液的制备 按照比例称取辅料，0.5%吐温-80 溶液作为溶剂溶解，定容至10mL 容量瓶内，摇匀，作为空白溶液。

2 结果与讨论

2.1 专属性实验

使用0.22μm 滤膜过滤空白溶液、对照品溶液和供试品溶液。将续滤液按照“1.2.1”的色谱条件进行分析，得到的谱图见图1。

图1 β-细辛醚高效液相色谱图Fig.1 HPLC of β-asarone

由图1 可见，β-细辛醚的保留时间约为10.8 min，且对照品、供试品的峰形较好，辅料峰未产生干扰，证明此方法的专属性好。

2.2 标准曲线的绘制

取“1.2.2”项下的对照品储备液，分别精密吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 置于10mL 容量瓶中，分别得到4.00、8.00、16.00、24.00、32.00 和40.00μg·mL-1的对照品溶液，过滤，取续滤液按照“1.2.1”的色谱条件进样分析，记录峰面积。以β-细辛醚浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到标准曲线方程为y=196959x-316847（R2=0.9993），标准曲线见图2。

图2 HPLC 法测定标准曲线Fig.2 Standard curve by HPLC method for determination

由图2 可见，β-细辛醚在4.00～40.00μg·mL-1浓度范围内，线性关系良好。

2.3 精密度实验

2.3.1 日内精密度 配制浓度分别为4.00、16.00、32.00μg·mL-1的对照品溶液，平行配制6 份，按照“1.2.1”的色谱条件进样，记录峰面积，计算日内精密度，结果见表1。

表1 日内精密度结果Tab.1 Intraday precision results

由表1 可见，β-细辛醚的日内精密度良好，符合方法学考察要求。

2.3.2 日间精密度 配制浓度分别为4.00、16.00、32.00μg·mL-1的对照品溶液，平行配制6 份，按照“1.2.1”的色谱条件进样，连续3d，记录峰面积，计算日间精密度，结果见表2。

表2 日间精密度结果Tab.2 Inter-day precision results

由表2 可见，β-细辛醚的日间精密度良好，符合方法学考察要求。

2.4 稳定性实验

按照“1.2.3”项下的供试品溶液配制方法，平行配制6 份溶液，按照“1.2.1”的色谱条件进样，分别在0、2、4、6、8、12 和24h 进样，记录峰面积，结果见表3。结果表明，β-细辛醚在24h 内稳定性良好。

表3 稳定性实验结果Tab.3 Results of stability test

2.5 加样回收率实验

取样品6 份，每份约150mg，精密称定，置10mL容量瓶中，分别精密加入β-细辛醚对照品溶液（40.00μg·mL-1）0.2mL，加0.5%的吐温-80 溶液超声溶解完全并稀释至刻度，分别精密吸取1mL 该溶液置5mL 容量瓶中，加0.5%的吐温-80 溶液超声稀释至刻度，摇匀，按照“1.2.1”的色谱条件进样，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表4。

表4 回收率测定结果Tab.4 Recovery determination results

由表4 可见，平均回收率的范围在80%～120%之间，且RSD 值小于2%，符合方法学考察要求。

2.6 含量测定

按照“1.2.3”项下方法制备3 批供试品溶液，按照“1.2.1”项下条件进样分析，计算每粒缓释胶囊中β-细辛醚的含量。结果显示，每粒胶囊中β-细辛醚含量分别为104.97、105.32、104.74μg，其平均含量为105.01μg。

3 结论

本文采用HPLC 法建立了参蒲益智缓释胶囊中β-细辛醚含量的测定方法，并进行了相应的方法学考察。结果表明，β-细辛醚在其浓度范围内线性关系良好，其专属性强，日内精密度、日间精密度均较好，稳定性、加样回收率的RSD 值均小于2%，符合方法学考察要求，准确度高，重现性好。为参蒲益智缓释胶囊的质量监控提供了数据支持。